一种测定脂质体药物包封率的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定脂质体药物包封率的方法，利用带相反电荷的凝胶大分子与脂质体发生作用来实现包封率的测定，所述方法包括步骤：（1）测定脂质体的电位；（2）根据所测的电位，选择与之电荷相反的凝胶，将带相反电荷的凝胶加入到脂质体中，正负电荷中和后，形成大颗粒，离心，静置，得上清液和沉淀；（3）取沉淀，加入溶剂使凝胶溶解后，离心，加入有机溶剂，使脂质体膜溶解，将药物释放出来，测定包封的药量；（4）根据包封的药量，计算包封率。本发明专利技术利用带相反电荷的凝胶与脂质体发生作用来实现包封率的测定，克服了现有技术中游离药物与包封药物分离度差，测定结果不准确的问题。该方法准确度高，重复性好，适合推广应用。

A method for determining encapsulation efficiency of liposomes

The present invention discloses a method for determining the entrapment efficiency of liposomes by the interaction between gel macromolecules with opposite charges and liposomes. The method comprises the following steps: (1) determining the potential of liposomes; (2) selecting gels with opposite charges according to the measured potential and reversing the entrapment efficiency. The charged gel is added to the liposomes, and the positive and negative charges are neutralized to form large particles, centrifuge, and stand still to obtain supernatant and precipitation; (3) take precipitation, add solvent to dissolve the gel, centrifuge, add organic solvent to dissolve the liposomes membrane, release the drug, determine the amount of the encapsulated drug; (4) according to the encapsulation The entrapment efficiency was calculated. The invention uses the gel with opposite charge to interact with the liposome to realize the determination of the entrapment efficiency, and overcomes the problems of poor separation degree between the free medicine and the entrapment medicine in the prior art and inaccurate determination result. The method has high accuracy and good repeatability, and is suitable for popularization and application.

【技术实现步骤摘要】
一种测定脂质体药物包封率的方法
本专利技术属于药物制剂及生物
，具体涉及一种测定脂质体药物包封率的方法。
技术介绍
脂质体是一种新颖的药物载体，是一种类似生物膜结构的双分子层结构,脂质膜主要由天然的或合成的磷脂构成。被脂质体包封的药物可随脂质体输送至不同的组织和细胞，通过破坏脂质体膜将药物释放，靶向于给药组织。脂质体具有靶向性、可生物降解、无免疫原性、提高药物稳定性等特点。目前评价脂质体指标包括形态与粒径及其分布、包封率、体外释放等，其中包封率是脂质体质量评价的重要指标之一。脂质体包封率的测定通常是先将含药脂质体与游离药物分离，然后通过其他方法直接或间接计算其浓度。测定包封率的方法有多种，包括透析法、超速离心法、凝胶柱层析法、离子交换树脂法、超滤膜过滤法等。透析法利用半透膜分子大小差别，此方法简单，重复性好，但耗时较长，需耗较多介质，易造成药物渗漏。超速离心法利用游离药物与含药脂质体的重力差异进行分离，但该方法成本较高，时间较长，重现性差，原因可能是由于离心过程中一部分小脂质体丢失，或脂质体中药物渗漏丢失。凝胶柱层析法是利用脂质体和游离药物相对分子质量的差异进行分离所用的层析柱为琼脂糖凝胶柱和葡聚糖凝胶柱，但存在洗脱时间长、体积大、药物浓度低等。阳离子交换树脂法的机制是基于离子交换，即只要物质表面有可交换的离子存在，便可被离子交换树脂通过离子交换而捕捉，故无论是游离药物，还是药物晶或是脂质体碎片，均可被吸附而与含药脂质体分离。超滤膜过滤法利用游离药物能通过滤膜，而含药脂质体被截留在滤膜上来分离游离药物与脂质体。该法滤过时间长、滤膜体积大、药物浓度不高。另外，测定脂质体包封率时，无论离心还是过滤，得到的溶液都比较浑浊，造成结果有很大误差，影响结果的准确性。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的首要目的在于提供一种测定脂质体药物包封率的方法，该方法利用带相反电荷的凝胶与脂质体发生作用来实现包封率的测定，准确度高，重复性好。本专利技术是通过以下技术方案实现：本专利技术提出的方案之一：一种测定脂质体药物包封率的方法，利用带相反电荷的凝胶与脂质体发生作用来实现包封率的测定，所述方法包括如下步骤：（1）测定脂质体的电位；（2）根据所测的电位，选择与之电荷相反的凝胶，将带相反电荷的凝胶加入到脂质体中，正负电荷中和后，形成大颗粒，离心，得上清液和沉淀；（3）取沉淀，加入溶剂使凝胶溶解后，离心，加入有机溶剂，使脂质体膜溶解，将药物释放出来，测定包封的药量；（4）根据包封的药量，直接计算包封率。本专利技术根据脂质体的电位，在脂质体中加入带相反电荷的凝胶（凝胶的带电总量与脂质体的电荷数相同），带相反电荷的凝胶大分子与脂质体发生作用，由于正负电荷的相互结合，形成更大的颗粒，同时减少了静电荷，更加容易聚集，经离心，脂质体充分沉淀后，加入有机溶剂溶解脂质体膜，将包囊在脂质体中的药物完全释放出来，实现游离药物与包封药物的完全分离，从而测得包囊在里面的药量，根据包封的药量，可以直接准确快速的测定出脂质体的包封率（EE%），计算公式如下：EE%=W包封/W总其中，W包封为包封在脂质体中的药物量；W总为加入的药物总量。优选的，步骤（2）中，所述离心的转速为1000rpm～10000rpm，离心时间5min～30min。本专利技术的脂质体可根据本领域常规制备方法制备得到（如注入法），在脂质体制备过程中，根据所使用的磷脂材料的不同，可以得到带正电的脂质体和带负电的脂质体，根据所测的电位，如果是带正电荷的脂质体可以选用带负电的凝胶；如果是带负电荷的脂质体可以选用带正电的凝胶，以使正负电荷中和，形成更大的颗粒。优选的，所述带负电的凝胶包括硫酸软骨素、透明质酸、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基丙级纤维素或卡波普类中的一种或几种的混合；所述带正电的凝胶包括壳聚糖、硝酸纤维素酯、多聚左旋赖氨酸或合成的季铵盐类高分子物质（例如季铵盐型阳离子聚乙烯醇、聚甲基丙烯酰胺乙基-苄基-二甲基氯化铵等）中的一种或几种的混合。步骤（3）中，在沉淀中，先加入溶剂，目的是使凝胶溶解，再加入有机溶剂，使脂质体膜溶解，从而将包封在脂质体中的药物完全释放出来。所述溶剂为凝胶溶解用溶剂，根据凝胶的性质选自水、醋酸等中的一种或几种的混合；所述有机溶剂为乙醇、氯仿、乙醚、甲醇、丙酮、正己烷或芳香烃中的一种或几种的混合。本专利技术提出的方案之二：一种测定脂质体药物包封率的方法，利用带相反电荷的凝胶与脂质体发生作用来实现包封率的测定，所述方法包括如下步骤：（1）测定脂质体的电位；（2）根据所测的电位，选择与之电荷相反的凝胶，将带相反电荷的凝胶加入到脂质体中，正负电荷中和后，形成大颗粒，离心，得上清液和沉淀；（3）取上清液，测定未包封的药量；（4）根据未包封的药量，间接计算包封率。本专利技术根据脂质体的电位，在脂质体中加入带相反电荷的凝胶（凝胶的带电总量与脂质体的电荷数相同），带相反电荷的凝胶大分子与脂质体发生作用，由于正负电荷的相互结合，形成更大的颗粒，同时减少了静电荷，更加容易聚集，经离心，上清液非常透明，含有未包封的游离药物，通过紫外或高效液相法测得未包封的药量，根据未包封的药量，间接测定出脂质体的包封率（EE%），计算公式如下：EE%=（W总-W未包封）/W总其中，W未包封为未包封在脂质体中的药物量；W总为加入的药物总量。优选的，步骤（2）中，所述离心的转速为1000rpm～10000rpm，离心时间5min～30min。优选的，所述凝胶包括带正电的凝胶和带负电的凝胶，所述带负电的凝胶包括硫酸软骨素、透明质酸、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基丙级纤维素或卡波普类中的一种或几种的混合；所述带正电的凝胶包括壳聚糖、硝酸纤维素酯、多聚左旋赖氨酸或合成的季铵盐类高分子物质中的一种或几种的混合。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：本专利技术利用带相反电荷的凝胶与脂质体发生作用来实现包封率的测定，克服了现有技术中游离药物与包封药物分离度差，测定结果不准确的问题。该方法准确度高，重复性好，适合推广应用。具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术，以下实施例为本专利技术具体的实施方式，但本专利技术的实施方式并不受下述实施例的限制。实施例1：丹皮酚大豆脂质体一种测定脂质体药物包封率的方法，利用带相反电荷的凝胶与脂质体发生作用来实现包封率的测定，所述方法包括如下步骤：（1）测定用大豆磷脂、胆固醇等通过注入法制备成的丹皮酚大豆脂质体电位，带负电；（2）根据所测的电位，选择带正电的壳聚糖，将带正电荷的壳聚糖加入到丹皮酚大豆脂质体中，利用正负电荷中和相聚沉的原理，正负电荷中和后，形成大颗粒，在8000rpm下离心10min，静置，得上清液和沉淀；（3）取沉淀，先用醋酸将壳聚糖溶解，离心，沉淀加入乙醇使脂质体膜溶解，将药物释放出来，采用高效液相法测定包封的药量W包封；（4）根据包封的药量，根据公式直接计算包封率：EE%=W包封/W总。对不同批号的丹皮酚大豆脂质体进行测定包封率和回收率，测定结果如下表1所示：表1：直接法测定结果批号201803162018031820180320包封率50.2%51.1%50.6%回收率100.9%98.7%99.5%实施例2：丹皮酚大豆脂质体一种测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定脂质体药物包封率的方法，其特征在于，利用带相反电荷的凝胶与脂质体发生作用来实现包封率的测定，所述方法包括如下步骤：（1）测定脂质体的电位；（2）根据所测的电位，选择与之电荷相反的凝胶，将带相反电荷的凝胶加入到脂质体中，正负电荷中和后，形成大颗粒，离心，得上清液和沉淀；（3）取沉淀，加入溶剂使凝胶溶解后，离心，加入有机溶剂，使脂质体膜溶解，将药物释放出来，测定包封的药量；（4）根据包封的药量，直接计算包封率。

【技术特征摘要】
1.一种测定脂质体药物包封率的方法，其特征在于，利用带相反电荷的凝胶与脂质体发生作用来实现包封率的测定，所述方法包括如下步骤：（1）测定脂质体的电位；（2）根据所测的电位，选择与之电荷相反的凝胶，将带相反电荷的凝胶加入到脂质体中，正负电荷中和后，形成大颗粒，离心，得上清液和沉淀；（3）取沉淀，加入溶剂使凝胶溶解后，离心，加入有机溶剂，使脂质体膜溶解，将药物释放出来，测定包封的药量；（4）根据包封的药量，直接计算包封率。2.根据权利要求1所述的一种测定脂质体药物包封率的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述离心的转速1000rpm～10000rpm，离心时间5min～30min。3.根据权利要求1所述的一种测定脂质体药物包封率的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述凝胶包括带正电的凝胶和带负电的凝胶，所述带负电的凝胶包括硫酸软骨素、透明质酸、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基丙级纤维素或卡波普类中的一种或几种的混合；所述带正电的凝胶包括壳聚糖、硝酸纤维素酯、多聚左旋赖氨酸或合成的季铵盐类高分子物质中的一种或几种的混合。4.根据权利要求1所述的一种测定脂质体药物包封率的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述有机溶剂为乙醇、氯仿、乙醚、甲醇、丙酮...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏红梅，刘琴琴，胡青，王柯入，田林林，谢亚蓝，崔美佳，张哲，张晓辉，
申请(专利权)人：安徽中医药大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34