用于用抗CD19/CD22免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法技术

公开了包含CD19/CD22或CD22/CD19抗原结合结构域的嵌合抗原受体。还公开了涉及嵌合抗原受体的核酸、重组表达载体、宿主细胞、抗原结合片段和药物组合物。还公开了在对象中治疗或预防癌症的方法、以及制备嵌合抗原受体T细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于用抗CD19/CD22免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.Section119(e)要求于2018年9月26日提交的美国临时专利申请No.62/736,955的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。序列表本申请包含已经以ASCII格式电子提交并且在此通过引用整体并入的序列表。创建于2019年9月25日的所述ASCII拷贝被命名为Sequence_Listing.txt并且大小为197千字节。
本申请涉及癌症领域，特别地涉及通过CD19/CD22抗原靶向结构域来同时靶向B细胞抗原CD19和CD22的CAR以及包含这样的CD19/CD22抗原靶向结构域的嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)及其使用方法。
技术介绍
癌症是对人健康最致命的威胁之一。仅在美国，癌症每年影响接近130万例新患者，并且其是继心血管疾病之后第二位的主要死亡原因，引起大约四分之一的死亡。实体瘤是大多数这些死亡的原因。尽管在某些癌症的医学治疗方面已取得显著进展，但是在过去的20年中所有癌症的总体5年存活率仅提高约10％。癌症或恶性肿瘤转移并且以不受控制的方式迅速生长，使得治疗极其困难。CD19是85至95kDa跨膜细胞表面糖蛋白受体。CD19是蛋白质的免疫球蛋白(Ig)超家族的成员，并且包含两个胞外Ig样结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域(TedderTF，Isaacs，CM，1989，JImmunol143：712-171)。CD19修饰B细胞受体信号传导，降低B细胞受体对抗原的触发阈值(Carter，RH，andFearon，DT，1992，Science，256：105-107)，并与CD81和CD21协调以调节这种必需的B细胞信号传导复合物(Bradbury，LE，KansasGS，LevyS，EvansRL，TedderTF，1992，JImmunol，149：2841-50)。在B细胞个体发育期间，CD19能够独立于抗原受体在祖B细胞(pro-B)、前-前-B细胞(pre-pre-Bcell)、前-B细胞(pre-B)、早期B细胞(earlyBcell)阶段发出信号，并且与Src家族蛋白酪氨酸激酶相关，是酪氨酸磷酸化的，诱导胞内钙动员和肌醇磷脂信号传导二者(UckunFM，BurkhardtAL，JarvisL，JunX，StealyB，DibirdikI，MyersDE，Tuel-AhlgrenL，BolenJB，1983，JBiolChem268：21172-84)。与B细胞恶性肿瘤的治疗相关的关键点是：CD19在正常B细胞上以严格受调节的方式表达，受限于处于IgH基因重排阶段的早期B细胞前体、成熟B细胞，但在造血干细胞或成熟浆细胞上不表达(Anderson，KC，Bates，MP，SlaughenhoutBL，PinkusGS，SchlossmanSF，NadlerLM，1984，Blood63：1424-1433)。CD22，也称为SIGLEC-2(唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素2)，是95kDa跨膜表面糖蛋白，并且包含6个Ig样C2型结构域和1个Ig样V型结构域(uniprot.org/uniprot/P20273#structure，于2017年7月12日访问)。在B细胞个体发育期间，CD22从前B细胞阶段开始在B细胞表面表达，在成熟B细胞上持续，并且在浆细胞上丢失(NitschkeL，2009，ImmunologicalReviews，230：128-143)。CD22包含胞内ITIM(基于免疫受体酪氨酸的抑制基序)结构域，其在针对抗原的B细胞受体的接合之后用于下调细胞活化。CD22的抗体结合诱导与SHP-1和胞内磷酸酶的共定位，胞内磷酸酶也用于下调基于磷酸化的信号转导(LumbS，FleishcerSJ，WiedemannA，DaridonC，MaloneyA，ShockA，DornerT，2016，JournalofCellCommunicationandSignaling，10：143-151)。与B细胞恶性肿瘤的治疗相关的关键点是：CD22在正常B细胞上以严格受调节的方式表达，但在造血干细胞或成熟浆细胞上不表达，这使得CD22成为B细胞白血病的合适靶抗原。CD22在成人和儿童(前B-ALL)B细胞恶性肿瘤二者上的表达已导致利用该靶标进行基于抗体和基于嵌合抗原受体(CAR)-T细胞二者的治疗(HasoW，LeeDW，ShahNN，Stetler-StevensonM，YuanCM，PastanIH，DimitrovDS，MorganRA，FitzGerladDJ，BarrettDM，WayneAS，MackallCL，OrentasRJ，2013，Blood，121：1165-1174)(WayneAS，KreitmanRJ，FindleyHW，LewG，DelbrookC，SteinbergSM，Stetler-StevensonM，FitzGeraldDJ，PastanI，2010，ClinicalCancerResearch，16：1894-1903)。已开发出许多新的治疗B细胞白血病和淋巴瘤的方法，包括与细菌毒素或化学治疗剂连接的抗CD22抗体(WayneAS，FitzGeraldDJ，KreitmanRJ，PastanI，2014，Immunotoxinsforleukemia，Blood，123：2470-2477)。奥英妥珠单抗(InotuzumabOzogamicin)(CMC-544，鼠单克隆抗体的一种人源化形式G5/44)是一种抗体药物缀合物，并且其作为单一药剂或与化学治疗组合给予，目前正在临床试验中被评价(NCT01664910，主办者：M.D.AndersonCancerCenter)(DiJosephJF，etal.，2004，Blood，103：1807-1814)。作为单一药剂，结局胜过在标准治疗情况下所观察到的结局，但是注意到了显著的肝毒性(KantarjianH，etal.，2016，Inotuzumbozogamicinversusstandardtherapyforacutelymphoblasticleukemia，NewEnglandJournalofMedicine，375：740-753)。未经修饰的CD22治疗性抗体依帕珠单抗(Epratuzumab)也正在与化学治疗组合进行测试(NCT01219816，主办者：NantesUniversityHospital)。依帕珠单抗是一种嵌合蛋白，其由接枝到人抗体框架上的鼠CDR构成。尽管在一些白血病中有效，但Mosetumomabpasudotox由于与该抗体融合的细菌毒素的免疫原性以及与其他药剂的活性水平适度或相当的这两个问题而并不在广泛的临床开发中(参见NCT01829711，主办者：MedImmune，LLC)。迄今为止，CAR构建体中使用的许多CD22结合部分都利用了来自于这些鼠抗体的结构域，并且不能有效地活化靶向本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.编码CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸分子，所述CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)包含至少一个包含CD19/CD22抗原结合结构域的胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，其中所述CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)由包含SEQ ID NO.1、3、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的核苷酸序列编码。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180926 US 62/736,9551.编码CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸分子，所述CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)包含至少一个包含CD19/CD22抗原结合结构域的胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，其中所述CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)由包含SEQIDNO.1、3、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的核苷酸序列编码。


2.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个CD19/CD22抗原结合结构域包含与CD19/CD22结合的抗体的至少一个单链可变片段。


3.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个CD19/CD22抗原结合结构域包含与CD19/CD22结合的抗体的至少一个重链可变区。


4.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个CD19/CD22抗原结合结构域、所述至少一个胞内信号传导结构域或这二者通过接头或间隔区结构域与所述跨膜结构域连接。


5.权利要求4所述的分离的核酸分子，其中所编码的接头或间隔区结构域来自于CD8或CD28的胞外结构域，并且与跨膜结构域连接。


6.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中在所编码的胞外CD19/CD22抗原结合结构域之前是编码前导肽的前导核苷酸序列。


7.权利要求6所述的分离的核酸分子，其中所述前导核苷酸序列包含含有SEQIDNO：11的核苷酸序列，其编码SEQIDNO：12的前导氨基酸序列。


8.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述跨膜结构域包含含有以下的蛋白质的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链，CD8、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD83、CD86、CD134、CD137、CD154和TNFRSF19，或其任意组合。


9.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码所述CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列由包含SEQIDNO.1、3、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的核苷酸序列或者与其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列编码。


10.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个胞内信号传导结构域还包含CD3ζ胞内结构域。


11.权利要求10所述的分离的核酸分子，其中所述所编码的至少一个胞内信号传导结构域相对于所述CD3ζ胞内结构域布置在C端侧。


12.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个胞内信号传导结构域包含共刺激结构域、初级信号传导结构域，或其任意组合。


13.权利要求12所述的分离的核酸分子，其中所编码的至少一个共刺激结构域包含以下的功能性信号传导结构域：OX40、CD70、CD27、CD28、CD5、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、DAP10、DAP12和4-1BB(CD137)，或其任意组合。


14.嵌合抗原受体(CAR)，其由权利要求1所述的分离的核酸分子编码。


15.权利要求14所述的CAR，其包含至少一个包含CD19/CD22抗原结合结构域的胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，其中所述CD19/CD22串联CAR包含含有SEQIDNO.2、4、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81或83的氨基酸序列。


16.权利要求15所述的CAR，其中所述CD19/CD22抗原结合结构域包含与CD19/CD22结合的抗体的至少一个单链可变片段。


17.权利要求15所述的CAR，其中所述CD19/CD22抗原结合结构域包含与CD19/CD22结合的抗体的至少一个重链可变区。


18.权利要求15所述的CAR，其中所述跨膜结构域包含含有以下的蛋白质的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链，CD8、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154和TNFRSF19，或其任意组合。


19.权利要求18所述的CAR，其中CD8跨膜结构域包含SEQIDNO：35的氨基酸序列或与SEQIDNO：36的氨基酸序列具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。


20.权利要求15所述的CAR，其中胞外CD19/CD22抗原结合结构域、所述胞内信号传导结构域、或这二者通过接头或间隔区结构域与所述跨膜结构域连接。


21.权利要求20所述的CAR，其中所述接头或间隔区结构域来自于CD8或CD28的胞外结构域，并且与跨膜结构域连接。


22.权利要求17所述的CAR，其中所述至少一个胞内信号传导结构域包含共刺激结构域和初级信号传导结构域。


23.权利要求22所述的CAR，其中所述至少一个胞内信号传导结构域包含共刺激结构域，所述共刺激结构域包含选自以下的蛋白质的功能性信号传导结构域：OX40、CD70、CD27、CD28、CD5、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、DAP10、DAP12和4-1B...

【专利技术属性】
技术研发人员：迪娜·施奈德，里马斯·J·奥伦塔什，博罗·德罗普利奇，胡培荣，
申请(专利权)人：莱蒂恩技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US