一种姜药材及其制剂中姜辣素含量的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种姜药材及其制剂中姜辣素含量的测定方法，通过超高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测器及紫外检测器的分离分析技术，借助一测多评方法，采用试样中不存在的性能稳定且易得的纯物质N‑香草基壬烷酰胺对照品作为内参物，建立该组分与试样中4个姜辣素组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算，实现对姜药材及其制剂中的4个姜辣素组分的含量进行测定。本发明专利技术操作简单，灵敏度高，准确高效，成本低廉，可以客观，准确的评价姜药材及其制剂的品质，并用于质量控制，可解决因对照品缺乏而无法客观、合理地控制药材及其制剂质量的问题，对控制质量和保证疗效具有重要意义。

A method for determination of the content of ginger oil in ginger and its preparations

The invention discloses a method for determining gingerol content in ginger medicinal materials and their preparations. By means of ultra-high performance liquid chromatography tandem triple quadruple-bar mass spectrometry detector and ultraviolet detector separation and analysis technology, and by means of one-step multi-evaluation method, the pure substance N_vanillyl nonylamide, which does not exist in the sample, is stable and easy to obtain. The relative calibration factor between the reference substance and the four gingerol components in the sample was established. The content of the four gingerol components in the ginger and its preparations was determined by calculating the calibration factor. The invention has the advantages of simple operation, high sensitivity, high accuracy, high efficiency, low cost, can objectively and accurately evaluate the quality of ginger medicinal materials and their preparations, and can be used for quality control, can solve the problem that the quality of ginger medicinal materials and its preparations can not be objectively and reasonably controlled due to the lack of reference substances, and has important significance for controlling quality and ensuring curative effect. Righteousness.

【技术实现步骤摘要】
一种姜药材及其制剂中姜辣素含量的测定方法
本专利技术具体涉及一种姜药材及其制剂中姜辣素含量的测定方法。
技术介绍
姜(ZingiberofficinalRosc)别名生姜、干姜、白姜、均姜，属姜科(Zingiberaceae)姜属多年生草本植物，在我国主要分布于西南部至东南部区域。姜的組分多而复杂，具有独特的芳香风味和辛辣口感，这种独特的感官品质主要来源于两类有效成分：挥发性的姜精油和不具有挥发性的姜辣素，姜精油为姜提供独特的芳香风味；姜辣素为姜提供独特的辛辣口感。不同产地的姜因生长环境不同其药性和功效也有一定差异，研究发现，姜具有独特的药用和食用价值，祖国传统医药学认为，姜乃药中佳品，主治风寒感冒、喘咳、呕吐、痰饮、胀满、泄泻等。其始载于《神农本草经》，味辛，性热，归脾、胃、肾、心、肺经，具有温中散寒，回阳通脉，燥湿消痰等功效。现代药理学研究表明，生姜和干姜均具有抗氧化，抗炎，抗菌，抗肿瘤，抗溃疡，抗胃肠道出血，胃黏膜保护，改善局部血液循环等多种药理作用。有研究采用HPLC-UV技术建立了干姜中姜酚的分析方法，但所测定指标对照品分离制备难度大，分析成本高，作为姜药材质量控制方法不易广泛应用，另有报道采用HPLC-UV-ES-MS技术对生姜甲醇提取物及姜油树脂提取物进行分离分析，鉴定出多种姜辣素组分，提供了一个有价值的姜提取物的指纹图谱信息，但并未对其主成分进行准确的筛选和定量测定，而且多种成分并不能仅仅基于质谱信息进行准确识别。截止目前，2015版《中国药典》收载的用于姜药材(包括生姜和干姜)分析评价方法，以6-姜辣素作为干姜质量控制指标，以6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚作为生姜的质量控制指标，这些指标少且单一，分析时间长，不能全面反映姜药材及饮片的内在品质，而且目前6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚等对照品难以获得，价格高昂，限制了多指标成分质量控制的实际应用。一测多评法是一种适合中药特点的多指标质量评价的新模式，它利用有效化学成分间内在的函数和比例关系，只测定1个成分(对照品易得到)来实现多个成分(对照品难以得到或无)的同步监控，克服对照品短缺这一问题，即只测定其中某个代表性成分或试样中不存在且性能相近的成分(易得、廉价、稳定、有效)，同时可计算出其他待测有效成分的含量。因此，开发一种操作简单，检测灵敏度高，成本低廉，准确高效，且可同时定量分析多种活性成分的质量控制方法(一测多评法)，对于姜药材及其制剂的质量控制具有重要的现实意义。
技术实现思路
基于现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供了一种姜药材及其制剂中姜辣素含量的测定方法，采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱和紫外检测器，通过一测多评技术，采用试样中不存在且性能相近、稳定易得的纯物质N-香草基壬烷酰胺(合成辣椒碱)对照品作为内参物，建立该组分与6-姜烯酚、6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚的相对校正因子，通过校正因子计算姜药材及其制剂中多种姜辣素组分的含量。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种姜药材及其制剂中姜辣素含量的测定方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备分别精密称定N-香草基壬烷酰胺、6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和6-姜烯酚5种对照品，用甲醇溶解稀释，制得各单一对照品储备液，然后量取单一对照品储备液，用甲醇稀释混匀，制得混合对照品标准溶液；同时，配制质量浓度分别为CoL及CoH的N-香草基壬烷酰胺标准溶液，CoL小于CoH；将混合对照品标准溶液及N-香草基壬烷酰胺标准溶液冷冻避光保存；(2)供试品溶液的制备称取姜药材或姜药材制剂，将姜药材及姜药材制剂分别加入第一溶剂进行提取，得到姜药材提取液及姜药材制剂提取液，以姜药材提取液或姜药材制剂提取液作为样品；直接取样品，加入步骤(1)制得的N-香草基壬烷酰胺对照品储备液或N-香草基壬烷酰胺标准溶液，混合并用第二溶剂定容，得到供试品溶液；或者将样品用50％～100％甲醇稀释，得到样品母液，再取样品母液，加入步骤(1)制得的N-香草基壬烷酰胺对照品储备液或N-香草基壬烷酰胺标准溶液，混合并用第二溶剂定容，得到供试品溶液；供试品溶液中N-香草基壬烷酰胺的含量为0.05～1.00μg/mL；(3)相对校正因子fox和相对保留时间RtR的计算用UPLC-MS-DAD进行测定，进样系列浓度的步骤(1)制备得到的混合对照品标准溶液，获得TIC色谱图和MRM色谱图并进行峰面积积分，选取N-香草基壬烷酰胺为内参化合物，分别计算混合对照品标准溶液中N-香草基壬烷酰胺对6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚的相对校正因子fox和相对保留时间RtR；所述校正因子fox的计算公式为：式中：Ao为内参物N-香草基壬烷酰胺对照品的峰面积，Co为内参物N-香草基壬烷酰胺对照品的质量浓度，Ax为被测组分对照品x的峰面积，Cx为被测组分对照品x的质量浓度；所述相对保留时间RtR的计算公式为：式中：tRx为被测组分对照品x的保留时间，tRo为内参物N-香草基壬烷酰胺对照品的保留时间；(4)供试品中活性成分的测定取步骤(1)制备得到的N-香草基壬烷酰胺标准溶液及步骤(2)制备得到的供试品溶液进样，用UPLC-MS-DAD进行测定，获得TIC色谱图和MRM色谱图，按公式计算供试品溶液中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚的质量浓度；上述的公式为：C'x＝(CxL'+CxH')/2式中：Cx’为供试品溶液中被测定组分x的质量浓度，CxL’为供试品溶液中被测定组分x相对于浓度为CoL的N-香草基壬烷酰胺标准溶液所计算出的质量浓度，CxH’为供试品溶液中被测定组分x相对于浓度为CoH的N-香草基壬烷酰胺标准溶液所计算出的质量浓度，Ax’为供试品溶液中被测组分x的峰面积，AoL为CoL浓度N-香草基壬烷酰胺标准溶液的峰面积，AoH为CoH浓度N-香草基壬烷酰胺标准溶液的峰面积，fox为步骤(3)所得N-香草基壬烷酰胺对被测组分的相对校正因子，N为浓度影响因数。优选地，步骤(3)及步骤(4)所述UPLC测定的条件为：色谱柱为反相C18色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，以体积浓度为0.02～0.2％甲酸的水溶液或体积浓度0.02～0.2％乙酸的水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.4～0.6mL/min，检测波长为280nm±2nm；柱温35℃，进样量为2.0～10.0μL。进一步，所述梯度洗脱的程序为：更优地，色谱柱选用型号为EclipsePlusC18色谱柱(100×4.6mm,3.5μm)；流动相由流动相A和流动相B组成，以体积浓度为0.1％甲酸的水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，流速为0.5mL/min。优选地，步骤(2)中所述第二溶剂由流动相A和流动相B按照梯度洗脱初始比例混匀而成。优选地，步骤(3)及步骤(4)所述MS测定的条件为：离子源为ESI，检测方式为MRM多反应监测，扫描模式为正离子模式，雾化气压力为275.8～379.2kPa，干燥气温度为350℃，干燥气流速为10～12L/min，毛细管电压为4.0kV。优选地，步骤(3)及步骤(4)所述MS测定的条件参数包括：采用MRM方式检测的N-香草基壬烷酰胺，6-姜酚，8-姜酚，10-姜酚，6-姜烯酚的用于定性定量分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种姜药材及其制剂中姜辣素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备分别精密称定N‑香草基壬烷酰胺、6‑姜酚、8‑姜酚、10‑姜酚和6‑姜烯酚5种对照品，用甲醇溶解稀释，制得各单一对照品储备液，然后量取单一对照品储备液，用甲醇稀释混匀，制得混合对照品标准溶液；同时，配制质量浓度分别为CoL及CoH的N‑香草基壬烷酰胺标准溶液，CoL小于CoH；将混合对照品标准溶液及N‑香草基壬烷酰胺标准溶液冷冻避光保存；(2)供试品溶液的制备称取姜药材或姜药材制剂，将姜药材及姜药材制剂分别加入第一溶剂进行提取，得到姜药材提取液及姜药材制剂提取液，以姜药材提取液或姜药材制剂提取液作为样品；直接取样品，加入步骤(1)制得的N‑香草基壬烷酰胺对照品储备液或N‑香草基壬烷酰胺标准溶液，混合并用第二溶剂定容，得到供试品溶液；或者将样品用50％～100％甲醇稀释，得到样品母液，再取样品母液，加入步骤(1)制得的N‑香草基壬烷酰胺对照品储备液或N‑香草基壬烷酰胺标准溶液，混合并用第二溶剂定容，得到供试品溶液；供试品溶液中N‑香草基壬烷酰胺的含量为0.05～1.00μg/mL；(3)相对校正因子fox和相对保留时间RtR的计算用UPLC‑MS‑DAD进行测定，进样系列浓度的步骤(1)制备得到的混合对照品标准溶液，获得TIC色谱图和MRM色谱图并进行峰面积积分，选取N‑香草基壬烷酰胺为内参化合物，分别计算混合对照品标准溶液中N‑香草基壬烷酰胺对6‑姜酚、8‑姜酚、10‑姜酚、6‑姜烯酚的相对校正因子fox和相对保留时间RtR；所述校正因子fox的计算公式为：...

【技术特征摘要】
1.一种姜药材及其制剂中姜辣素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备分别精密称定N-香草基壬烷酰胺、6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和6-姜烯酚5种对照品，用甲醇溶解稀释，制得各单一对照品储备液，然后量取单一对照品储备液，用甲醇稀释混匀，制得混合对照品标准溶液；同时，配制质量浓度分别为CoL及CoH的N-香草基壬烷酰胺标准溶液，CoL小于CoH；将混合对照品标准溶液及N-香草基壬烷酰胺标准溶液冷冻避光保存；(2)供试品溶液的制备称取姜药材或姜药材制剂，将姜药材及姜药材制剂分别加入第一溶剂进行提取，得到姜药材提取液及姜药材制剂提取液，以姜药材提取液或姜药材制剂提取液作为样品；直接取样品，加入步骤(1)制得的N-香草基壬烷酰胺对照品储备液或N-香草基壬烷酰胺标准溶液，混合并用第二溶剂定容，得到供试品溶液；或者将样品用50％～100％甲醇稀释，得到样品母液，再取样品母液，加入步骤(1)制得的N-香草基壬烷酰胺对照品储备液或N-香草基壬烷酰胺标准溶液，混合并用第二溶剂定容，得到供试品溶液；供试品溶液中N-香草基壬烷酰胺的含量为0.05～1.00μg/mL；(3)相对校正因子fox和相对保留时间RtR的计算用UPLC-MS-DAD进行测定，进样系列浓度的步骤(1)制备得到的混合对照品标准溶液，获得TIC色谱图和MRM色谱图并进行峰面积积分，选取N-香草基壬烷酰胺为内参化合物，分别计算混合对照品标准溶液中N-香草基壬烷酰胺对6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚的相对校正因子fox和相对保留时间RtR；所述校正因子fox的计算公式为：式中：Ao为内参物N-香草基壬烷酰胺对照品的峰面积，Co为内参物N-香草基壬烷酰胺对照品的质量浓度，Ax为被测组分对照品x的峰面积，Cx为被测组分对照品x的质量浓度；所述相对保留时间RtR的计算公式为：式中：tRx为被测组分对照品x的保留时间，tRo为内参物N-香草基壬烷酰胺对照品的保留时间；(4)供试品中活性成分的测定取步骤(1)制备得到的N-香草基壬烷酰胺标准溶液及步骤(2)制备得到的供试品溶液进样，用UPLC-MS-DAD进行测定，获得TIC色谱图和MRM色谱图，按公式计算供试品溶液中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚的质量浓度；上述的公式为：C'x＝(CxL'+CxH')/2式中：Cx’为供试品溶液中被测定组分x的质量浓度，CxL’为供试品溶液中被测定组分x相对于浓度为CoL的N-香草基壬烷酰胺标准溶液所计算出的质量浓度，CxH’为供试品溶液中被测定组分x相对于浓度为CoH的N-香草基壬烷酰胺标准溶液所计算出的质量浓度，Ax’为供试品溶液中被测组分x的峰面积，AoL为CoL浓度N-香草基壬烷酰胺标准溶液的峰面积，AoH为CoH浓度N-...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏悦，李智宁，张丽先，宁二娟，陈欣，全彦涛，李晓，范毅，马艳妮，王学方，李飞飞，陈飞，徐如冰，
申请(专利权)人：河南科高中标检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41