一种清除rhNGF中N端截短及异常变异体的方法技术

一种清除rhNGF中N端截短及异常变异体的方法，使用阳离子交换层析进行，特别是采用了阶段电导升高的方法进行。实验证实，经过本发明专利技术方法的纯化，纯化产物中的N端截短及异常变异体含量大幅降低。

A method to eliminate truncated N and abnormal variants in rhNGF

A method of eliminating N-terminal truncated and abnormal variants in rhNGF by cation exchange chromatography, especially by means of phase conductivity elevation. The experiment proves that the N-terminal truncation and the abnormal variant content in the purified product are greatly reduced by the purification method of the invention.

【技术实现步骤摘要】
一种清除rhNGF中N端截短及异常变异体的方法
：本专利技术涉及一种清除rhNGF中N端截短及异常变异体的方法，特别是采用阶段电导升高的方法清除N端截短及异常分子变异体的方法。
技术介绍
：从真核表达系统中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达的重组人神经生长因子(以下亦称rhNGF)中往往含有变异体，“变异体”指胞内分泌过程中翻译后修饰或分泌后氨基酸残基侧链发生化学反应或肽链降解而形成的一系列蛋白。rhNGF在体内以前体形式合成。由于弗林蛋白酶或激素酶原转化酶加工不完全会产生完全或部分前体，统称为前体变异体。除前体外，由于真核细胞特性，还会产生诸如N端截短、氧化、脱酰胺、异构、C末端截短、异常等变异体。其中“N端截短”，指由于翻译后加工导致N端部分氨基酸缺失的序列分子。在本文中，“N端截短”特指6-117序列分子。“异常”，指由于翻译后加工导致结构异常(疏水核心暴露)、二硫键异常(错配)、异常氧化(疏水核心位点氧化)变异体的统称。一般而言，异常变异体在RP-HPLC分析中出现在主峰1-117后，在WCX-HPLC中出现在主峰1-117之前。现有技术的层析方法虽然能够除去rhNGF中的许多过程本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种清除rhNGF中N端截短及异常变异体的方法，其特征是：1)先用清洗液对加载到阳离子交换材料上的rhNGF原料进行清洗，得到清除N端截短及异常变异体的原料；所述清洗液是电导率高于原料的清洗缓冲液；2)用电导率高于步骤1)所述清洗液的洗脱缓冲液对步骤1)清洗过的原料进行阳离子交换层析洗脱步骤，收集洗脱液,从中得到的rhNGF纯品。

【技术特征摘要】
1.一种清除rhNGF中N端截短及异常变异体的方法，其特征是：1)先用清洗液对加载到阳离子交换材料上的rhNGF原料进行清洗，得到清除N端截短及异常变异体的原料；所述清洗液是电导率高于原料的清洗缓冲液；2)用电导率高于步骤1)所述清洗液的洗脱缓冲液对步骤1)清洗过的原料进行阳离子交换层析洗脱步骤，收集洗脱液,从中得到的rhNGF纯品。2.权利要求1所述的方法，步骤1)中所述清洗液的电导为20-30ms/cm。3.权利要求1所述的方法，步骤1)中所述清洗液是含NaCl的缓冲液，NaCl的含量是200～300mM。4.权利要求1所述的方法，步骤1)的方法是将所述rhNGF原料加载于层析柱阳离子交换材料中，用清洗液清洗,弃去流...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文超，孙洪亮，张怡，
申请(专利权)人：江苏中新医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32