【技术实现步骤摘要】
：本专利技术涉及药物定量分析，具体涉及一种定量分析血浆中盐菟丝子指标性成分的血药浓度检测方法。
技术介绍
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技术介绍
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1、菟丝子是旋花科植物菟丝子(cuscuta chinensis lam.)或南方菟丝子(cuscutaaustralis r.br.)的干燥成熟种子，其用药历史悠久，为补益类常用中药，具有补肾益精、安胎明目等多种功效。《得配本草》记载菟丝子的炮制方法“补肾气，淡盐水拌炒”。菟丝子作为妇科常用药，近年来，多项研究发现其醇提物有显著的拟雌激素活性，且其拟雌激素活性成分多为黄酮类。
2、申请人前期对安徽中医药大学第一附属医院妇产科近5年的住院病历进行收集，筛选出关于肾虚型胎漏、胎动不安的处方14169首，其中盐菟丝子使用频次位居首位。菟丝子作为传统的“补肾安胎”圣药，其安胎作用已被长期的临床实践所证明。前期研究发现盐菟丝子补肾安胎的疗效优于生菟丝子，并采用血清药物化学的分析方法检测到在入血成分中盐菟丝子的黄酮类成分与生菟丝子相比显著上升，但药效物质基础尚不明确。
3、lc-ms联用技术将lc高效的在线分离能力与ms的高选择性、高灵敏度的检测能力相结合，可以同时得到化合物的保留时间、在线紫外光谱、相对分子质量及特征结构碎片等丰富的信息，该方法高效快速、高灵敏度，尤其适用于含量少、不易分离得到或在分离过程中容易丢失的组分，是复杂体系分离分析和中药现代化研究最有力的研究手段之一。
4、目前建立的lc-ms分析方法检测大鼠血浆中菟丝子有效成分，只有金丝桃苷这一单一成分，对于
技术实现思路
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技术实现思路
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1、本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种定量分析血浆中盐菟丝子指标性成分的血药浓度检测方法，能够有效测定盐菟丝子水煎液指标性成分的体内浓度，并且灵敏度高，重现性好，准确度高。
2、本专利技术所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：
3、本专利技术提供了一种定量分析血浆中盐菟丝子指标性成分的血药浓度检测方法，包括以下步骤：
4、(1)血浆样品的预处理：向血浆样品中加入混合标准品和内标，混匀，加入甲醇进行萃取，混匀，离心，氮吹至溶液挥干，加入甲醇进行复溶，混匀，离心；
5、(2)色谱条件：采用c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为0.1％甲酸水溶液，洗脱梯度；
6、(3)质谱条件：采用电喷雾离子源，检测方式为负离子，山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷的定量分析离子对为461.0/284.8，去簇电压为-102.7v，碰撞能量为-27.93v；金丝桃苷的定量分析离子对为463.2/299.6，去簇电压为-118.86v，碰撞能量为-36.13v；紫云英苷的定量分析离子对为447.1/283.8，去簇电压为-102.9v，碰撞能量为-34.07v；
7、(4)采用液相色谱-质谱联用仪对混合标准品溶液进行定量分析，以指标性成分与内标的峰面积比为纵坐标，指标性成分浓度为横坐标，用加权(1/x2)最小二乘法进行线性回归；
8、(5)采用液相色谱-质谱联用仪对供试品溶液进行定量分析，按照步骤(4)得到的回归方程计算供试品中山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、紫云英苷的含量。
9、在进一步的技术方案中，所述内标为格列吡嗪。
10、在进一步的技术方案中，所述色谱柱为acquity uplc beh c18色谱柱。
11、在进一步的技术方案中，所述色谱条件还包括：自动进样器温度为4℃，柱温为30℃，流速为0.3ml/min，进样量为5μl。
12、在进一步的技术方案中，所述洗脱梯度的条件如下：
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15、在进一步的技术方案中，所述质谱条件还包括：离子源温度为550℃，监测模式为多重反应监测，气帘气体为35.0psi，碰撞气体为medium，电喷雾电压为5500.0v，气体1为50.0psi，气体2为50.0psi，扫描时间为200ms。
16、在进一步的技术方案中，所述格列吡嗪的定量分析离子对为444.1/319，去簇电压为-113.25v，碰撞能量为-27.12v。
17、本专利技术中所采用的血浆样品的预处理方法简单快速且方便，适用于常规定量分析检测，尤其对于大批量样品的检测，可以减少操作步骤和操作时间，具有重要意义，大大加快大批量样品的处理时间。
18、在本专利技术所采用的色谱条件下，金丝桃苷的保留时间在1.8min左右，紫云英苷的保留时间在2.27min左右，山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷的保留时间在2.4min左右，格列吡嗪的保留时间在4.23min左右，峰形均良好，无杂峰干扰测定，基线平稳。
19、本专利技术的有益效果是：
20、(1)本专利技术提供的是一种定量分析血浆中盐菟丝子中山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、紫云英苷三种指标性成分的血药浓度检测方法，建立了复杂生物基质血浆中微量目标化合物的定量检测方法，能够有效测定盐菟丝子水煎液指标性成分的体内浓度。
21、(2)本专利技术提供的检测方法对生物体血浆样本的取样量少，只需90μl即可完成检测，在6.5min内即可检测到目标成分，为大鼠血浆中金丝桃苷、紫云英苷、山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷的血药浓度及内标测定以及药代动力学研究提供依据。
22、(3)本专利技术提供的检测方法具有较高的特异性，可以准确测定血浆中盐菟丝子的三种指标性成分的浓度，灵敏度高，在1～1000ng/ml浓度范围内呈线性，批内和批间精密度rsd均小于±15％；并且重现性好，准确度高，不受基质的干扰，不同大鼠的血浆对本专利技术的检测方法均无干扰现象。
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1.一种定量分析血浆中盐菟丝子指标性成分的血药浓度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述内标为格列吡嗪。
3.根据权利要求1所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述色谱柱为ACQUITY UPLCBEH C18色谱柱。
4.根据权利要求1或3所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：自动进样器温度为4℃，柱温为30℃，流速为0.3mL/min，进样量为5μL。
5.根据权利要求1所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述洗脱梯度的条件如下：
6.根据权利要求1所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述质谱条件还包括：离子源温度为550℃，监测模式为多重反应监测，气帘气体为35.0psi，碰撞气体为Medium，电喷雾电压为5500.0V，气体1为50.0psi，气体2为50.0psi，扫描时间为200ms。
7.根据权利要求2所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述格列吡嗪的定量分析离子对为444.1/319，去簇电压为-113.25v，碰撞
...【技术特征摘要】
1.一种定量分析血浆中盐菟丝子指标性成分的血药浓度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述内标为格列吡嗪。
3.根据权利要求1所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述色谱柱为acquity uplcbeh c18色谱柱。
4.根据权利要求1或3所述的血药浓度检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：自动进样器温度为4℃，柱温为30℃，流速为0.3ml/min，进样量为5μl。
5.根据权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪小莉，杨之童，刘子路，张雨婷，徐白杨，陈凯文，
申请(专利权)人：安徽中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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