【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法。
技术介绍
1、肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration,hld)，又称威尔逊病(wilson'sdisease,wd)，是一种常染色体隐性遗传导致atp7b基因突变及其功能缺失引起的铜代谢障碍性疾病。多余的铜离子无法从细胞内转运出去，久之大量铜沉积在肝、脑、角膜、肾等器官，而引起临床上肝脏、肾脏功能损害及精神智能障碍、运动障碍等。世界人群发病率为1/3万～1/10万，欧美国家并不多见，而亚洲尤其是东亚及东南亚地区发病率较高，其中我国发病率明显高于其它国家。
2、如何使中医药疗效得到国内外业界的广泛认可,使传统的中医学理论体系及其独特的诊疗方法得到科学的验证,成为中医学发展并走向世界的关键问题。故寻找符合中医药客观化评价标志物是其关键举措。中医学的证候包括“证”与“候”，证是疾病的本质，候是其表现形式。证候研究作为证型规范化的研究前提与基础，也是中医药当今研究的关键问题之一。中医的“证”是机体在致病因素作用下，机体内外环境各系统之间相互关系发生紊乱所产生的病理生理状态，是一种综合性的诊断概念。提示对证候的研究不可仅局限于某一具体脏腑组织器官，必须回归到中医学整体观念上来。代谢组学主要研究机体在被扰动后，内源性代谢物的变化及其与生理、病理表型的之间的有机联系，结合生物信息学方法阐明内源性小分子代谢物变化规律，获得关键生物标志物，表征生物体的整体功能状态。由于代谢(物)处于生物系统生化活动调控的末端,包含着
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是提供一种代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用下述技术方案：
3、本专利技术提供的一种代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，包括以下步骤：
4、一、试验内容
5、1)、血清采样，并分别按下表对其进行分组编号：
6、
7、2)、进行血清样品的制备，然后实施1h nmr谱采集；
8、3)、对上述采集到的数据进行预处理：
9、首先，将各血清样本的自由感应衰减信号fid信号导入mestrenova软件；依据hmdb来进行谱峰归属；随后将积分后的数据导入simca-p软件进行主成分分析、偏最小二乘-判别分析和正交偏最小二乘-判别分析；
10、二、结果与分析
11、4)、主成分分析pca
12、在分段积分之后，再对每个积分间距的数据进行归一化处理；
13、使用simca-p+软件对归一化后的数据进行模式识别多变量分析,在主成分分析pca中，使用自适换算uv、帕莱托par的数据标度换算方式；进行偏最小二乘法pls使用帕莱托par、自适换算uv的数据标度换算方式；以发现nmr数据x变量和y变量样本分组信息之间的相关关系；偏最小二乘判别分析pls-da对模型的质量用交叉验证后得到的r2x和q2，二者分别代表模型可解释的变量和模型的可预测度，对模型有效性进行评判，通过皮尔森相关系数显著性差异检测判定具有显著性变化的代谢物；
14、41)绘制基于6组获得血清的1h cpmg nmr谱的2d和3d的pca得分图；
15、42)、比较每组诊断疾病与正常健康体检组血清代谢差异，绘出1h cpmg nmr谱的pca、偏最小二乘判别分析pls-da、正交偏最小二乘-判别分析opls-da得分图；
16、5)、正交偏最小二乘法判别分析opls-da及筛选差异性代谢物的火山图；
17、根据痰瘀互结组/湿热内蕴组/脾肾阳虚组/肝肾阴虚组/肝气郁结组和正常健康对照组血清中代谢物的nmr数据得出的正交偏最小二乘法判别分析opls-da系数，以及vip、r和p值列表，在|r|>0.602、vip>1和p<0.05这三个临界值下，观察到五个表格中突出显示的实验组痰瘀互结组/湿热内蕴组/脾肾阳虚组/肝肾阴虚组/肝气郁结组和正常健康对照组之间的代谢物差异；
18、6)对每组和正常健康对照组血清中的代谢物差异进行二次列表；
19、7)代谢通路分析
20、在差异代谢物的基础上，分析可能引起的代谢通路变化，将数据导入metaboanalyst分析，绘图观察实验组痰瘀互结组和正常健康对照组之间代谢物差异的途径、实验组湿热内蕴组和正常健康对照组之间代谢物差异的途径、实验组脾肾阳虚组和正常健康对照组之间代谢物差异的途径、实验组肝肾阴虚组和正常健康对照组之间代谢物差异的途径、实验组肝气郁结组和正常健康对照组之间代谢物差异的途径代谢物差异的途径；
21、8)比较不同中医诊断血清代谢差异
22、81)根据最终筛选结果，比较两两组间差异共10组，筛出4组差异较强分别是：
23、 1 a组vs.d组 痰瘀互结组 肝肾阴虚组 (ty vs.gs) 2 a组vs.e组 痰瘀互结组 肝气郁结组 (ty vs.gq) 3 b组vs.e组 湿热内蕴组 肝气郁结组 (sr vs.gq) 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于：所述步骤2)血清样品的制备具体为：
3.根据权利要求2所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于：所述按质量体积比计的0.9％NaCl指的是称取0.9克氯化钠，溶解在蒸馏水中，稀释到100毫升；所述磷酸盐缓冲液浓度90mM/L，pH 7.4。
4.根据权利要求1所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于，所述步骤2)血清样品的1H NMR采集:
5.根据权利要求4所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于所述步骤2)，其中实验温度25℃，具体参数为：90°脉冲宽度，固定间隔t1为2μs，混合时间tm为120ms。
6.根据权利要求1所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特
7.根据权利要求1所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于，所述步骤6)基于火山图，综合考虑VIP值、p值及相关系数|r|，取VIP>1，p<0.05，|r|>0.497为临界值，则同时满足三个条件中两个的代谢物，计为有统计意义的代谢物。
8.根据权利要求1所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于，所述步骤7)：
9.根据权利要求1所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于，所述步骤8)，基于火山图，综合考虑VIP值、p值及相关系数|r|，取VIP>1，p<0.05，|r|>0.497为临界值，则同时满足三个条件中两个的代谢物，计为有统计意义的代谢物。
10.根据权利要求1所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于，所述步骤92)：
...【技术特征摘要】
1.代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于：所述步骤2)血清样品的制备具体为：
3.根据权利要求2所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于：所述按质量体积比计的0.9％nacl指的是称取0.9克氯化钠，溶解在蒸馏水中，稀释到100毫升；所述磷酸盐缓冲液浓度90mm/l，ph 7.4。
4.根据权利要求1所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于，所述步骤2)血清样品的1h nmr采集:
5.根据权利要求4所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提供小分子代谢标志物证据的试验方法，其特征在于所述步骤2)，其中实验温度25℃，具体参数为：90°脉冲宽度，固定间隔t1为2μs，混合时间tm为120ms。
6.根据权利要求1所述的代谢组学为肝豆状核变性中医证型提...
【专利技术属性】
技术研发人员：张娟，谢道俊，杨文明，汪瀚，韩辉，周磊，
申请(专利权)人：安徽中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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