The invention belongs to the field of stem cells, and provides a method for collecting mesenchymal stem cells from microcarriers. In order to remove the upper culture medium of mesenchymal stem cell microcarrier culture system, EDTA_trypsin is added to shake culture for 5_10 minutes at 37 C with 100 rpm_200 rpm, and then shake culture for 5_10 s with 200 rpm_250 rpm. Cell sieve filtration, collecting cell filtrate, centrifugation and collecting precipitation. The collection method reduces the processing time of trypsin and trypsin substitutes and shortens the time for mesenchymal stem cells to detach from microcarriers. The collection method has the advantages of short processing time, high collection rate of mesenchymal stem cells, small damage to the collected mesenchymal stem cells and high cell viability, and is widely applicable to the collection of mesenchymal stem cells cultured on microcarriers.
【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞的收集方法
本专利技术属于干细胞领域,具体涉及一种间充质干细胞的收集方法,尤其是涉及一种间充质干细胞脱离微载体的收集方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells)是存在于各种组织中的一类具有自我更新、增殖能力强,及多向分化能力的干细胞。间充质干细胞为贴壁细胞,在二维平皿或培养瓶底部贴壁生长,在三维培养总,依附于载体表面或载体内部生长。微载体(microcarrier)是直径在60-250μm,能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖、胶原或者聚苯乙烯等各种合成的聚合物组成。国际市场上出售的微载体商品的类型已经达十几种以上,包括液体微载体、大孔明胶微载体、聚苯乙烯微载体、PHEMA微载体、甲壳质微载体、聚氨酯泡沫微载体、藻酸盐凝胶微载体以及磁性微载体等。常用商品化微载体有三种:Cytodex1、2、3,Cytopore和Cytoline。微载体培养是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术,其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点,放大容易。目前微载体培养广泛用于培养各种类型细胞。培养后需要将细胞从微载体上脱离下来目前细胞从微载体上脱离通常采取胰蛋白酶、胰酶替代物来消化细胞,经过30-60min的处理,促使微载体从细胞脱落。然而用胰蛋白处理间充质干细胞-微载体的时间过长,长时间用胰蛋白处理细胞,会导致细胞活力降低,造成细胞损伤。有文献报道,细胞长时间暴露的胰蛋白酶中,会降低间充质干细胞表面标记物CD105的表达量。同时目前采用的胰蛋白酶、胰酶替代物来消化细胞,处理微载体上间充质干细胞的收集方法,还存在处理后间 ...
【技术保护点】
1.一种间充质干细胞的收集方法,其特征在于,去除间充质干细胞微载体培养体系中的上层培养基,加入EDTA‑胰蛋白酶在37℃条件下以100rpm‑200rpm摇培5‑10min,然后以200rpm‑250rpm摇培5s‑10s,细胞筛网过滤,收集细胞滤液,离心后收集沉淀。
【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞的收集方法,其特征在于,去除间充质干细胞微载体培养体系中的上层培养基,加入EDTA-胰蛋白酶在37℃条件下以100rpm-200rpm摇培5-10min,然后以200rpm-250rpm摇培5s-10s,细胞筛网过滤,收集细胞滤液,离心后收集沉淀。2.根据权利要求1所述的收集方法,其特征在于,所述间充质干细胞微载体培养体系为骨髓间充质干细胞微载体培养体系。3.根据权利要求2所述的收集方法,其特征在于,所述骨髓间充质干细胞微载体培养体系的制备方法为骨髓间充质干细胞接种于含微载体的培养基中,保持30rpm-45rpm的搅拌速率,于5%CO2,37℃、95%湿度的细胞培养箱内培养5-6天。4.根据权利要求2或3所述的收集方法,其特征在于,所述骨...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈海佳,葛啸虎,王一飞,陈婉玲,马岩岩,
申请(专利权)人:广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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