一种三链DNA分子信标结合纳米孔技术联用的抗体检测方法技术

本发明专利技术公开了一种三链DNA分子信标结合纳米孔技术联用的抗体检测方法。发明专利技术人首先设计并合成了用于检测抗体的三链DNA分子信标，当抗体与分子信标结合后，分子信标结构被破坏，释放探针；抗体‑抗体捕捉DNA分子复合物由于体积过大而无法穿越纳米孔，而探针穿越纳米孔将会产生特征电流信号，该信号特异性极强，可以准确地实现分子指认，避免了背景干扰的问题。此外，分子信标独特的热力学和动力学性质与纳米孔这种单分子技术相结合，实现了对变价抗体的高灵敏度检测。不仅如此，本发明专利技术的方法还具有操作简单，试剂消耗量极少，无需借助大型仪器等优点。

An antibody detection method combined with three strand DNA molecular beacon combined with nanopore Technology

The invention discloses an antibody detection method combined with three strand DNA molecular beacon combined with nanopore technology. Inventors first designed and synthesized three-stranded DNA molecular beacons for detecting antibodies. When antibodies bind to molecular beacons, the molecular beacon structure is destroyed and probes are released; antibodies capture DNA molecular complexes that are too large to penetrate nanopores, and probe penetration through nanopores produces characteristic current signals. The signal is highly specific and can accurately identify the molecules and avoid background interference. In addition, the unique thermodynamic and kinetic properties of molecular beacons are combined with the single molecular technology of nanopore to achieve high sensitivity detection of variational antibodies. Moreover, the method of the invention has the advantages of simple operation, minimal reagent consumption and no need of large-scale instruments.

【技术实现步骤摘要】
一种三链DNA分子信标结合纳米孔技术联用的抗体检测方法
本专利技术涉及一种三链DNA分子信标结合纳米孔技术联用的抗体检测方法。
技术介绍
抗体作为一种重要的生化指标，其快速灵敏检测不仅对于疾病诊断意义重大，也是疗效观察和疾病预防的重要手段。目前普遍采用的抗体检测技术主要有酶联免疫吸附法和蛋白质印迹法两种。但这两种方法不仅操作复杂，消耗大量试剂，而且得到的结果通常也都是半定量结果。近些年随着纳米技术的飞速发展，相继开发出各种基于纳米材料以实现高灵敏度、高选择性检测抗体的方法。但仍需要借助大型仪器且过程繁琐。因此发展简单、高效的抗体检测方法变得愈发迫切。由于DNA具有碱基互补配对，碱基或链末端上可进行多种修饰等优势而可以被设计成各种功能不同的纳米机器。2015年，Ricci等人利用末端修饰了抗原和荧光基团的分子信标结构实现了地高辛抗体(二价)的高灵敏度快速简单检测。随后基于分子信标修饰荧光基团的方法又实现了多种抗体(二价)的检测，使该方法广为人知，但对于变价抗体的检测效果仍然不好。此外，由于该方法依赖于光学信号，因此存在着光漂白、荧光寿命短、背景干扰等问题，尤其是背景干扰极易得出假阳性结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测目标抗体的分子组合，包括探针分子和抗体捕获分子；所述探针分子是将瓜环修饰于单链DNA分子I的5’末端得到的；单链DNA分子I中，3’端具有由n个核苷酸组成的结合区A；所述抗体捕获分子由单链DNA分子II和两个抗原分子组成；单链DNA分子II位于中间，单链DNA分子II的两个末端分别连接一个与目的抗体对应的抗原分子；DNA分子II中，5’端具有由n个核苷酸组成的结合区B，3’端具有由n个核苷酸组成的结合区C；结合区B和结合区C为反向序列；结合区B与结合区A为反向互补序列。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测目标抗体的分子组合，包括探针分子和抗体捕获分子；所述探针分子是将瓜环修饰于单链DNA分子I的5’末端得到的；单链DNA分子I中，3’端具有由n个核苷酸组成的结合区A；所述抗体捕获分子由单链DNA分子II和两个抗原分子组成；单链DNA分子II位于中间，单链DNA分子II的两个末端分别连接一个与目的抗体对应的抗原分子；DNA分子II中，5’端具有由n个核苷酸组成的结合区B，3’端具有由n个核苷酸组成的结合区C；结合区B和结合区C为反向序列；结合区B与结合区A为反向互补序列。2.一种用于检测目标抗体的复合物，由探针分子和抗体捕获分子共孵育形成；所述探针分子是将瓜环修饰于单链DNA分子I的5’末端得到的；单链DNA分子I中，3’端具有由n个核苷酸组成的结合区A；所述抗体捕获分子由单链DNA分子II和两个抗原分子组成；单链DNA分子II位于中间，单链DNA分子II的两个末端分别连接一个与目的抗体对应的抗原分子；DNA分子II中，5’端具有由n个核苷酸组成的结合区B，3’端具有由n个核苷酸组成的结合区C；结合区B和结合区C为反向序列；结合区B与结合区A为反向互补序列。3.如权利要求1所述的分子组合或权利要求2所述的复合物，其特征在于：所述n为6-10之间的任意自然数；所述单链DNA分子I的长度为18-22bp；所述单链DNA分子II的长度为33-41bp。4.如权利要求1至3任一所述的分子组合，或，权利要求2或3所述的复合物，其特征在于：所述n为8；所述单链DNA分子I的长度为2...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴海臣，刘蕾，郭秉元，
申请(专利权)人：中国科学院化学研究所，中国科学院高能物理研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11