一种荧光高效液相色谱检测发酵红肉制品中Neu5Gc的方法技术

本发明专利技术公开了一种荧光高效液相色谱检测发酵红肉制品中Neu5Gc的方法，包括以下步骤：配制1mmol/L Neu5Gc标准品溶液；Neu5Gc标准曲线绘制；发酵红肉制品样品溶液的制备；柱前衍生：准确吸取900µL的样品溶液，加入100µLDMB衍生试剂，于水浴锅中50℃避光衍生2.5h后放入冰水混合液中快速冷却过0.22膜待测；采用填充剂为十八烷基硅烷的C18反向色谱柱,荧光检测器激发波长373nm、发射波长448nm，柱温30℃，流速为0.9m L/min，进样体积10μL。其中流动相A为超纯水，流动相B为甲醇，梯度洗脱程序为：0‑18min:80%A、20%B；18.1‑21min:100%B;21.1‑28min:80%A、20%B；样品中Neu5Gc的含量测定。本发明专利技术检测结果准确、重复性好，检测的特异性和灵敏度高，能有效降低检测时间，提高检测效率、成本低，毒性小。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光高效液相色谱检测发酵红肉制品中Neu5Gc的方法
本专利技术属于检测
，具体涉及一种荧光高效液相色谱检测发酵红肉制品中Neu5Gc的方法。
技术介绍
发酵肉制品在人类历史上存在久远，因其独特的风味、微生物发酵产生的多种营养物质、以及便于保存的特性深受人们喜爱。通常，发酵肉制品多以红肉(牛肉、羊肉、猪肉等)作为发酵原料制成发酵产品。这里红肉一般指红色肌肉纤维比白色肌肉纤维多的动物肉，包括牛肉、羊肉和猪肉及其加工产品等(范杏丹.红肉、膳食Neu5Gc摄入与机体anti-Neu5Gc抗体关系研究[D].厦门大学硕士学位论文,2015.)。2015年10月26日国际癌症研究机构将红肉列为可能致癌物,这使得红肉及其红肉制品成为健康问题的热点话题。研究表明外源性的N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolylneuraminicacid,简称“Neu5Gc”)为红肉致癌性的特异性风险物质。因此，对发酵红肉制品中Neu5Gc含量进行检测成为衡量发酵红肉制品的安全问题主要指标。Neu5Gc是唾液酸的主要结构之一，目前检测唾液酸的方法有很多，常用的方法有基于比色法的间苯二酚法、硫代己比妥酸(2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荧光高效液相色谱检测发酵红肉制品中Neu5Gc 的方法，包括以下步骤：（1）Neu5Gc 标准溶液配制配制1mmol/L Neu5Gc 标准品溶液；（2）Neu5Gc 标准曲线绘制吸取1mmol/LNeu5Gc标准品溶液配制成10、25、50、100、200、300、400μmol/L的Neu5Gc标准溶液，取不同浓度Neu5Gc标准溶液900µL 分别加入100µLDMB衍生试剂，于水浴锅中50℃避光衍生2.5h后放入冰水混合液中快速冷却过0.22 膜后进样检测，以标准品浓度为横轴,色谱峰面积为纵轴制成线性标准曲线；（3）发酵红肉制品样品溶液的制备取发酵红肉制品，根据发酵红肉制品的原...

【技术特征摘要】
1.一种荧光高效液相色谱检测发酵红肉制品中Neu5Gc的方法，包括以下步骤：（1）Neu5Gc标准溶液配制配制1mmol/LNeu5Gc标准品溶液；（2）Neu5Gc标准曲线绘制吸取1mmol/LNeu5Gc标准品溶液配制成10、25、50、100、200、300、400μmol/L的Neu5Gc标准溶液，取不同浓度Neu5Gc标准溶液900µL分别加入100µLDMB衍生试剂，于水浴锅中50℃避光衍生2.5h后放入冰水混合液中快速冷却过0.22膜后进样检测，以标准品浓度为横轴,色谱峰面积为纵轴制成线性标准曲线；（3）发酵红肉制品样品溶液的制备取发酵红肉制品，根据发酵红肉制品的原料形状不同，分为块状或肉糜状发酵红肉制品；a、肉糜状发酵红肉制品样品溶液精确称取1g肉糜用10ml30%的饱和硫酸铵溶液匀浆以沉淀蛋白，并冷冻干燥去除硫酸铵，为使Neu5Gc游离出来，在冻干后的样品加入10ml2mol/L冰乙酸于80℃水浴锅中水解3h，以12000r/min的转速离心10min取上清液，用0.45µm膜过滤后进行二次冻干除去冰乙酸，冻干粉溶解于1ml0.1mol/LNaOH中，37℃水浴30min，用0.45µm膜过滤制得样品溶液；b、块状发酵红肉制品样品溶液选取块状发酵红肉制品的精瘦肉部分，取1cm以下的中间肉样1g加入10ml30%的饱和硫酸铵溶液匀浆以沉淀蛋白，并冷冻干燥去除硫酸铵，将冻干后的样品加入10ml2mol/L冰乙酸于8...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱秋劲，晏印雪，曾雪峰，常瑞，周樱子，徐阿奇，李洪英，梁美莲，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52