一种UPLC-Q-TOF-MS-MS联用测定白酒中八种甜味剂的方法技术

本发明专利技术公开了一种UPLC‑Q‑TOF‑MS‑MS联用测定白酒中八种甜味剂的方法，首先待测酒样通过沸水浴蒸发除醇，然后以UPLC为分离系统，利用C18色谱柱对待测酒样进行梯度洗脱分离，在梯度洗脱的过程中采用MS‑MS模式进行分段数据采集，以八种甜味剂的特征分子离子及离子碎片为监测离子，将获得的待测样品谱图与标准品谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，然后通过线性回归方程对各甜味剂进行定量。本发明专利技术方法检出限低至10μg/L，线性相关系数大于0.99，回收率在80％‑120％之间，相关标准偏差在10％以内，说明白酒中八种甜味剂可以用本方法检测。

A UPLC-Q-TOF-MS-MS method for the determination of eight sweeteners in Chinese spirits

The invention discloses a method for determining eight kinds of sweeteners in liquor by UPLC_Q_TOF_MS_MS. Firstly, alcohol is removed by evaporation in boiling water bath, and then the liquor is gradiently eluted and separated by using C18 chromatographic column with UPLC as separation system. In the process of gradient elution, MS_MS mode is adopted to carry out segmentation data. The characteristic molecule ions and ion fragments of eight kinds of sweeteners were used as monitoring ions. The spectra of the samples were compared with those of the standard samples. The corresponding substances were the same retention time. Then the sweeteners were quantified by linear regression equation. The detection limit of the method is as low as 10 ug/L, the linear correlation coefficient is greater than 0.99, the recovery rate is between 80%120%, and the correlation standard deviation is within 10%. The method can be used to detect eight sweeteners in liquor.

【技术实现步骤摘要】
一种UPLC-Q-TOF-MS-MS联用测定白酒中八种甜味剂的方法
本专利技术涉及一种UPLC-Q-TOF-MS-MS联用测定白酒中八种甜味剂的方法，属于发酵工业中的化学分析和仪器分析

技术介绍
传统优质白酒的醇甜感是由其本身含有的多元醇或酮等甜味物质所致，如2，3-丁二醇、丙三醇、双乙酰等。为了适应新的消费需求，增加白酒的甜味、回甜感，又能有效提高生产效率成为众多白酒企业竞相研究的课题。现在不少企业为了改善口感，向生产的白酒中添加各种甜味剂，而国家标准明确规定固态法白酒中不允许添加非发酵产生的呈香呈味物质。固液和液态法白酒中仅允许用香醅串香或用食品添加剂调味调香，而不允许添加任何甜味剂。据调研发现，现从市场中抽查的白酒中可能检出的甜味剂有以下7种：糖精钠、安赛蜜、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜、三氯蔗糖和甜菊糖苷等。糖精钠，又称可溶性糖精，是一种白色结晶性粉末的甜味剂，甜度为蔗糖的300-500倍，非能量甜味剂，不参与人体的代谢吸收，但大量食用会对肝脏和神经系统造成危害。安赛蜜又名乙酰磺胺酸钾、AK糖，为白色结晶状粉末，极易溶于水，不吸湿，甜度为蔗糖的200倍，具有无营养、无热量，在人体内不代谢、不吸收的特点，但其对肝脏和神经系统能够造成危害。甜蜜素为白色针状、片状结晶或结晶状粉末，又名环己胺磺酸钾，是由氨基磺酸与环己胺及氢氧化钠反应而制成的非营养型合成甜味剂，其甜度为蔗糖的30倍，水溶性好，酸稳定性强，成本较低，但研究表明，食用甜蜜素和糖精的混合物可致膀胱癌。阿斯巴甜又名甜味素、蛋白糖、天冬甜母、天冬甜精、天苯糖等，是由L-苯丙氨酸先与甲醇酯化后再和氨基酸L-天冬氨酸缩合酰胺化产生的一种经甲基酯化后的二肽类化合物，甜度为蔗糖的200倍，占世界糖替代品市场份额的62％，由于其高甜度、低热量、对人体无危害，适合于除苯丙酮酸尿患者的其他任何人群，被广泛用于食品中。纽甜是一种白色结晶粉末，无能量，属二肽类强力甜味剂，甜度为蔗糖的7000-13000倍，是阿斯巴甜的40倍，甜味纯正，无苦味和金属味，因其稳定性好、甜味协调、无龋齿性、适用人群广、安全性高，被广大企业应用于各种食品中。三氯蔗糖，一种白色粉末状物质，极易溶于水，有较好的酸稳定性、光稳定性和热稳定性，甜度为蔗糖600-800倍，无能量，甜味纯正，零热量，不会造成龋齿，适合任何人群，被认为是当今最安全的甜味剂，已被包括中国在内的30多个国家批准可作为甜味剂使用。甜菊糖苷纯品为白色结晶粉末，易溶于水、甲醇、乙醇，有较好的耐热性、耐盐性和稳定性，甜度是蔗糖的200-300倍，热值为蔗糖的1/300，对人体无副作用，是经我国卫生部、轻工业部批准使用的最接近蔗糖口味的天然低热值甜味剂，它是继甘蔗、甜菜糖之外第3种有开发价值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被国际上誉为“世界第三蔗糖”，因此不少食品加工企业将其作为蔗糖的替代品。目前，对白酒中甜味剂的检测方法主要有：高效液相色谱法、离子色谱法、高效液相色谱一质谱联用技术、超高效液相色谱法一质谱联用技术、气相色谱法、薄层层析法、比色法等。薄层层析法和比色法主要应用于食品中甜蜜素的检测，因检出限比较高，操作繁琐，重现性差，现已很少用于食品中甜味剂的检测，且食品中甜蜜素的检测国家标准修订后已将此两种方法删除。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种UPLC-Q-TOF-MS-MS(超高效液相色谱和飞行时间质谱)联用测定白酒中八种甜味剂的方法，可在白酒中同时定量分析安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、阿力甜、纽甜、三氯蔗糖、甜菊糖苷八种甜味剂。本专利技术检测方法的前处理简单，为沸水浴蒸发除醇，定量方法检出限低至10μg/L，线性相关系数大于0.99，回收率在80-120％之间，相关标准偏差在10％以内，说明白酒中的以上八种甜味剂可以通过本专利技术方法进行准确检测，且方法简单、高效、灵敏度高。本专利技术UPLC-Q-TOF-MS-MS联用测定白酒中八种甜味剂的方法，首先待测酒样通过沸水浴蒸发除醇，然后以UPLC为分离系统，利用C18色谱柱对待测酒样进行梯度洗脱分离，在梯度洗脱的过程中采用MS-MS模式进行分段数据采集，以八种甜味剂的特征分子离子及离子碎片为监测离子，将获得的待测样品谱图与标准品谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，然后通过线性回归方程对各甜味剂进行定量。本专利技术UPLC-Q-TOF-MS-MS测定白酒中八种甜味剂的方法，包括如下步骤：步骤1：前处理利用沸水浴蒸发除去待测酒样中的乙醇，白酒中含有的乙醇较多，如果在前处理中不去除乙醇，将会产生基质效应，影响白酒中甜味剂的定量分析。步骤2：色谱检测条件色谱柱：BEHC18(2.1mm×50mm1.7μm)；流动相：流动相A：0.1％乙酸-水，流动相B：0.1％乙酸-乙腈；流动相A的配制过程如下：量取1mL乙酸于1L容量瓶中，用超纯水定容至1L，0.22μm水相滤膜抽滤后待用。流动相B的配制过程如下：量取0.5mL乙酸于500mL容量瓶中，用乙腈(色谱纯)定容至500mL。流动相梯度洗脱比例：时间(min)流速(mL/min)A(％)B(％)0.00.290.010.04.00.280.020.06.00.210.090.08.00.210.090.08.10.290.010.010.00.290.010.0流速：0.2mL/min；压力范围：0-18000psi；柱温：30℃；进样体积：5μL。步骤3：质谱检测条件MS-MS模式；ESI负离子检测模式；锥孔电压：20-40V；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流量：800L/h；锥孔气流量：50L/h；质量范围：50-1200Da。步骤4：标准品的配制分别配制1g/L的安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、甜菊糖苷、纽甜的标准溶液，将八种甜味剂的标准溶液混合并逐级稀释，获得不同浓度的混合标准品溶液；步骤4中，逐级稀释获得至少五个不同浓度的混合标准品溶液，混合标准品溶液中各甜味剂的浓度≥50μg/L。步骤5：标准谱图与标准曲线的绘制将步骤4配制的不同浓度的混合标准品溶液送样进行色谱洗脱分离，根据八种甜味剂保留时间(安赛蜜1.07min、糖精钠1.41min、甜蜜素1.60min、三氯蔗糖2.81min、阿斯巴甜3.29min、阿力甜4.30min、甜菊糖苷5.52min、纽甜5.75min)的不同在色谱洗脱分离的过程中利用MS-MS模式进行分段采集，获得八种甜味剂标准品的标准谱图，以每种甜味剂的浓度对其保留时间作图，获得其相应的标准曲线；线性回归方程及检出限见下表：待测组分线性范围线性回归方程线性相关系数检出限(mg/L)安赛蜜0.05-0.25.56575*X-70.86070.9990.01糖精钠0.05-0.21.02524*X-15.97810.9980.01甜蜜素0.05-0.220.642*X-333.2720.9980.01三氯蔗糖0.05-0.221.1612*X-615.4150.9970.05阿斯巴甜0.05-0.27.11332*X-150.80.9990.01纽甜0.05-0.247.6501*X-1410.490.9980.01阿力甜0.05-0.244.6377*X-887本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种UPLC‑Q‑TOF‑MS‑MS联用测定白酒中八种甜味剂的方法，其特征在于：首先待测酒样通过沸水浴蒸发除醇，然后以UPLC为分离系统，利用C18色谱柱对待测酒样进行梯度洗脱分离，在梯度洗脱的过程中采用MS‑MS模式进行分段数据采集，以八种甜味剂的特征分子离子及离子碎片为监测离子，将获得的待测样品谱图与标准品谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，然后通过线性回归方程对各甜味剂进行定量。

【技术特征摘要】
1.一种UPLC-Q-TOF-MS-MS联用测定白酒中八种甜味剂的方法，其特征在于：首先待测酒样通过沸水浴蒸发除醇，然后以UPLC为分离系统，利用C18色谱柱对待测酒样进行梯度洗脱分离，在梯度洗脱的过程中采用MS-MS模式进行分段数据采集，以八种甜味剂的特征分子离子及离子碎片为监测离子，将获得的待测样品谱图与标准品谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，然后通过线性回归方程对各甜味剂进行定量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：前处理利用沸水浴蒸发除去待测酒样中的乙醇；步骤2：色谱检测条件色谱柱：BEHC18(2.1mm×50mm1.7μm)；流动相：流动相A：0.1％乙酸-水，流动相B：0.1％乙酸-乙腈；洗脱方式：梯度洗脱；流速：0.2mL/min；压力范围：0-18000psi；柱温：30℃；进样体积：5μL；步骤3：质谱检测条件MS-MS模式；ESI负离子检测模式；锥孔电压：20-40V；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流量：800L/h；锥孔气流量：50L/h；质量范围：50-1200Da。步骤4：标准品的配制分别配制1g/L的安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、甜菊糖苷、纽甜的标准溶液，将八种甜味剂的标准溶液混合并逐级稀释，获得不同浓度的混合标准品溶液；步骤5：标准谱图与标准曲线的绘制将步骤4配制的不同浓度的混合标准品溶液送样进行色谱洗脱分离，根据八种甜味剂保留时间的不同在色谱洗脱分离的过程中利用MS-MS模式进行分段采集，获得八种甜味剂标准品的标准谱图，以每种甜味剂的浓度对其保留时间作图，获得其相应的标准曲线；步骤6：待测样品的检测将经步骤1前处理后的待测酒样进样进行色谱洗脱分离，在色谱洗脱分离的过程中利用UPLC-Q-TOF-MS-MS的MS-MS模式分段采集数据，将...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘露，刘国英，马雷，马金同，胡心行，沈小梅，李安军，
申请(专利权)人：安徽润安信科检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34