一种玉米遗传转化方法技术

本发明专利技术属于植物遗传转化技术领域，特别提供了一种玉米遗传转化方法，包括如下步骤：制备转化受体、制备侵染液、侵染、共培养、恢复培养、筛选、分化培养，得到玉米的带有潮霉素抗性基因或Bar抗性基因的玉米遗传转化植株。本方法过程简单、操作方便、参数及培养基优化，能够在较短时间内获得高遗传转化率的玉米转基因植株。

【技术实现步骤摘要】
一种玉米遗传转化方法
本专利技术属于植物遗传转化
，特别提供了一种玉米遗传转化方法。
技术介绍
玉米是重要的粮食、经济、油料作物，同时也是重要的工业作物。随着社会经济的不断发展，人们对玉米的需求也日益增多。遗传转化技术的飞速发展为玉米品种的增多起到了重要的作用，但是目前玉米的遗传转化仍然存在着转化时间长、转化率低的问题。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种玉米遗传转化方法，通过调整过程中的培养基及培养参数，大大缩短了玉米遗传转化的时间，并且提高了遗传转化率。本专利技术是这样实现的，一种玉米遗传转化方法，包括如下步骤：1)制备转化受体灭菌：授粉7-13d的玉米棒子用70％的乙醇灭菌10min；去胚乳：使用无菌水清洗幼胚2-5次，洗掉胚乳，获得幼胚的长度在2-4mm；2)制备侵染液取50mlZm-inf，依次加入Cys130μl、HCl130μl、AS100μl、Vc25μl，将农杆菌挑至混合液中，制成侵染液；3)侵染将调好的侵染液加至放有玉米幼胚的瓶中，放置摇床100rpm侵染20min，之后取出置于无菌滤纸上吹20min；4)共培养将步骤3)吹至表面无液体的幼胚，接至放置有一张灭菌滤纸Zm-cocu共培养基上，幼胚盾片朝上，暗处培养3天，除去幼胚上长出的芽，保留淡黄色的幼胚；5)恢复培养将共培养后的幼胚取出放置于灭菌皿中，观察幼胚是否膨胀大，边缘是否有愈伤，之后将幼胚放入zm-reco培养基中恢复7d；6)筛选第一次筛选：选择出无污染、淡黄色的幼胚接入到第一次筛选培养基中筛选7d；第二次筛选：第一次筛选后，将幼胚转入到第二次筛选培养基中筛选14d，筛选3-5次，直到筛选到胚性愈伤；7)分化培养将获得的胚性愈伤接入分化培养基Zm3中光培养，每12～15d循环继代一次，直到玉米新芽长出到3-4cm；各步骤中用到的培养基具体配方见下表：上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：进一步地，所述步骤2)中制备的侵染液OD600＝0.8。进一步地，选用的农杆菌为EHA105。进一步地，所述农杆菌携带的抗性基因为潮霉素抗性基因，所述第一次筛选培养基为zmHn15，第二次筛选培养基为zmHn30；上述培养基配方为：上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：进一步地，所述农杆菌携带的抗性基因为Bar抗性基因，所述第一次筛选培养基为zmbasta5，第二次筛选培养基为zmbasta10；上述培养基配方为：上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：与现有技术相比，本专利技术的优点在于：过程简单、操作方便、参数及培养基优化，能够在较短时间内获得高遗传转化率的玉米转基因植株。附图说明图1为利用本专利技术的方法得到的淡黄色幼胚；图2为利用本专利技术的方法得到的恢复培养阶段的转化愈伤；图3为利用本专利技术的方法得到的筛选阶段的抗性愈伤；图4为利用本专利技术的方法得到的分化初级阶段的抗性愈伤；图5为利用本专利技术的方法得到的抗性玉米芽；图6为利用本专利技术的方法得到的伸长抗性玉米苗；图7为利用本专利技术的方法得到的生根抗性玉米苗。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1、本专利技术是这样实现的，一种玉米遗传转化方法，包括如下步骤：1)制备转化受体灭菌：授粉7-13d的玉米棒子(齐319)用70％的乙醇灭菌10min；去胚乳：使用无菌水清洗幼胚2-5次，洗掉胚乳，获得幼胚的长度在2-4mm，参考图1；2)制备侵染液取50mlZm-inf，依次加入Cys130μl、HCl130μl、AS100μl、Vc25μl，将农杆菌(EHA105，携带的抗性基因为潮霉素抗性基因)挑至混合液中，制成侵染液，OD600＝0.8；3)侵染将调好的侵染液加至放有玉米幼胚的瓶中，放置摇床100rpm侵染20min，之后取出置于无菌滤纸上吹20min；4)共培养将步骤3)吹至表面无液体的幼胚，接至放置有一张灭菌滤纸Zm-cocu共培养基上，幼胚盾片朝上，暗处培养3天，除去幼胚上长出的芽，保留淡黄色的幼胚；5)恢复培养将共培养后的幼胚取出放置于灭菌皿中，观察幼胚是否膨胀大，边缘是否有愈伤，之后将幼胚放入zm-reco培养基中恢复7d，参考图2；6)筛选第一次筛选：选择出无污染、淡黄色的幼胚接入到第一次筛选培养基zmHn15中筛选7d；第二次筛选：第一次筛选后，将幼胚转入到第二次筛选培养基zmHn30中筛选14d，筛选3-5次，直到筛选到胚性愈伤，参考图3；7)分化培养将获得的胚性愈伤接入分化培养基Zm3中光培养，每12～15d循环继代一次，直到玉米新芽长出到3-4cm，参考图4、图5、图6和图7；各步骤中用到的培养基具体配方见下表：上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：实施例2、与实施例1不同的地方在于：农杆菌携带的抗性基因为Bar抗性基因，第一次筛选培养基为zmbasta5，第二次筛选培养基为zmbasta10；上述培养基配方为：上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种玉米遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备转化受体灭菌：授粉7‑13d的玉米棒子用70％的乙醇灭菌10min；去胚乳：使用无菌水清洗幼胚2‑5次，洗掉胚乳，获得幼胚的长度在2‑4mm；2)制备侵染液取50ml Zm‑inf，依次加入Cys 130μl、HCl 130μl、AS 100μl、Vc 25μl，将农杆菌挑至混合液中，制成侵染液；3)侵染将调好的侵染液加至放有玉米幼胚的瓶中，放置摇床100rpm侵染20min，之后取出置于无菌滤纸上吹20min；4)共培养将步骤3)吹至表面无液体的幼胚，接至放置有一张灭菌滤纸Zm‑cocu共培养基上，幼胚盾片朝上，暗处培养3天，除去幼胚上长出的芽，保留淡黄色的幼胚；5)恢复培养将共培养后的幼胚取出放置于灭菌皿中，观察幼胚是否膨胀大，边缘是否有愈伤，之后将幼胚放入zm‑reco培养基中恢复7d；6)筛选第一次筛选：选择出无污染、淡黄色的幼胚接入到第一次筛选培养基中筛选7d；第二次筛选：第一次筛选后，将幼胚转入到第二次筛选培养基中筛选14d，筛选3‑5次，直到筛选到胚性愈伤；7)分化培养将获得的胚性愈伤接入分化培养基Zm3中光培养，每12～15d循环继代一次，直到玉米新芽长出到3‑4cm；各步骤中用到的培养基具体配方见下表：...

【技术特征摘要】
1.一种玉米遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备转化受体灭菌：授粉7-13d的玉米棒子用70％的乙醇灭菌10min；去胚乳：使用无菌水清洗幼胚2-5次，洗掉胚乳，获得幼胚的长度在2-4mm；2)制备侵染液取50mlZm-inf，依次加入Cys130μl、HCl130μl、AS100μl、Vc25μl，将农杆菌挑至混合液中，制成侵染液；3)侵染将调好的侵染液加至放有玉米幼胚的瓶中，放置摇床100rpm侵染20min，之后取出置于无菌滤纸上吹20min；4)共培养将步骤3)吹至表面无液体的幼胚，接至放置有一张灭菌滤纸Zm-cocu共培养基上，幼胚盾片朝上，暗处培养3天，除去幼胚上长出的芽，保留淡黄色的幼胚；5)恢复培养将共培养后的幼胚取出放置于灭菌皿中，观察幼胚是否膨胀大，边缘是否有愈伤，之后将幼胚放入zm-reco培养基中恢复7d；6)筛选第一次筛选：选择出无污染、淡黄色的幼胚接入到第一次筛选培养基中筛选7d；第二次筛选：第一次筛选后，将幼胚转入到第二次...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘寒冬，
申请(专利权)人：刘寒冬，
类型：发明
国别省市：辽宁,21