【技术实现步骤摘要】
本申请涉及癌症领域，特别地涉及包含编码功能性嵌合抗原受体的至少两种载体的组合物及在患者特异性免疫治疗中的使用所述组合物的方法。
技术介绍
1、癌症是对人健康最致命的威胁之一。仅在美国，癌症每年就影响近130万新患者，并且是继心血管疾病之后的第二大死因，占死亡的约四分之一。实体瘤是造成这些死亡中的大多数的原因。尽管在某些癌症的医学治疗方面有显著的进展，但是在过去20年里，所有癌症的总体5年生存率仅提高了约10％。癌症或恶性肿瘤以不受控制的方式迅速生长和转移，这使治疗极为困难。现代癌症治疗的困难之一是癌症的活检和诊断与患者的有效治疗之间流逝的时间量。在此期间，患者的肿瘤可能会不受阻碍地生长，使得疾病在实施治疗前进一步进展。这不利地影响了癌症的预后和结局。
2、嵌合抗原受体(duocar)是包含三个基本单元的杂合分子：(1)细胞外抗原结合基序，(2)连接/跨膜基序，以及(3)细胞内t细胞信号传导基序(long ah,haso wm,orentasrj.lessons learned from ahighly-active cd22-specific chimeric antigenreceptor.oncoimmunology.2013；2(4):e23621)。car的抗原结合基序通常在免疫球蛋白(immunoglobulin，ig)分子的最小结合结构域单链可变片段(single chain fragmentvariable，scfv)之后形成。还已经工程化改造了替代的抗原结合基序，例如受体配体(即，il-13已被工程化
3、car的连接基序可以是相对稳定的结构结构域，例如igg的恒定结构域，或设计成延伸的柔性接头。可使用结构基序(例如来源于igg恒定结构域的那些)来使scfv结合结构域延伸远离t细胞质膜表面。这对于其中结合结构域特别接近肿瘤细胞表面膜的一些肿瘤靶标(例如对于二唾液酸神经节苷脂gd2；orentas等，未发表的观察结果)来说可以是重要的。迄今为止，car中使用的信号传导基序总是包含cd3-ζ链，因为该核心基序是t细胞活化的关键信号。首次报道的第二代car的特征在于cd28信号传导结构域和cd28跨膜序列。该基序也用于包含cd137(4-1bb)信号传导基序的第三代car中(zhao y等j immunol.2009；183(9):5563-74)。随着利用与抗cd3和抗cd28抗体连接的珠来活化t细胞的新技术的出现，来自cd28的经典“信号2”的存在不再需要由car本身编码。使用珠活化，发现第三代载体在体外测定中并不优于第二代载体，并且它们在白血病的小鼠模型中并不提供优于第二代载体的明显益处(haso w,lee dw,shah nn,stetler-stevenson m,yuan cm,pastan ih,dimitrov ds,morgan ra,fitzgerald dj,barrett dm,wayne as,mackall cl,orentasrj.anti-cd22-chimeric antigen receptors targeting b cell precursor acutelymphoblastic leukemia.blood.2013；121(7):1165-74；kochenderfer jn等，blood.2012；119(12):2709-20)。第二代cd28/cd3-ζ中cd19特异性car的临床成功(lee dw等，american society of hematology annual meeting.new orleans,la；十二月，7-10,2013)和cd137/cd3-ζ信号传导形式(porter dl等，n engl j med.2011；365(8):725-33)证实了这一点。除cd137之外，其他肿瘤坏死因子受体超家族成员(例如ox40)也能够在car转导的t细胞中提供重要的持久信号(yvon e等，clin cancer res.2009；15(18):5852-60)。培养car t细胞群的培养条件同样重要。
4、在癌症的car治疗的更广泛且有效的适应中，当前的挑战涉及缺乏令人信服的靶标。产生细胞表面抗原的结合物(binder)目前是容易实现的，但是找到对肿瘤具有特异性同时避开(sparing)正常组织的细胞表面抗原仍然是一个艰巨的挑战。使表达car的t细胞具有更高靶细胞特异性的一种潜在方式是使用组合car方法。在一个系统中，cd3-ζ和cd28信号单元被划分在同一细胞中表达的两个不同car构建体之间；在另一系统中，两个duocar在同一t细胞中表达，但其中一个具有更低的亲和力并因此需要首先接合供替选的car以用于第二个的完整活性(lanitis e等，cancer immunol res.2013；1(1):43-53；kloss cc等，nat biotechnol.2013；31(1):71-5)。对于产生作为免疫治疗剂的单个基于scfv的car的第二个挑战是肿瘤细胞异质性。至少一个研究小组已经开发了用于胶质母细胞瘤的car策略，其中效应细胞群同时靶向多种抗原(her2、il-13ra、epha2)，以期避免靶抗原阴性群的生长(hegde m等，mol ther.2013；21(11):2087-101)。
5、基于t细胞的免疫治疗已成为合成生物学中的新前沿；考虑了多个启动子和基因产物以将这些高度强效的细胞引导至肿瘤微环境，在那里t细胞既可逃避负调节信号，又可介导有效的肿瘤杀伤。通过药物诱导的诱导型胱天蛋白酶9(caspase 9)构建体与ap1903的二聚化消除不期望的t细胞示出了这样一种方式，其中可药理学地启动可控制t细胞群的强大开关(di stasi a等，n engl j med.2011；365(18):1673-83)。通过诱饵受体的表达来产生对转化生长因子-β的负调控作用免疫的效应t细胞群进一步示出效应t细胞可被工程化改造以达到最佳抗肿瘤活性的程度(foster ae等，j immunother.2008；31(5):500-5)。
6、因此，尽管car似乎能够以类似于内源性t细胞受体的方式触发t细胞活化，但迄今为止基于car的技术的临床应用的主要障碍一直限于car+t细胞的体内扩增、输注后细胞的迅速消失、令人失望的临床活性、潜在医学疾病或病症的复发、以及使用这样的car+t细胞的癌症的诊断与及时治疗之间流逝的过长的时间。
7、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.治疗患有CD19+、CD20+和CD22+血癌的人对象的方法，所述方法包括向患有所述CD19+、CD20+和CD22+血癌的对象施用包含以下的药物组合物：抗肿瘤有效量的人淋巴细胞群，其中所述人淋巴细胞群是所述对象自体的或同种异体的，其中所述人淋巴细胞群的每个细胞包含至少一种多顺反子载体，所述至少一种多顺反子载体中的每一种包含与编码两个或更多个功能性CAR的多顺反子核酸序列可操作地连接的启动子，所述两个或更多个功能性CAR包含细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和一个或更多个不同的细胞内信号传导基序，其中所编码的两个或更多个功能性CAR中的每一个包含独立地选自SEQ ID NO:110、112、114和116的氨基酸序列的不同的氨基酸序列，从而治疗患有所述CD19+、CD20+和CD22+血癌的对象。
2.权利要求1所述的方法，其中所述自体的或所述同种异体的淋巴细胞直接输注回到所述对象中。
3.权利要求1所述的方法，其中所述人淋巴细胞群是所述对象自体的T细胞，并且其中所述自体的T细胞直接输注回到所述对象中以在所述对象中促进CAR-T细胞的体内扩增、癌症稳定化
4.权利要求1所述的方法，其中所述人淋巴细胞群表达活化或记忆相关表面标志物。
5.权利要求1所述的方法，其中所述人淋巴细胞群包含从造血干细胞供体获得的T细胞和树突细胞。
6.权利要求1所述的方法，其中所述CD19+、CD20+和CD22+血癌是白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
7.权利要求6所述的方法，其中所述白血病是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)或慢性髓细胞性白血病(CML)。
8.权利要求6所述的方法，其中所述淋巴瘤是套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤。
...【技术特征摘要】
1.治疗患有cd19+、cd20+和cd22+血癌的人对象的方法，所述方法包括向患有所述cd19+、cd20+和cd22+血癌的对象施用包含以下的药物组合物：抗肿瘤有效量的人淋巴细胞群，其中所述人淋巴细胞群是所述对象自体的或同种异体的，其中所述人淋巴细胞群的每个细胞包含至少一种多顺反子载体，所述至少一种多顺反子载体中的每一种包含与编码两个或更多个功能性car的多顺反子核酸序列可操作地连接的启动子，所述两个或更多个功能性car包含细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和一个或更多个不同的细胞内信号传导基序，其中所编码的两个或更多个功能性car中的每一个包含独立地选自seq id no:110、112、114和116的氨基酸序列的不同的氨基酸序列，从而治疗患有所述cd19+、cd20+和cd22+血癌的对象。
2.权利要求1所述的方法，其中所述自体的或所述同种异体的淋巴细胞直接输注回到所述对...
【专利技术属性】
技术研发人员：里马斯·奥伦塔什，迪娜·施奈德，瓦利德·M·哈索，斯特凡·米尔泰尼，博罗·德罗普利奇，
申请(专利权)人：莱蒂恩技术公司，
类型：发明
国别省市：
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