The invention provides a hybridoma cell line Anti_CLas McAb1, which is a mouse hybridoma cell (Mus musculus Hybridoma) Anti_CLas McAb1, and its preservation number is CCTCC NO: C2017219. The invention also provides the preparation method of the hybridoma cell line and the monoclonal antibody secreted by the hybridoma cell line or its passage cell line of recombinant yellow dragon pathogen CLas McAb1. The invention also provides the application of the monoclonal antibody against recombinant yellow dragon pathogen CLas McAb1, including a detection kit and an immunogold detection strip, which utilize the specificity of the monoclonal antibody against recombinant yellow dragon pathogen CLas McAb1. It has the advantages of good specificity, strong anti-interference, low cost and wide application. It can detect the Yellow Dragon pathogen in Citrus materials quickly and effectively.
【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞株Anti-CLasMcAb1及其分泌的单克隆抗体与应用
本专利技术涉及一种杂交瘤细胞株及单克隆抗体，尤其涉及杂交瘤细胞株Anti-CLasMcAb1及其分泌的单克隆抗体与应用。
技术介绍
柑橘黄龙病是柑橘生产上防治最难、危害最重、威胁最大的一种毁灭性病害，被人们称作柑橘上的“艾滋病”，广泛分布在我国几乎所有的柑橘主产区。作为一种毁灭性病害，柑橘染病植株往往在2～3年内丧失结果能力或死亡，甚至造成毁园。柑橘黄龙病的猖獗危害和蔓延扩散，对柑橘产业的稳定和发展造成了严重的威胁，已经成为柑橘产业发展的重大障碍。目前对柑橘黄龙病尚缺乏有效的防治药剂和理想的抗性品种，因此综合防治是当前该病害防治的主要方法。其中，严格的植物检疫是保护无病区和新区柑橘的前提，建立无病毒苗圃、培育和种植无病毒苗木是预防黄龙病的基础，及时消灭传病木虱和彻底挖除病树是防止病害流行的关键措施。然而，这些工作的开展都必须建立在明确柑橘材料内是否存在黄龙病菌的基础之上。因此，对黄龙病菌快速准确地检测和诊断是当前该病害综合防控的重要前提。现有对柑橘黄龙病的检测和诊断，已经发展了多种方法和技术，如田...
【技术保护点】
1.杂交瘤细胞株Anti‑CLas McAb1，其特征在于，其为小鼠杂交瘤细胞(Mus musculus Hybridoma)Anti‑CLas McAb1，其保藏编号为CCTCC NO：C2017219。
【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株Anti-CLasMcAb1，其特征在于，其为小鼠杂交瘤细胞(MusmusculusHybridoma)Anti-CLasMcAb1，其保藏编号为CCTCCNO：C2017219。2.一种权利要求1所述的杂交瘤细胞株Anti-CLasMcAb1的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、扩增黄龙病菌CLasMcAb1编码区基因，通过特异性接头装入原核表达载体pET-102，得到重组表达质粒p102-McAb1；步骤2、将重组表达质粒p102-McAb1转化至大肠杆菌Rosetta菌株，加入诱导剂诱导CLasMcAb1蛋白的表达，得到诱导后菌体；步骤3、收集并破碎诱导后菌体，再通过免疫实验动物、免疫后动物脾脏细胞与骨髓瘤融合，得到杂交瘤细胞株，杂交瘤细胞株通过差异性ELISA筛选法得到只分泌针对CLasMcAb1蛋白抗体的阳性细胞株。3.如权利要求2所述的杂交瘤细胞株Anti-CLasMcAb1的制备方法，其特征在于，所述步骤1中扩增黄龙病菌CLasMcAb1编码区基因的上下引物分别为5′-CACCCCAGCCGTCTTTACCAGTCT-3′和5′-GTTGGTGGGTCTTTGGAAAA-3′。4.如权利要求2所述的杂交瘤细胞株Anti-CLasMcAb1的制备方法，其特征在于，所述步骤3中的差异性ELISA筛选法为将含重组质粒p102-McAb1和空载体质粒pET-102的诱导菌体裂解物包被固相载体，分别与待筛选的单克隆抗体细胞株所分泌的抗体反应，只与含重组质粒p102-McAb1的诱导裂解物反应，而不与空载体质粒pET-102的诱导裂解物反应的细胞株确定为阳性，从而筛选得到只分泌针对CLasMcAb1蛋白抗体的阳性细胞株。5.重组黄龙病菌CLasMcAb1的单克隆抗体，其特征在于，所述重组黄龙病...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁芳，约翰·哈通，邓秀新，彭抒昂，洪霓，王国平，刘永忠，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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