A method for removing precursors in recombinant human nerve growth factor by hydrophobic interaction chromatography is characterized in that a cleaning step is added before elution, and the cleaning solution with reduced stage conductivity and organic solvents is used for cleaning, thus enabling the removal of precursor molecular variants.
【技术实现步骤摘要】
疏水层析动态清除重组人神经生长因子前体的方法
：本专利技术涉及蛋白质纯化，具体涉及一种疏水层析动态清除重组人神经生长因子前体的方法。
技术介绍
：基因工程表达的在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)生产的人神经生长因子(以下亦称为rhNGF)中含有多种杂质，不能直接应用，需要进行纯化才能使用。现有技术的层析方法虽然能够除去rhNGF中的许多过程相关杂质(如宿主细胞蛋白及核酸)，但是很难除去作为产品相关杂质的rhNGF前体，其中前体是主要的变异体种类。因为这些变异体通常与成熟rhNGF一同产生，其中前体变异体由于含rhNGF序列,与rhNGF产品理化性质相近，并且由于加工程度的不同导致不同分子量前体的产生，增加了纯化的复杂性，使得rhNGF大规模纯化比较困难。重组人神经生长因子在体内以前体形式合成，包括信号肽、前导肽和成熟rhNGF。其中前导肽中有两部分保守区域为前体表达、酶解形成具有生物活性的蛋白以及成熟rhNGF的分泌所必需，且其还有助于蛋白的正确折叠。前体经弗林蛋白酶或激素酶原转化酶在特定部位水解后形成具有生物学活性的成熟rhNGF。由于弗林蛋白酶或激素酶原转化酶加工不...
【技术保护点】
1.一种使用疏水作用层析清除重组人神经生长因子中前体的方法，其特征见如下步骤：1)原料预处理：将CHO细胞培养物先经过一次或多次柱层析，初步纯化，得到待层析的原料；2)原料清洗：将步骤1)所得物质加载于疏水层析柱中，用清洗缓冲液清洗，弃去含有前体的流出液；3)用洗脱缓冲液对进行了步骤2)的层析柱进行洗脱，得到重组人神经生长因子纯品。
【技术特征摘要】
1.一种使用疏水作用层析清除重组人神经生长因子中前体的方法，其特征见如下步骤：1)原料预处理：将CHO细胞培养物先经过一次或多次柱层析，初步纯化，得到待层析的原料；2)原料清洗：将步骤1)所得物质加载于疏水层析柱中，用清洗缓冲液清洗，弃去含有前体的流出液；3)用洗脱缓冲液对进行了步骤2)的层析柱进行洗脱，得到重组人神经生长因子纯品。2.权利要求1所述的方法，步骤2)中，所述清洗用含醇和NaCl的缓冲液作为清洗缓冲液。3.权利要求2所述的方法，所述清洗缓冲液同时满足以下条件，以清除前体：A电导率比步骤3)的层析洗脱缓冲液高；B醇的含量低于步骤3)所用的层析洗脱缓冲液中醇的含量；CpH与步骤1)所得产物范围相同。4....
【专利技术属性】
技术研发人员：刘文超，孙洪亮，张怡，
申请(专利权)人：江苏中新医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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