用工程改造的T细胞治疗癌症的方法技术

本文中提供了包含共培养的慢病毒载体转导的自体抗原呈递细胞和T细胞的新的过继免疫治疗组合物以及在可用于治疗癌症和其他疾病和病症的患者特异性联合免疫治疗中使用其的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用工程改造的T细胞治疗癌症的方法相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.第119(e)节要求于2015年6月12日提交的美国临时专利申请号62/175,003的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。
本申请涉及癌症领域，特别地涉及包含与用嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)转导的自体T细胞共培养的自体抗原呈递细胞的组合物以及在患者特异性联合免疫治疗中使用的方法，所述自体抗原呈递细胞经表达患者特异性突变之癌症转录物的慢病毒载体转导。
技术介绍
癌症是对人健康最致命的威胁之一。仅在美国，每年癌症就影响近130万新患者，并且是继心血管疾病之后的第二大致死原因，占死亡人数的约四分之一。实体瘤是造成这些死亡中的大多数的原因。尽管在某些癌症的药物治疗方面有显著的进展，但是在过去20年里，所有癌症的总体5年生存率仅提高了约10％。癌症或恶性肿瘤以不受控制的方式快速转移和生长，使治疗变得极为困难。现代癌症治疗的困难之一是癌症的活检和诊断以及患者的有效治疗之间流逝的时间量。在此期间，患者的肿瘤可能会不受阻碍地生长，使得疾病在实施治疗前进一步发展。这负面地影响了癌症的预后和结果。嵌合抗原受体(CAR)是包含三个基本单元的杂合分子：(1)胞外抗原结合基序，(2)连接/跨膜基序，和(3)胞内T细胞信号传导基序(LongAH、HasoWM、OrentasRJ.Lessonslearnedfromahighly-activeCD22-specificchimericantigenreceptor.Oncoimmunology.2013；2(4)：e23621)。CAR的抗原结合基序通常在单链可变片段(scFv)(免疫球蛋白(Ig)分子的最小结合结构域)之后形成。还已经工程改造了替代的抗原结合基序，例如受体配体(即，IL-13已被工程改造为结合肿瘤表达的IL-13受体)、完整的免疫受体、文库来源的肽和先天性免疫系统效应分子(例如NKG2D)。CAR表达的替代细胞靶标(例如NK或γ-δT细胞)也在开发中(BrownCE等，ClinCancerRes.2012；18(8)：2199-209；LehnerM等，PLoSOne.2012；7(2)：e31210)。关于限定最活跃的T细胞群体以用CAR载体转导，确定最佳培养和扩增技术，以及限定CAR蛋白质结构本身的分子细节，仍然有重要的工作。CAR的连接基序可以是相对稳定的结构域，例如IgG的恒定结构域，或设计为延伸的柔性接头。可以使用结构基序(例如来源于IgG恒定结构域的那些)来使scFv结合结构域延伸远离T细胞质膜表面。这对于其中结合结构域特别接近肿瘤细胞表面膜的某些肿瘤靶标(例如对于双唾液酸神经节苷脂GD2；Orentas等，未发表的观察)来说可能是重要的。迄今为止，CAR中使用的信号传导基序总是包括CD3-ζ链，因为该核心基序是T细胞活化的关键信号。首次报道的第二代CAR的特征在于CD28信号传导结构域和CD28跨膜序列。该基序也用于含有CD137(4-1BB)信号传导基序的第三代CAR中(ZhaoY等JImmunol.2009；183(9)：5563-74)。随着新技术的出现，具有与抗CD3和抗CD28抗体连接的珠子的T细胞的活化以及来自CD28的经典“信号2”的存在不再需要由CAR本身编码。使用珠子活化，发现第三代载体在体外测定中并不优于第二代载体，并且它们在白血病的小鼠模型中并不提供优于第二代载体的明显益处(HasoW，LeeDW，ShahNN，Stetler-StevensonM，YuanCM，PastanIH，DimitrovDS，MorganRA，FitzGeraldDJ，BarrettDM，WayneAS，MackallCL，OrentasRJ.Anti-CD22-chimericantigenreceptorstargetingBcellprecursoracutelymphoblasticleukemia.Blood.2013；121(7)：1165-74；KochenderferJN等，Blood.2012；119(12)：2709-20)。第二代CD28/CD3-ζ中CD19特异性CAR的临床成功(LeeDW等，AmericanSocietyofHematologyAnnualMeeting.NewOrleans，LA；十二月，7-10，2013)和CD137/CD3-ζ信号传导形式(PorterDL等，NEnglJMed.2011；365(8)：725-33)证实了这一点。除了CD137之外，其他肿瘤坏死因子受体超家族成员(例如OX40)也能够在CAR转导的T细胞中提供重要的持久信号(YvonE等，ClinCancerRes.2009；15(18)：5852-60)。培养CART细胞群体的培养条件同样重要。癌症的CAR治疗的更广泛且更有效的改进中当前的挑战涉及到缺乏吸引人的靶标(compellingtarget)。创建细胞表面抗原的结合物(binder)目前容易实现，但是找到对肿瘤特异同时不伤害(sparing)正常组织的细胞表面抗原仍然是一个艰巨的挑战。使表达CAR的T细胞具有更高靶细胞特异性的一个可能的方法是使用组合CAR方法。在一个系统中，CD3-ζ和CD28信号单元被分在同一细胞中表达的两种不同CAR构建体之间；在另一系统中，两个CAR被表达在同一T细胞中，但其中一个具有更低的亲和力，因此需要首先接合供替选的CAR以用于第二个的完整活性(LanitisE等，CancerImmunolRes.2013；1(1)：43-53；KlossCC等，NatBiotechnol.2013；31(1)：71-5)。对于产生作为免疫治疗剂的单个基于scFv的CAR的第二个挑战是肿瘤细胞异质性。至少一个研究小组已经开发了胶质母细胞瘤的CAR策略，其中效应细胞群同时靶向多种抗原(HER2、IL-13Ra、EphA2)，以期避免靶抗原阴性群体的生长(HegdeM等，MolTher.2013；21(11)：2087-101)。基于T细胞的免疫疗法已成为合成生物学的一个新的前沿；构想多个启动子和基因产物以将这些高度强效的细胞引导至肿瘤微环境，在那里T细胞既可以逃避负调节信号，也可以介导有效的肿瘤杀伤。通过药物诱导的诱导型半胱天冬酶9构建体与AP1903的二聚化作用消除不期望的T细胞证实了一种方式，其中可以药理学地启动可控制T细胞群体的强大开关(DiStasiA等，NEnglJMed.2011；365(18)：1673-83)。通过诱饵受体的表达来产生对转化生长因子β的负调控作用免疫的效应T细胞群体进一步证明效应T细胞可以被工程改造以达到最佳抗肿瘤活性的程度(FosterAE等，JImmunother.2008；31(5)：500-5)。因此，尽管CAR似乎能够以类似于内源性T细胞受体的方式触发T细胞活化，但迄今为止这种基于CAR的技术的临床应用的主要障碍一直限于CAR+T细胞的体内扩增、输注后细胞的快速消失、令人失望的临床活性以及使用这样的CAR+T细胞进行癌症的诊断和及时治疗之间过长的时间。因此，本领域迫切而长期地需要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.过继免疫治疗组合物，其包含用一种或更多种编码单个或多个嵌合抗原受体(CAR)的慢病毒载体转导的自体T细胞群体，其中所述T细胞与用一种或更多种表达患者来源的肿瘤抗原的慢病毒载体转导的自体抗原呈递细胞共培养，从而产生活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体，所述活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体能够以患者特异性方式促进患者特异性抗肿瘤T细胞的体内扩增、持续存在，导致肿瘤稳定、减少和/或消除，和/或癌症的缓解和/或消除。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.12 US 62/175,0031.过继免疫治疗组合物，其包含用一种或更多种编码单个或多个嵌合抗原受体(CAR)的慢病毒载体转导的自体T细胞群体，其中所述T细胞与用一种或更多种表达患者来源的肿瘤抗原的慢病毒载体转导的自体抗原呈递细胞共培养，从而产生活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体，所述活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体能够以患者特异性方式促进患者特异性抗肿瘤T细胞的体内扩增、持续存在，导致肿瘤稳定、减少和/或消除，和/或癌症的缓解和/或消除。2.权利要求1所述的过继免疫治疗组合物，其还包含用一种或更多种编码单个或多个嵌合抗原受体的慢病毒载体转导的自体T细胞群体，其中所述T细胞群体额外用一种或更多种编码肿瘤特异性T细胞受体(TCR)的慢病毒载体转导以产生活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体，所述活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体能够以患者特异性方式促进患者特异性抗肿瘤T细胞的体内扩增、持续存在，导致肿瘤稳定、减少和/或消除，和/或癌症的缓解和/或消除。3.过继免疫治疗组合物，其包含用一种或更多种编码单个或多个嵌合抗原受体的慢病毒载体转导的自体T细胞群体，其中所述T细胞群体额外用一种或更多种编码肿瘤特异性T细胞受体(TCR)的慢病毒载体转导以产生活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体，所述活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体能够以患者特异性方式促进患者特异性抗肿瘤T细胞的体内扩增、持续存在，导致肿瘤稳定、减少和/或消除，和/或癌症的缓解和/或消除。4.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述肿瘤特异性T细胞受体(TCR)首先通过将用一种或更多种表达患者来源的肿瘤抗原的慢病毒载体转导的抗原呈递细胞(APC)与HLA相容的或患者特异性的T细胞共培养来鉴定。5.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述自体抗原呈递细胞来源于自体树突细胞或B细胞或混合物或外周血来源的淋巴细胞。6.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述肿瘤特异性T细胞受体(TCR)是HLA相容的或患者特异性的。7.权利要求1所述的过继免疫治疗组合物，其中含有天然T细胞受体(TCR)的自体患者特异性T细胞用慢病毒载体转导以在与用一种或更多种表达患者来源的肿瘤抗原的慢病毒载体转导的自体抗原呈递细胞共培养期间或之后表达嵌合抗原受体(CAR)以产生活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体，所述活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体能够以患者特异性方式促进患者特异性抗肿瘤T细胞的体内扩增、持续存在，导致肿瘤稳定、减少和/或消除，和/或癌症的缓解和/或消除。8.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述含有患者特异性、肿瘤特异性T细胞受体(TCR)的自体患者特异性T细胞用慢病毒载体转导以在与用一种或更多种表达患者来源的肿瘤抗原的慢病毒载体转导的自体抗原呈递细胞共培养期间或之后表达嵌合抗原受体(CAR)以产生活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体，所述活性患者特异性自体抗肿瘤T细胞群体能够识别所述肿瘤特异性T细胞受体(TCR)并且能够以患者特异性方式促进患者特异性抗肿瘤T细胞的体内扩增、持续存在，导致肿瘤稳定、减少和/或消除，和/或癌症的缓解和/或消除。9.权利要求1或2所述的过继免疫治疗组合物，其中所述患者来源的肿瘤抗原通过患者活检和核苷酸测序进行鉴定以鉴定突变体组内的突变RNA转录物。10.权利要求1或2所述的过继免疫治疗组合物，其中所述自体抗肿瘤T细胞群体包含自体抗原呈递细胞(APC)，所述自体抗原呈递细胞包含患者特异性树突细胞或B细胞或混合物或外周血来源的淋巴细胞。11.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述CAR包含至少一个胞外抗原结合结构域、至少一个接头结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域。12.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述CAR的至少一个胞外抗原结合结构域包含与所述抗原结合的抗体的至少一个单链可变片段。13.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述CAR的至少一个胞外抗原结合结构域包含与所述抗原结合的抗体的至少一个重链可变区。14.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述CAR的至少一个胞外抗原结合结构域、所述CAR的至少一个胞内信号传导结构域或两者通过接头或间隔子结构域与跨膜结构域连接。15.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述CAR的胞外抗原结合结构域之前是前导肽。16.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述CAR的胞外抗原结合结构域靶向抗原，所述抗原包含CD19、CD20、CD22、ROR1、TSLPR、间皮素、CD33、CD38、CD123(IL3RA)、CD138、BCMA(CD269)、GPC2、GPC3、FGFR4、c-Met、PSMA、糖脂F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1TCR、MAGEA3TCR或其任何组合。17.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述CAR的胞外抗原结合结构域包含抗CD19scFV抗原结合结构域、抗CD20scFV抗原结合结构域、抗CD22scFV抗原结合结构域、抗ROR1scFV抗原结合结构域、抗TSLPRscFV抗原结合结构域、抗间皮素scFV抗原结合结构域、抗CD33scFV抗原结合结构域、抗CD38scFV抗原结合结构域、抗CD123(IL3RA)scFV抗原结合结构域、抗CD138scFV抗原结合结构域、抗BCMA(CD269)scFV抗原结合结构域、抗GPC2scFV抗原结合结构域、抗GPC3scFV抗原结合结构域、抗FGFR4scFV抗原结合结构域、抗c-MetscFV抗原结合结构域、抗PMSAscFV抗原结合结构域、抗糖脂F77scFV抗原结合结构域、抗EGFRvIIIscFV抗原结合结构域、抗GD-2scFV抗原结合结构域、抗NY-ESo-1TCRscFV抗原结合结构域、抗MAGEA3TCRscFV抗原结合结构域，或其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，或其任何组合。18.权利要求2或3所述的过继免疫治疗组合物，其中所述CAR的接头或间隔子结构域来源于CD8的胞外结构域，并与跨膜结构域连接。19...

【专利技术属性】
技术研发人员：博罗·德罗普利奇，里马斯·奥伦塔什，迪娜·施奈德，温弗里德·克鲁格，
申请(专利权)人：莱蒂恩技术公司，
类型：发明
国别省市：美国,US