澳洲坚果组培扩繁方法技术

本发明专利技术涉及植物组培技术，具体为一种澳洲坚果组培扩繁方法，通过对澳洲坚果当年生嫩茎处理、消毒，分别置于启动培养基、增殖培养基以及生根培养基中进行组培，以达到快速扩繁的目的。该方法通过生物技术对澳洲坚果进行组织培养研究，建立一套完整的澳洲坚果组织培养体系，大量提供无菌种苗，同时提高澳洲坚果种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要，解决了澳洲坚果生根困难的问题。

Macadamia tissue culture method

The invention relates to a plant tissue culture technology, in particular to a Macadamia tissue culture method, the Macadamia had tender stem treatment, disinfection, were placed in the initial medium, proliferation medium and rooting of tissue culture medium, in order to achieve the purpose of rapid propagation. The method of culture research by biological technology to organize the macadamia nuts, Macadamia cultivation system to establish a complete organization, provide a large number of aseptic seedlings, while improving Macadamia seedling quality, realize large-scale production, to meet the needs of production, solve the difficult problem of rooting of macadamia.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组培
，具体为一种澳洲坚果组培扩繁方法。
技术介绍
澳洲坚果（Macadamiaintegrifolia&MacadamiaTetraphylla）是山龙眼科（Proteaceae）常绿乔木，起源于澳大利亚东部的热带雨林中，目前的栽培品种主要是澳洲坚果属（MacadamiaF.Muell）的光壳种（M.integrifolia）和粗壳种（M.tetraphylla）及二者的杂交种。澳洲坚果果仁脂肪含量超过70％，单不饱和脂肪酸含量极高，棕榈油酸的含量也异常丰富，且几乎不含胆固醇。澳洲坚果引入中国栽培仅有30多年，是一种新兴果树。目前在云南、广东、广西、贵州等热区省均有种植，但云南是中国澳洲坚果的主产区，其种植面积及产量均占全国90％以上。澳洲坚果一般采用实生繁殖，但实生树可能要8~12年才能有收获。此外，由于澳洲坚果多采用开放式授粉，因此也造成异花授粉得到的果实的品质难以预测。而在苗圃、果园生产上通常采用嫁接，偶见扦插。但在扦插繁殖中，根系系统需要较长的时间才可形成，同时扦插繁殖的树种需要进行辅助管理，如修剪、整形等。因此制约了澳洲坚果的大面积推广。组织培养繁殖已应用于许多林木、木本果树和观赏性作物的快速繁殖。同时，由于采用组织培养进行繁殖可产生无污染的植物，可有效降低植物疫病传播风险，因此，组织培养也提高了种质交换的安全性。因此，开展澳洲坚果组织培养技术的研究，建立一套适合于澳洲坚果的组织培养体系，对加快澳洲坚果的良种繁育进程具有重要意义。目前对澳洲坚果快速繁育的研究，多数基于砧木的嫁接技术，例如专利申请号为201510322271.3，名称为澳洲坚果高效繁育方法的专利，公开了一种基于嫁接的快速繁育方法，采用生长激素为“每10克赤霉素920和吲哚乙酸的混合物兑5千克水溶解后，加入10毫升甲基托布津制成药水”对接穗进行浸泡。专利申请号为201510868889.X，名称为澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法的专利，公开了一种澳洲坚果的组培方法，虽公开了一种澳洲坚果的组培方法，但其实施步骤B培养时间20-24天，步骤C分步骤培养20-24天后，每天光照18h培养直至生根，其公开的效果生长周期长，且生根率仅达到85.9%，增殖系数也不甚理想，不能满足工业化生产的需求；其次，权利要求1中所述的粪肥提取液成分复杂，有些成分难以获得，难以应用推广；另外，该专利中构建的特定培养床，实施时都会增加工业化生产时的成本投入。
技术实现思路
针对现有的澳洲坚果组培方法效果不佳的问题，本专利技术提出一种澳洲坚果组培扩繁方法。本专利技术的澳洲坚果组培扩繁方法，其特征在于通过以下步骤实施：（1）外植体的选择与消毒：选取澳洲坚果的当年生嫩茎，去除叶柄和叶片，洗净后用1%的洁尔灭消毒液浸泡5-10分钟，冲洗1-2小时，剪成1-2cm长含1-2个叶腋的茎段，用75%乙醇润后消毒，用0.1%升汞浸泡5-8分钟，无菌蒸馏水冲洗5-8次，吸干外植体表面的残留水分；（2）启动培养：将茎段两端分别切去2-4mm，叶腋朝上置于启动培养基上；所述的启动培养基的配方为：1/2MS+6-BA0.5-2mg/L+IBA0.5-1mg/L，30g/L蔗糖，4.6g/L琼脂，pH为5.7-6.0；启动培养昼温(25±3)℃、光照8-10h/天、光照度为2000Lux，培养时间为4周；（3）增殖培养：将茎段置于增殖培养基中培养；所述的增殖培养基的配方为：1/2MS+GA0.5-1.0mg/L，30g/L蔗糖，4.6g/L琼脂，pH为5.7-6.0，增殖培养昼温25±3℃、光照8-10h/天、光照度为2000Lux，培养时间为3周；（4）生根培养：将茎段置于生根培养基中培养；所述生根培养基以1/4MS为基本培养基，添加1-5mg/LIBA，5-10g/L蔗糖，2g/L琼脂，0.5%PEG,pH为5.7-6.0；生根培养昼温(25±3)℃、光照8-10h/天、光照度为2000Lux，培养时间为培养3周。采用本专利技术的扩繁方法，启动培养阶段腋芽生长快，增殖培养阶段增殖系数高达6.7，生根培养阶段生根率高达99%，明显优于现有技术。本专利技术的澳洲坚果组培扩繁方法，通过生物技术对澳洲坚果进行组织培养研究，建立一套完整的澳洲坚果组织培养体系，大量提供无菌种苗，同时提高澳洲坚果种苗质量，实现规模化生产，满足了生产上的需要；本专利技术选用了1/4MS培养基为基本培养基，同时添加IBA和PEG，只需3周时间即可获得生根苗，且生根率可达99%。具体实施方式实施例1：实施时间为2016年，澳洲坚果的组培扩繁在西南林业大学林学院实验室和格林温室进行。该方法通过以下步骤实施：（1）外植体的选择与消毒：于2016年5月选取优良澳洲坚果单株，选取澳洲坚果的当年生嫩茎，去除叶柄和叶片，用肥皂水洗净，再用1%的洁尔灭消毒液浸泡5分钟，在线状自来水下冲洗2小时，剪成2cm长含1-2个叶腋的茎段，放于灭过菌的外植体缸内，移至超净工作台内进行消毒之前用75%乙醇润洗一次，用0.1%升汞浸泡5分钟，无菌蒸馏水冲洗5-8次，放于灭过菌的垫有滤纸的接种盘内，使滤纸能够吸干外植体表面的残留水分。（2）启动培养：将茎段两端分别切去2-4mm，平放在启动培养基上，叶腋朝上，启动培养基的配方为：1/2MS+6-BA2mg/L+IBA1mg/L，30g/L蔗糖，4.6g/L琼脂，pH为5.7。置于昼培养环境为：培养温度(25±3)℃、光照8~10h/天、光照度为2000Lux培养4周后，叶腋处长出腋芽。（3）增殖培养：待腋芽发出时，将外植体转到增殖培养基上，增殖培养基的配方为：1/2MS+GA0.5mg/L，30g/L蔗糖，4.6g/L琼脂，pH为5.7。置于昼温25±3℃、光照8-10h/天、光照度为2000Lux培养的条件下培养3周后，腋芽长出1-2cm高腋芽，增殖系数6.7。（4）生根培养：以1/4MS为基本培养基，添加5mg/LIBA，5g/L蔗糖，2g/L琼脂，0.5%PEG,pH为5.7。置于昼培养环境为：培养温度(25±3)℃、光照8-10h/天、光照度为2000Lux培养3周后，可见生根，生根率为99%。为体现本方法的组培效果，对照实验引入不同生根培养阶段的培养基配方，对照组1未添加5mg/LIBA，对照组2未添加0.5%PEG，其实验结果如下：本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种澳洲坚果组培扩繁方法，其特征在于通过以下步骤实施：（1）外植体的选择与消毒：选取澳洲坚果的当年生嫩茎，去除叶柄和叶片，洗净后用1%的洁尔灭消毒液浸泡5‑10分钟，冲洗1‑2小时，剪成1‑2cm长含1‑2个叶腋的茎段，用75%乙醇润后消毒，用0.1%升汞浸泡5‑8分钟，无菌蒸馏水冲洗5‑8次，吸干外植体表面的残留水分；（2）启动培养：将茎段两端分别切去2‑4mm，叶腋朝上置于启动培养基上；所述的启动培养基的配方为：1/2MS + 6‑BA 0.5‑2mg/L + IBA 0.5‑1mg/L，30g/L蔗糖，4.6g/L琼脂，pH为5.7‑6.0；启动培养昼温(25±3)℃、光照8‑10h/天、光照度为2000Lux，培养时间为4周；（3）增殖培养：将茎段置于增殖培养基中培养；所述的增殖培养基的配方为：1/2MS + GA 0.5‑1.0mg/L，30g/L蔗糖，4.6g/L琼脂，pH为5.7‑6.0，增殖培养昼温25±3℃、光照8‑10h/天、光照度为2000Lux，培养时间为3周；（4）生根培养：将茎段置于生根培养基中培养；所述生根培养基以1/4MS为基本培养基，添加1‑5mg/L IBA，5‑10g/L蔗糖，2g/L琼脂，0.5% PEG, pH为5.7‑6.0；生根培养昼温(25±3)℃、光照8‑10h/天、光照度为2000Lux，培养时间为培养3周。...

【技术特征摘要】
1.一种澳洲坚果组培扩繁方法，其特征在于通过以下步骤实施：（1）外植体的选择与消毒：选取澳洲坚果的当年生嫩茎，去除叶柄和叶片，洗净后用1%的洁尔灭消毒液浸泡5-10分钟，冲洗1-2小时，剪成1-2cm长含1-2个叶腋的茎段，用75%乙醇润后消毒，用0.1%升汞浸泡5-8分钟，无菌蒸馏水冲洗5-8次，吸干外植体表面的残留水分；（2）启动培养：将茎段两端分别切去2-4mm，叶腋朝上置于启动培养基上；所述的启动培养基的配方为：1/2MS+6-BA0.5-2mg/L+IBA0.5-1mg/L，30g/L蔗糖，4.6g/L琼脂，pH为5.7-6.0；启动培养昼温(25±3)℃、光照8-1...

【专利技术属性】
技术研发人员：何承忠，李旦，罗一然，周安佩，韩国伟，唐军荣，和润喜，
申请(专利权)人：西南林业大学，
类型：发明
国别省市：云南;53