液相色谱串接质谱联用仪检测茶叶中的三甲基锍的检测方法技术

液相色谱串接质谱联用仪检测茶叶中的三甲基锍的检测方法，其步骤如下：1)样品前处理；2)液相色谱串接质谱进行检测的色谱质谱条件：流动相：有机相为乙腈，水相为浓度为15mmol/L，每升含1.5mL甲酸的乙酸铵‑甲酸溶液；梯度洗脱；流速0.30mL/min；进样量25uL；离子源：电喷雾离子源ESI，正离子扫描；质谱扫描方式为多反应监测MRM；喷雾电压4200V；壳气压力40arb；碰撞气(Ar/m)Torr:1.5。该检测方法的回收率、精密度符合相关的技术规范，可有效检测出茶叶中三甲基锍的残留，满足欧盟对茶叶中三甲基锍残留限量的检测要求。

Determination of three methyl matte in tea by liquid chromatography tandem mass spectrometry

The steps of liquid chromatography tandem mass spectrometry for the determination of trimethylmatrium in tea are as follows: 1) sample pretreatment; 2) chromatographic and mass spectrometric conditions for the determination of trimethylmatrium in tea by liquid chromatography tandem mass spectrometry: mobile phase: acetonitrile, aqueous phase: ammonium acetate / formic acid solution containing 1.5mL formic acid per liter; gradient; Elution; Flow rate 0.30 mL/min; Sample Volume 25 uL; Ion source: ESI, positive ion scanning; Mass spectrometry scanning mode for multi-reaction monitoring MRM; Spray voltage 4200V; Shell pressure 40 arb; Collision gas (Ar/m) Torr: 1.5. The recovery and precision of this method meet the relevant technical specifications, and can effectively detect the residue of trimethyl matte in tea, which meets the European Union detection requirements for the residue limit of trimethyl matte in tea.

【技术实现步骤摘要】
液相色谱串接质谱联用仪检测茶叶中的三甲基锍的检测方法
本专利技术申请涉及茶叶中的三甲基锍的检测，尤其是指用液相色谱串接质谱联用仪对茶叶中三甲基锍进行检测的检测检测方法
技术介绍
农药草甘膦(glyphosate)是一种广谱、苗后、非选择性的除草剂,以草甘膦酸或者盐的形式存在，常见的有草甘膦异丙酸盐、草甘膦三甲基锍盐、草甘膦钾盐等。草甘膦具有良好的除草效果，在全球各地都得到了广泛的使用。当使用草甘膦三甲基锍盐作为除草剂使用时，会在茶叶中产生三甲基锍(trimethylsulfonium)的残留。为此，欧盟对输入该地区的茶叶中的三甲基锍设定了最高残留限量。其中非有机茶叶的残留限量为50ug/kg；有机茶叶依据国际有机农业联盟以及国际食品法典委员会制定的原则，则采用了一律标准，均要求不得检出(检出限为10ug/kg)。中国是世界最大的茶叶生产和贸易国，也是欧盟茶叶的最大输入国。据相关资料统计，2014年中国出口到欧盟的茶叶为2.49万吨，货值达到1.04亿美元。近年来，欧盟不断地调整、修改茶叶中农药残留的限量要求，实施了越来越严格的残留限量标准。2015年，欧盟通报中国产茶叶的农药残留不合格就达到22次，造成中国茶叶出口多次受阻。由于国内对于茶叶中的三甲基锍的检测的检出率比较低，如何提高茶叶中三甲基锍的检出率就亟待解决。基于目前国内国际均没有采用质谱技术检测茶叶中的三甲基锍，也没有公开的文献报道。因此专利技术人质谱技术方面着手进行了深入研究，基于风险分析的考虑，有必要建立三甲基锍的检测方法，对相关茶叶中的残留情况进行筛查。本研究选择了四种茶叶：绿茶、红茶、铁观音、茉莉花茶作为研究对象。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种利用液相色谱串接质谱对茶叶中三甲基锍的检测方法，其可以有效检出茶叶中三甲基锍的含量，提高茶叶中三甲基锍的检出率。为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是液相色谱串接质谱联用仪检测茶叶中的三甲基锍的检测方法，其步骤如下：1)样品前处理；2)液相色谱串接质谱进行检测的色谱质谱条件：流动相：有机相为乙腈，水相为浓度为15mmol/L，每升含1.5mL甲酸的乙酸铵-甲酸溶液；梯度洗脱；流速0.30mL/min；进样量25uL；离子源：电喷雾离子源ESI，正离子扫描；质谱扫描方式为多反应监测MRM；喷雾电压4200V；壳气压力40arb；碰撞气(Ar/m)Torr:1.5。步骤1)中样品前处理的方法包括制备液相色谱质谱检测用样品的方法：取待测茶叶打碎过100目筛，收集筛下物作为样品；称取样品100mg置于容器中，加入15mL提取液以及2mL过氧化氢溶液，浸泡20min；然后加热沸腾至剩余的提取液大约为3mL左右，取下冷却至室温后，置于离心管中，用少量样品提取液分3次清洗所述容器后用样品提取液定容至刻度，以8000r/min速率离心5min；取上清液1mL加入100mgPSA,涡旋1min，10000r/min速率离心5min，取上清液2mL过亲水膜，所得滤液供液相色谱质谱检测使用；其中所述提取液为浓度为0.77g/L、每升含2mL甲酸的乙酸铵水溶液。步骤1)中样品前处理的方法包括样品基质液的处理方法，其步骤为称取粉碎过20目筛后的茶叶样品100mg置于容器中，加入15mL提取液以及2mL过氧化氢溶液，浸泡20min；加热沸腾至剩余的提取液约为3mL左右，取下冷却至室温后，转移至离心管中；用少量样品提取液分3次清洗所述容器后用样品提取液定容至刻度，以8000r/min速率离心5min；取上清液8mL加入300mgPSA,涡旋1min，10000r/min速率离心5min，取上清液6mL过亲水膜，所得滤液为样品基质液，用于倍比稀释三甲基溴化锍的标准溶液生成标准曲线；其中所述提取液为浓度为0.77g/L、每升含2mL甲酸的乙酸铵水溶液。色谱柱为Hillic亲水柱。检测母离子为77.1m/z，定量子离子62.4m/z、碰撞能量15ev，定性子离子47.4m/z、碰撞能量25ev。本专利技术方法的检出限、定量限分别为4.0ug/kg和10.0ug/kg。该检测方法的回收率、精密度符合相关的技术规范，满足欧盟对茶叶中三甲基锍残留限量的检测要求。该方法不仅可以用于茶叶中三甲基锍的检测，也为其他植物产品中三甲基锍的检测提供了参考基础。附图说明图1，三甲基溴化锍的标准工作曲线。图2，绿茶、红茶、铁观音样品基质液配制的标准曲线。图3，三甲基溴化锍的总离子流图。图4.绿茶阴性样品总离子流图。图5，绿茶加标样品总离子流图。图6，红茶阴性样品总离子流图。图7，红茶加标样品总离子流图。具体实施方式本专利技术涉及到各仪器及药品规格如下：ThermoTSQQuantanAccess液相色谱-串接质谱仪：配电喷雾离子源(ESI)和自动进样器(FinnigenSurveyor)；电子天平：感量0.1mg(瑞士梅特勒公司)；3K15高速冷冻离心机(Sigma公司)；乙腈为色谱纯(德国Merck公司)；甲酸、乙酸铵、过氧化氢为分析纯(上海国药集团)；N-丙基乙二胺固体粉末(PSA，上海安普公司)。实验用水为Milli-Q高纯水。高脚烧杯(直径30mm，50mL)。15mL带刻度的离心管(上海安普公司)。石墨化炭黑(GCB，深圳逗点公司)。亲水膜(0.22um，上海安普公司)。样品提取液(0.77g乙酸铵/1000mL水，含2mL甲酸)。三甲基溴化锍标准品购自德国Dr.Ehrenstorfe公司，纯度大于99％。标准溶液：用乙腈将三甲基溴化锍标准品配制为10.0mg/L的标准储备液，于4℃保存。根据实验需要用样品提取液稀释至适当浓度作为三甲基溴化锍标准溶液。实验所用的样品采购自当地市场，均为经过有机认证公司认证的有机产品。本专利技术的液相色谱串接质谱联用仪检测茶叶中的三甲基锍的检测其步骤如下。1)样品制备取100g绿茶茶叶样品，用组织捣碎机打碎后过100目的筛子，收集筛下物20g充分混合均匀作为样品用于检测。1.1)样品基质液的制备称取绿茶样品100mg(精确至1mg)，置于高脚烧杯中，加入15mL样品提取液以及2mL过氧化氢溶液，浸泡20min。放到电炉上加热沸腾至剩余的提取液大约为3mL左右，取下冷却至室温后，转移至15mL带刻度的离心管中。用少量提取液分3次清洗高脚烧杯，合并于上述离心管中，用提取液定容至刻度，以8000r/min速率离心5min。取上清液8mL加入300mgPSA,涡旋1min，10000r/min速率离心5min，取上清液6mL过亲水膜，所得滤液为样品基质液，用于倍比稀释三甲基溴化锍的标准溶液生成标准曲线。1.2)制备液相色谱质谱检测用样品称取绿茶样品100mg(精确至1mg)，置于高脚烧杯中，加入15mL提取液以及2mL过氧化氢溶液，浸泡20min。放到电液相色谱质谱检测用样品制备炉上加热沸腾至剩余的提取液大约为3mL左右，取下冷却至室温后，转移至15mL带刻度的离心管中。用少量提取液分3次清洗高脚烧杯，合并于上述离心管中，用提取液定容至刻度，以8000r/min速率离心5min。取上清液1mL加入100mgPSA,涡旋1min，10000r/min速率离心5min，取上清液2mL过亲水膜，所得滤液作为检测样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.液相色谱串接质谱联用仪检测茶叶中的三甲基锍的检测方法，其步骤如下：1)样品前处理；2)液相色谱串接质谱进行检测的色谱质谱条件：流动相：有机相为乙腈，水相为浓度为15mmol/L，每升含1.5mL甲酸的乙酸铵‑甲酸溶液；梯度洗脱；流速0.30mL/min；进样量25uL；离子源：电喷雾离子源ESI，正离子扫描；质谱扫描方式为多反应监测MRM；喷雾电压4200V；壳气压力40arb；碰撞气(Ar/m)Torr:1.5。

【技术特征摘要】
1.液相色谱串接质谱联用仪检测茶叶中的三甲基锍的检测方法，其步骤如下：1)样品前处理；2)液相色谱串接质谱进行检测的色谱质谱条件：流动相：有机相为乙腈，水相为浓度为15mmol/L，每升含1.5mL甲酸的乙酸铵-甲酸溶液；梯度洗脱；流速0.30mL/min；进样量25uL；离子源：电喷雾离子源ESI，正离子扫描；质谱扫描方式为多反应监测MRM；喷雾电压4200V；壳气压力40arb；碰撞气(Ar/m)Torr:1.5。2.根据权利要求1所述的液相色谱串接质谱联用仪检测茶叶中的三甲基锍的检测方法，其特征在于步骤1)中样品前处理的方法包括制备液相色谱质谱检测用样品的方法：取待测茶叶打碎过100目筛，收集筛下物作为样品；称取样品100mg置于容器中，加入15mL提取液以及2mL过氧化氢溶液中浸泡大于20min；然后加热沸腾至剩余的提取液约为3mL，取下冷却至室温后，置于离心管中，用提取液定容至刻度，以8000r/min速率离心5min；取上清液1mL加入100mgPSA,涡旋1min，10000r/min速率离心5min，取上清液2mL过亲水膜，所得滤液供液相色谱质谱检测使用；其中所述提取液为浓度为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：周洪斌，李丽，王现平，孙俪，任丽丽，
申请(专利权)人：镇江出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心，镇江高等职业技术学校，
类型：发明
国别省市：江苏,32