一种台湾榕种子组培快繁方法技术

本发明专利技术提供一种台湾榕种子组培快繁方法，包括如下几个步骤：步骤（1）环境消毒；步骤（2）外植体挑选；步骤（3）外植体消毒；步骤（4）培养基配置；步骤（5）愈伤组织诱导；步骤（6）愈伤组织分化；步骤（7）不定芽增殖；步骤（8）生根培养；步骤（9）培养条件；步骤（10）炼苗移栽。本发明专利技术研究了不同的消毒方式对台湾榕种子灭菌效果和不同生长调节剂配比对台湾榕种子愈伤组织诱导以及不定芽分化、生根的影响，给出了最优的方案，配方简单、效果明显，克服台湾榕扦插繁殖的不足，加快该品种的繁育与推广速度。

A rapid propagation method for seed tissue culture of banyan seed in Taiwan

The invention provides a rapid propagation method of Taiwan banyan seed tissue culture, which includes steps as follows: step (1) environmental disinfection; step (2) explant selection; step (3) explant disinfection; step (4) culture medium configuration; step (5) callus induction; step (6) wound tissue differentiation; step (7) adventitious bud increase (8) rooting culture; steps (9) culture conditions; steps (10) seedling transplanting. The invention has studied the effect of different sterilization methods on the sterilization effect of Taiwan banyan seed and the effect of different growth regulator ratio on callus induction and adventitious bud differentiation and rooting of banyan seeds in Taiwan. The optimum formula is given. The formula is simple and the effect is obvious. The shortage of the Cuttage Propagation in Taiwan banyan is overcome and the breeding of the variety is accelerated. And the speed of promotion.

【技术实现步骤摘要】
一种台湾榕种子组培快繁方法
本专利技术属于农业生物
，尤其涉及一种台湾榕种子组培快繁方法。
技术介绍
台湾榕，别名长叶牛奶树、天星木、水槟榔，是桑科榕属灌木，分布在中国台湾、越南以及中国的贵州、广西、广东等地，常野生于海拔200米至1000米的山坡或溪沟旁阴湿处，成龄株高可达2-3米。台湾榕的根、树皮、叶片和果实是制药的原材料，具有行血活血、舒筋通络、驱风利湿、清热解毒的功效。此外，台湾榕的根系发达，对土壤要求不高，还可发展成为山地防治水土流失的植被树种，因此推广种植台湾榕具有较高的生态和经济价值。台湾榕种子具有深休眠性，繁殖系数低，目前，台湾榕多采用扦插方式进行人工繁殖，因为采穗数量有限和扦插受季节影响，导致育苗数量不能满足大规模种植的需要。
技术实现思路
为了解决以上技术问题，本专利技术提供一种诱导台湾榕种子产生愈伤组织并实现植株再生的组培快繁方法，以克服台湾榕扦插繁殖的不足，充分利用野生资源，加快该品种的繁育与推广速度。一种台湾榕种子组培快繁方法，包括如下几个步骤：步骤(1)环境消毒：采用甲醛和高锰酸钾密闭熏蒸接种室；接种前开紫外灯，照射20-30min，然后用酒精均匀喷洒超净工作台面，并用消毒过的纱布擦拭干净；步骤(2)外植体挑选：挑选野生台湾榕结实饱满的成熟种子；步骤(3)外植体消毒：以野生台湾榕成熟种子为外植体，漂洗后种子放到无菌滤纸上吸干水分待用；步骤(4)培养基配置：以MS为基本培养基，添加蔗糖，用琼脂融化后分装于培养瓶中，调节PH值，灭菌后冷却备用；步骤(5)愈伤组织诱导：将处理好的台湾榕种子接种于外源激素NAA和6-BA诱导培养基上，置于培养室培养；步骤(6)愈伤组织分化：将继代后的愈伤组织进行分化，挑选愈伤组织转移至外源激素NAA和6-BA分化培养基，置于培养室培养；步骤(7)不定芽增殖：当分化成的小苗长到4-6厘米，挑选长势健壮的苗接种到添加不同浓度外源激素NAA和6-BA增殖培养基内，置于培养室培养；步骤(8)生根培养：将分化成小苗接种于添加不同外源激素NAA+IBA+GA3生根培养基内，置于培养室培养；步骤(9)培养条件：培养室采用荧光灯进行光照；步骤(10)炼苗移栽：将已经生根的小苗置于培养室外常温下炼苗，再将小苗从培养瓶中取出，用清水洗净根部的培养基，种植到培养土苗盆里，放入炼苗大棚内培育后将台湾榕苗移植到自然环境下。优选的，所述步骤(1)中，分别按5-8ml/m3、4-5ml/m3的用量称取质量浓度为30％-40％甲醛溶液和高锰酸钾溶液，并依次倒入罐头瓶中，利用产生的烟雾密闭熏蒸接种室3-4d。优选的，所述步骤(3)中，加适量洗衣粉反复漂洗，然后用流动清水冲洗30-40min后置于超净工作台上；用酒精浸泡20-30s，无菌水冲洗3-4次，采用HgCl2浸泡8-10min，用无菌水冲洗5-6次。其中，酒精的体积浓度为75％，HgCl2的质量浓度为0.1％。优选的，所述步骤(4)中，添加蔗糖的质量浓度为2.0-3.0％，琼脂的质量浓度为0.6-0.8％，调节PH值5.8-6.0，灭菌的条件为：121℃灭菌25min。优选的，所述步骤(5)中，采用外源激素NAA0.1-0.3mg/L和6-BA2.0-2.5mg/L诱导培养基上。优选的，所述步骤(6)中，选直径6-8mm的愈伤组织转移至添加外源激素NAA0.1-0.2mg/L和6-BA1.5-2.5mg/L分化培养基。优选的，所述步骤(7)中，增殖培养基内采用外源激素NAA0.1-0.2mg/L和6-BA2.0-3.0mg/L。优选的，所述步骤(8)中，生根培养基内采用外源激素NAA0.1-0.5mg/L+IBA1.0-2.0mg/L+GA30.5-1.0mg/L。优选的，所述步骤(9)中，培养室采用荧光灯进行光照，温度控制在26±2℃，湿度60％以上，光照强度1500-1800Lux，光照时间10-12h/d。本专利技术研究了不同的消毒方式对台湾榕种子灭菌效果和不同生长调节剂配比对台湾榕种子愈伤组织诱导以及不定芽分化、生根的影响，给出了最优的方案，配方简单、效果明显，克服台湾榕扦插繁殖的不足，加快该品种的繁育与推广速度。具体实施方式下面对本专利技术的较优的实施例作进一步的详细说明：一种台湾榕组培快繁方法，包括如下几个步骤：(1)环境消毒：按5-8ml/m3、5ml/m3的用量，称取质量浓度40％甲醛、高锰酸钾并依次倒入罐头瓶中，利用产生的烟雾密闭熏蒸接种室3-4d，然后开房门，放走甲醛气体，为了尽快接种，可以用氨水中和甲醛；接种前开紫外灯，照射20-30min，然后用75％酒精均匀喷洒超净工作台面，并用消毒过的纱布擦拭干净。(2)外植体挑选：挑选野生台湾榕结实饱满的成熟种子(3)外植体消毒：以野生台湾成熟种子为外植体，加适量洗衣粉反复漂洗，然后用流动清水冲洗40min后置于超净工作台上。用体积浓度75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，质量浓度0.1％HgCl2浸泡8min，用无菌水冲洗5-6次，漂洗后种子放到无菌滤纸上吸干水分待用，外植体消毒处理的污染率为26.67％，存活率为53.33％。不同灭菌剂配比对台湾榕种子消毒影响如表1所示。(4)培养条件：以MS为基本培养基，添加3.0％蔗糖，用0.8％琼脂融化后分装于培养瓶中，调节PH值5.8-6.0，121℃灭菌25min，培养室温度26±2℃，光照强度1500Lux，光照时间10h/d。(5)愈伤组织诱导：好器具和双手消毒后，在超净工作台里按照无菌操作的要求打开高温灭菌过的培养基，将处理好的台湾榕种子接种于添加不同浓度外源激素NAA0.1mg/L和6-BA2.5mg/L诱导培养基上，每瓶接种4颗种子，一共接种30瓶，置于培养室培养60d出愈率达51.6％。不同外源激素组合对愈伤组织诱导的影响如表2所示。(6)愈伤组织分化：将继代3次后的愈伤组织进行分化，随机挑选直约8mm的愈伤组织转移至添加不同浓度外源激素NAA0.1mg/L和6-BA1.5mg/L分化培养基，置于培养室培养30d分化率达100％。不同外源激素组合对台湾榕愈伤组织分化影响如表3所示。(7)不定芽增殖：当分化成的小苗长到4-6厘米，挑选长势健壮的苗接种到添加不同浓度外源激素NAA0.1mg/L和6-BA2.0mg/L增殖培养基内，每瓶接4棵小苗，一共接种30瓶，置于培养室培养30d增殖系数达6.06-9.09。不同外源激素组合对台湾榕不定芽增殖影响如表4所示。(8)生根培养：将分化成小苗接种于添加不同外源激素NAA0.5mg/L+IBA2.0mg/L+GA31.0mg/L生根培养基内，每瓶接4棵小苗，一共接30瓶，置于培养室培养30d生根率达86％。(9)培养条件：培养室采用荧光灯进行光照，温度控制在26±2℃，湿度60％以上，光照强度1500Lux，光照时间10h/d。(10)炼苗移栽：将已经生根的小苗置于培养室外常温下炼苗7d，再将小苗从培养瓶中取出，用清水洗净根部的培养基，再将小苗种植到培养土苗盆里，放入炼苗大棚内培育3个月，成苗率达80％，3个月后可将台湾榕苗(带营养土)移植到自然环境下。表1不同灭菌剂配比对台湾榕种子消毒影响表2不同外源激素组合对愈伤组织诱导的影响表3不同外源激素组合对台湾榕愈伤组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种台湾榕种子组培快繁方法，其特征在于，包括如下几个步骤：步骤（1）环境消毒：采用甲醛和高锰酸钾密闭熏蒸接种室；接种前开紫外灯，照射20‑30min，然后用酒精均匀喷洒超净工作台面，并用消毒过的纱布擦拭；步骤（2）外植体挑选：挑选野生台湾榕结实饱满的成熟种子；步骤（3）外植体消毒：以野生台湾榕成熟种子为外植体，漂洗后种子放到无菌滤纸上吸干水分待用；步骤（4）培养基配置：以MS为基本培养基，添加蔗糖，用琼脂融化后分装于培养瓶中，调节PH值，灭菌后冷却备用；步骤（5）愈伤组织诱导：将处理好的台湾榕种子接种于添加外源激素NAA和6‑BA诱导培养基上，置于培养室培养；步骤（6）愈伤组织分化 ：将继代后的愈伤组织进行分化，挑选愈伤组织转移至外源激素NAA和6‑BA分化培养基，置于培养室培养；步骤（7）不定芽增殖：当分化成的小苗长到4‑6厘米，挑选长势健壮的苗接种到添加不同浓度外源激素NAA和6‑BA增殖培养基内，置于培养室培养；步骤（8）生根培养：将分化成小苗接种于外源激素NAA +IBA +GA3生根培养基内，置于培养室培养；步骤（9）培养条件：培养室采用荧光灯进行光照；步骤（10）炼苗移栽：将已经生根的小苗置于培养室外常温下炼苗，再将小苗从培养瓶中取出，用清水洗净根部的培养基，种植到培养土苗盆里，放入炼苗大棚内培育后将台湾榕苗移植到自然环境下。...

【技术特征摘要】
1.一种台湾榕种子组培快繁方法，其特征在于，包括如下几个步骤：步骤（1）环境消毒：采用甲醛和高锰酸钾密闭熏蒸接种室；接种前开紫外灯，照射20-30min，然后用酒精均匀喷洒超净工作台面，并用消毒过的纱布擦拭；步骤（2）外植体挑选：挑选野生台湾榕结实饱满的成熟种子；步骤（3）外植体消毒：以野生台湾榕成熟种子为外植体，漂洗后种子放到无菌滤纸上吸干水分待用；步骤（4）培养基配置：以MS为基本培养基，添加蔗糖，用琼脂融化后分装于培养瓶中，调节PH值，灭菌后冷却备用；步骤（5）愈伤组织诱导：将处理好的台湾榕种子接种于添加外源激素NAA和6-BA诱导培养基上，置于培养室培养；步骤（6）愈伤组织分化：将继代后的愈伤组织进行分化，挑选愈伤组织转移至外源激素NAA和6-BA分化培养基，置于培养室培养；步骤（7）不定芽增殖：当分化成的小苗长到4-6厘米，挑选长势健壮的苗接种到添加不同浓度外源激素NAA和6-BA增殖培养基内，置于培养室培养；步骤（8）生根培养：将分化成小苗接种于外源激素NAA+IBA+GA3生根培养基内，置于培养室培养；步骤（9）培养条件：培养室采用荧光灯进行光照；步骤（10）炼苗移栽：将已经生根的小苗置于培养室外常温下炼苗，再将小苗从培养瓶中取出，用清水洗净根部的培养基，种植到培养土苗盆里，放入炼苗大棚内培育后将台湾榕苗移植到自然环境下。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，分别按5-8ml/m3、4-5ml/m3的用量称取质量浓度为30%-40%甲醛溶液和高锰酸钾溶液，并依...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨鑫，谭冠宁，李丽淑，何虎翼，唐洲萍，樊吴静，何新民，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45