本发明专利技术公开了一种葡萄果实愈伤组织的诱导方法及其培养基。培养基的组成为：基础培养基+TDZ 0.8～1.2mg/L+IBA 0.3～0.5mg/L+糖18～22g/L+琼脂5～7g/L。诱导方法，其特征在于，包括：将葡萄果实消毒后去皮，取果肉块接种于诱导培养基上进行诱导培养直至愈伤形成。本发明专利技术成功建立了‘夏黑’葡萄果实愈伤组织的培养方法，果实愈伤组织诱导率达到100％，为‘夏黑’葡萄的分子生物学以及基因工程研究提供了一条新的途径，为葡萄基因工程研究和基因转化提供一种新的试验材料，同时也为葡萄果实愈伤的培养提供了参考和借鉴。
A method for inducing grape fruit callus and its medium
The invention discloses a method for inducing grape fruit callus and a medium thereof. The components of the medium were: +TDZ 0.8 to 1.2mg/L+IBA 0.3 to 0.5mg/L+ sugar 18 to 22g/L+ agar 5 to 7g/L. The method of induction is characterized in that the grape fruit is disinfected after being disinfected, and the fruit meat is inoculated on the inducible medium for induction and culture until the callus is formed. This invention has successfully established the cultivation method of the fruit callus of 'Xia Hei' grape fruit. The induction rate of the fruit callus is 100%. It provides a new way for the molecular biology and gene engineering research of 'Xia Black' grape. It provides a new test material for the gene engineering research and gene transformation of grape. It provides reference and reference for grape fruit callus culture.
【技术实现步骤摘要】
一种葡萄果实愈伤组织的诱导方法及其培养基
本专利技术涉及植物生物
，特别涉及葡萄果实果肉愈伤组织的培养方法。
技术介绍
目前葡萄基因组的研究是葡萄科学研究中的热点，葡萄基因组研究的方向主要涉及植株抗性、果实品质果实生产特性等几个大的方面，其中葡萄重要经济性状尤其是与果实品质形成相关的分子机理研究也成为是葡萄基因组研究的重点问题之一。分子机理研究最终的落脚点还是在基因功能验证上，但是由于葡萄的转基因技术还不够成熟，基因转化效率极低，而且转基因周期长，耗时耗力。愈伤组织是一种良好的验证基因功能的材料，愈伤组织是指外植体在离体培养条件下，形成的一团无极性、能旺盛分裂的薄壁细胞团，在培养过程中，经过诱导分化可以发育成完整的再生植株。目前对于愈伤组织的研究多集中研究叶片的愈伤组织，而对于葡萄而言，果实品质的研究是葡萄科研工作者的重点研究内容，生产优质高产的葡萄果实也是科研工作者的而终极目标。仅研究葡萄叶片愈伤组织是不能满足科研要求的，尤其是对于葡萄果实而言，必须研究果实本身才能够达到生产优质果实的目的。目前葡萄的研究中，对果实品质形成以及果实成熟发育的分子机理研究是一大热点，因此，培养葡萄果实果肉的愈伤组织是研究葡萄果实品质形成以及果实成熟发育分子机理的一条非常重要的途径。本专利技术提供了一种葡萄果实愈伤组织的培养方法，为今后葡萄的分子生物学以及基因工程研究提供了一条新的途径，同时也为葡萄果实愈伤的培养提供了参考和借鉴。
技术实现思路
专利技术目的：为解决现有技术中的问题，本专利技术提供了一种葡萄果实愈伤组织的诱导方法及其培养基，实现了以葡萄果实作为外植体的组织培养。技术方案：本专利技术所述的葡萄果实愈伤组织的诱导培养基，含有TDZ0.8～1.2mg/L+IBA0.3～0.5mg/L。具体的，所述的葡萄果实愈伤组织的诱导培养基的组成为：基础培养基+TDZ+IBA+糖18～22g/L+琼脂5～7g/L。其中，所述的糖为葡萄糖。所述诱导培养基的ph为5.35～5.45。TDZ的浓度进一步为1.0mg/L，IBA的浓度为0.4mg/L。所述的基础培养基为改良WPM培养基，其组成为：KNO31450～1550mg/L、(NH4)2SO4580～620mg/L、CO(NH2)2140～160mg/L、MgSO4.7H2O380～420mg/L、KH2PO4170～190mg/L、KI1.0～1.2mg/L、MnSO4.4H2O18～22mg/L、ZnSO4.7H2O8～12mg/L、H3BO34～6mg/L、Fe-EDDHA8～12mg/L、Ca(NO3)290～110mg/L、肌醇90～110mg/L、烟酸1.5～2.5mg/L、维生素B10.8～1.2mg/L、维生素B60.8～1.2mg/L、维生素C1.8～2.2mg/L。进一步的，所述改良WPM培养基的组成为：KNO3硝酸钾1500mg/L、(NH4)2SO4硫酸铵600mg/L、CO(NH2)2尿素150mg/L、MgSO4.7H2O七水合硫酸镁400mg/L、KH2PO4磷酸二氢钾180mg/L、KI碘化钾1.1mg/L、MnSO4.4H2O四水合硫酸锰20mg/L、ZnSO4.7H2O七水合硫酸锌10mg/L、H3BO3硼酸5mg/L、Fe-EDDHA乙二胺邻二羟基乙酸铁10mg/L、Ca(NO3)2硝酸钙100mg/L、肌醇100mg/L、烟酸2mg/L、维生素B11mg/L、维生素B61mg/L、维生素C2mg/L。本专利技术还提供了一种葡萄果实愈伤组织的诱导方法，采用所述的诱导培养基诱导愈伤。具体的，所述的葡萄果实愈伤组织的诱导方法，包括：将葡萄果实消毒后去皮，取果肉块接种于诱导培养基上进行诱导培养直至愈伤形成。其中，所述的消毒方法包括：葡萄果实用流水冲洗干净后，无菌条件下，用70～75％的乙醇消毒30～40秒后用无菌去离子水冲洗2～3次，然后用8～10％的次氯酸钠消毒6～8分钟，再用无菌去离子水冲洗4～6次。所述的诱导培养为暗培养。所述诱导培养的温度为24～27℃。所述葡萄果实的生长阶段为花后10～25天，进一步优选为10～18天。所述葡萄的品种为“夏黑”。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：以往的愈伤组织培养通常用叶片来实现，而叶片通常有两个来源，第一个来源是来自于田间植株，而田间植株叶片容易受植株基因型、年龄、生理状态的影响较大，如果取的叶片年龄或者生理状态不一样，形成愈伤组织的能力也不一样，甚至于无法形成愈伤组织，愈伤组织性状上也会有会有差异，因此愈伤组织的表现会不均一，性状表现不一致的愈伤组织会影响后期愈伤组织的增殖效果，进一步会影响使用愈伤组织的其他试验的实验结果，会对试验结果造成很大差异；其次，田间叶片需要进行消毒后培养，消毒剂对叶片的伤害也会造成叶片成活率极大下降，愈伤培养的成功率也会很低；一般田间叶片也上组织培养成功率不到20％。叶片的第二个来源一般来源于组培苗，而葡萄组培苗的培养方法是通过茎段培养的，葡萄的茎段一年只能够培养一次，周期长而且容易携带病毒，而植物病毒通过常规消毒灭菌是不能去除的，其会随着芽的萌发传递到叶片中，使叶片的生理机能受到干扰或破坏，从而导致愈伤组织的活力降低，试验后期愈伤组织的繁殖能力会极大降低，随之会逐渐死亡，不能够保证实验的延续性。本专利技术所用果肉来直接来自果实，而果实取材时只需要根据开花后的天数取，实验材料的年龄和生理状态能够保持高度的一致性。从一个果实上取全部果肉就能够培养出大量的愈伤组织，而来自于同一果实的愈伤组织无论是生理状态还是基因型还是年龄都是完全一致的，无论后期将愈伤组织用于任何试验，都能够保证实验基础高度一致，不会对试验造成误差。这一优点是叶片完全不能够做到的。其次果实果肉本身无菌无病毒，不需要对果肉进行消毒处理，仅仅需要对果皮进行简单的消毒处理，而这个处理不会对果肉造成任何的伤害。果肉培养时不受消毒剂的影响，同时也能够消除病毒病害对愈伤组织的影响。而且相同生理状态的果实培养的果肉愈伤组织性状稳定，增殖能力强，材料能够保持高度的一致性，对于需要使用愈伤组织的试验来说，果肉愈伤组织是最稳定，最一致，增值系数最高的材料。本专利技术成功建立了‘夏黑’葡萄果实愈伤组织的培养方法，果实愈伤组织诱导率达到100％，为‘夏黑’葡萄的分子生物学以及基因工程研究提供了一条新的途径，为葡萄基因工程研究和基因转化提供一种新的试验材料，同时也为葡萄果实愈伤的培养提供了参考和借鉴。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。实施例11、试验材料所用植物材料是‘夏黑’葡萄花后10-18天、20-25天、35-40天的果实。2、试验方法2.1、外植体处理首先果实表面用流水冲洗干净，在无菌条件下，用75％的乙醇消毒30秒后用无菌去离子水冲洗3次，然后用10％(质量分数)的次氯酸钠消毒8分钟，再用无菌去离子水冲洗6次，然后用无菌滤纸吸干果皮表面水分。消毒完成后用无菌的手术刀片小心削去果皮，将种子去掉，果肉切成0.5毫米的薄片后用直径0.5厘米的打孔器将果肉打成圆片后接种于已经本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种葡萄果实愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，含有TDZ 0.8～1.2mg/L+IBA 0.3～0.5mg/L。
【技术特征摘要】
1.一种葡萄果实愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，含有TDZ0.8～1.2mg/L+IBA0.3～0.5mg/L。2.根据权利要求1所述的葡萄果实愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，组成为：基础培养基+TDZ+IBA+糖18～22g/L+琼脂5～7g/L。3.根据权利要求2所述的葡萄果实愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，所述的糖为葡萄糖。4.根据权利要求2所述的葡萄果实愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，ph为5.35～5.45。5.根据权利要求2所述的葡萄果实愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，基础培养基为改良WPM培养基，其组成为：KNO31450～1550mg/L、(NH4)2SO4580～620mg/L、CO(NH2)2140～160mg/L、MgSO4.7H2O380～420mg/L、KH2PO4170～190mg/L、KI1.0～1.2mg/L、MnSO4.4H2O18～22mg/L、ZnSO4.7H2...
【专利技术属性】
技术研发人员：董慧，嵇怡，杨淑莉，孙颖，王凌飞，丁勇民，张嘉芯，唐雨诗，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。