一种辣椒的组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种辣椒的组织培养方法。本发明专利技术保护一种辣椒的组织培养方法，包括如下步骤：(1)采用辣椒子叶切块作为外植体，进行不定芽诱导培养，得到不定芽；(2)完成步骤(1)后，选取长度大于2cm的不定芽，进行生根培养，得到再生植株。本发明专利技术的发明专利技术人通过对辣椒子叶、下胚轴、带病子叶、真叶等不同的组织进行重复的诱导再生试验，最终筛选出了一种以辣椒子叶为外植体、能让辣椒不定芽高效伸长的组织培养方法，成功建立了辣椒高效再生体系。该组织培养方法对辣椒的遗传转化和品种改良具有重要的意义，应用前景广阔。

A method of tissue culture of a kind of pepper

The invention discloses a method for tissue culture of Capsicum annuum. The invention protects a tissue culture method of chili, including the following steps: (1) using chilli cotyledons as explants, adventitious buds induced by adventitious buds, and adventitious buds; (2) after the completion step (1), the adventitious buds with length greater than 2cm are selected for rooting and regenerating plants. The inventor of the invention repeated the induction and regeneration test of different tissues such as cotyledons, hypocotyls, cotyledon and true leaves of capsicum, and finally screened out a kind of tissue culture method with the Cayenne cotyledons as explants and able to elongate the adventitious buds of capsicum, and successfully established the high efficiency regeneration system of chili pepper. The tissue culture method is of great significance for the genetic transformation and variety improvement of capsicum, and has wide application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种辣椒的组织培养方法
本专利技术涉及一种辣椒的组织培养方法。
技术介绍
组织培养和DNA重组技术作为关键的植物生物技术，是弥补作物常规育种不足和促进作物育种进程的强有力工具。然而，辣椒是一种非常顽拗的茄科作物，其“顽拗”体现在细胞培养、组织培养、器官分化、植株再生和遗传转化等多个方面，使得可对辣椒进行有效遗传改良的DNA重组技术进展非常困难(缓慢)。植物组培再生体系的构建是进行基因转化的前提。尽管有关于摸索研究辣椒再生体系构建的系列文献发表，而实际上辣椒作物一直没有构建起成熟、稳定的再生体系，这成为阻碍辣椒基因转化的一大阻碍。其中辣椒不定芽伸长异常困难成为辣椒遗传转化最大的限制因素。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辣椒的组织培养方法。本专利技术提供了一种辣椒的组织培养方法，包括如下步骤：(1)采用辣椒子叶切块作为外植体，进行不定芽诱导培养，得到不定芽；(2)完成步骤(1)后，选取长度大于2cm的不定芽，进行生根培养，得到再生植株。所述步骤(1)包括如下步骤(a)和步骤(b)：(a)将辣椒子叶切块接种于诱导培养基A中进行诱导培养；(b)完成步骤(a)后，将子叶切块接种于不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，得到不定芽；所述诱导培养基A为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：(a1)含有1.0-3.0mg/LTDZ、0.1-0.3mg/LNAA和1.0-3.0mg/LAgNo3的培养基；(a2)含有1.8mg/LTDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/LAgNo3的培养基；(a3)含有1.0-3.0mg/LTDZ、0.1-0.3mg/LNAA和1.0-3.0mg/LAgNo3的MS培养基；(a4)含有1.8mg/LTDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/LAgNo3的MS培养基。所述诱导培养基A为含有TDZ、NAA和AgNo3的MS固体培养基。所述不定芽诱导培养基为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：(b1)含有0.1-0.3mg/LIAA、1.0-3.0mg/LGA3和1.0-2.0mg/LAgNo3的培养基；(b2)含有0.2mg/LIAA、1.0mg/LGA3和2.0mg/LAgNo3的培养基；(b3)含有0.1-0.3mg/LIAA、1.0-3.0mg/LGA3和1.0-2.0mg/LARNo3的MS培养基；(b4)含有0.2mg/LIAA、1.0mg/LGA3和2.0mg/LAgNo3的MS培养基。所述不定芽诱导培养基为含有IAA、GA3和AgNo3的MS固体培养基。所述步骤(b)中，所述不定芽诱导培养的培养条件为25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗。所述步骤(a)中，所述诱导培养的培养条件为25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗培养。所述步骤(a)中，所述诱导培养的周期为1个月。所述步骤(2)中，将长度大于2cm的不定芽接种于MS固体培养基中进行生根培养。所述步骤(2)中，所述生根培养的培养条件为25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗培养。所述辣椒子叶切块的制备方法如下：将辣椒的种子接种后培养得到无菌苗，取无菌苗的子叶，制备子叶切块。所述辣椒子叶切块的制备方法中，将辣椒的种子接种于1/2MS固体培养基进行培养得到无菌苗。选取苗龄8-10天的无菌苗的子叶制备子叶切块。所述子叶切块的边长为0.5-0.7cm。所述辣椒子叶切块的制备方法中，所述培养的培养条件为25-28℃、黑暗培养至种子发芽，发芽后将光照条件调整为16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗继续培养。本专利技术还保护一种用于辣椒组织培养的试剂盒，为包括如下(c1)或(c2)或(c3)或(c4)的试剂盒：(c1)所述不定芽诱导培养基和MS固体培养基；(c2)所述不定芽诱导培养基和所述诱导培养基A；(c3)所述不定芽诱导培养基、MS固体培养基和诱导培养基A；(c4)所述不定芽诱导培养基、MS固体培养基、所述诱导培养基A和1/2MS固体培养基。本专利技术的专利技术人通过对辣椒子叶、下胚轴、带病子叶、真叶等不同的组织进行重复的诱导再生试验，最终筛选出了一种以辣椒子叶为外植体、能让辣椒不定芽高效伸长的组织培养方法，成功建立了辣椒高效再生体系。该组织培养方法对辣椒的遗传转化和品种改良具有重要的意义，应用前景广阔。附图说明图1为不定芽诱导培养基I诱导的辣椒不定芽分化与伸长效果。图2为不定芽诱导培养基II诱导的辣椒不定芽分化与伸长效果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。辣椒品种“国福208”：北京市农林科学院蔬菜研究中心选育，审定编号：京品鉴椒2011015，京研益农(北京)种业科技有限公司销售；辣椒品种“国福208”在实施例中简称为Q7。辣椒品种“国禧121”：北京市农林科学院蔬菜研究中心选育，已经获得植物新品种权，授权号：CNA20100909.6；辣椒品种“国禧121”在实施例中简称为Q8。分化率＝分化出不定芽的外植体数/起始外植体数×100％；伸长率＝分化出伸长芽的外植体数/起始外植体数×100％；平均伸长芽数＝伸长的芽数/具有伸长芽的外植体数×100％；不定芽伸长力＝平均伸长芽数×伸长率×100％；生根率＝生根芽数/接种伸长芽数×100％。伸长芽为长度＞2cm的不定芽。实施例1、辣椒的组织培养方法建立实验材料：Q7和Q8。1、将实验材料的种子静置于含有1g/L百菌清的水溶液中浸泡5min，然后静置于75％(体积百分含量)的乙醇水溶液中浸泡30s，然后转移至8-10％的次氯酸钠溶液中振荡消毒10-20min，最后用无菌水清洗4次，每次3-5min。2、完成步骤1后，将种子接种于于1/2MS固体培养基中，25-28℃、黑暗培养至种子发芽，发芽后将光照条件调整为16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗，继续培养至苗龄8-10天。3、完成步骤2后，切取边长为0.5-0.7cm的子叶切块，接种于诱导培养基I(含有1.8mg/LTDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/LAgNo3的MS固体培养基)或诱导培养基II(含有1.0mg/LTDZ、0.1mg/LNAA和3.0mg/LAgNo3的MS固体培养基)或诱导培养基III(含有3.0mg/LTDZ、0.3mg/LNAA和1.0mg/LAgNo3的MS固体培养基)中，25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗培养一个月。经过观察统计，接种于诱导培养基I时，子叶切块生长情况最优，接种于诱导培养基II和诱导培养基III时，子叶切块生长情况次之。4、将步骤3接种于培养基I培养一个月得到的子叶切块接种至不定芽诱导培养基I(含有0.2mg/LIAA、1.0mg/LGA3和2.0mg/LAgNo3的MS固体培养基)或不定芽诱导培养基II(含有0.1mg/LIAA、1.0mg/LGA3和3.0mg/LAgNo3的MS固体培养基)或不定芽诱导培养基III(含有0.3mg/LIAA、3.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种辣椒的组织培养方法，包括如下步骤：(1)采用辣椒子叶切块作为外植体，进行不定芽诱导培养，得到不定芽；(2)完成步骤(1)后，选取长度大于2cm的不定芽，进行生根培养，得到再生植株。

【技术特征摘要】
1.一种辣椒的组织培养方法，包括如下步骤：(1)采用辣椒子叶切块作为外植体，进行不定芽诱导培养，得到不定芽；(2)完成步骤(1)后，选取长度大于2cm的不定芽，进行生根培养，得到再生植株。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)包括如下步骤(a)和步骤(b)：(a)将辣椒子叶切块接种于诱导培养基A中进行诱导培养；(b)完成步骤(a)后，将子叶切块接种于不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，得到不定芽；所述诱导培养基A为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：(a1)含有1.0-3.0mg/LTDZ、0.1-0.3mg/LNAA和1.0-3.0mg/LAgNo3的培养基；(a2)含有1.8mg/LTDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/LAgNo3的培养基；(a3)含有1.0-3.0mg/LTDZ、0.1-0.3mg/LNAA和1.0-3.0mg/LAgNo3的MS培养基；(a4)含有1.8mg/LTDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/LAgNo3的MS培养基。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述不定芽诱导培养基为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：(b1)含有0.1-0.3mg/LIAA、1.0-3.0mg/LGA3和1.0-2.0mg/LAgNo3的培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓芬，耿三省，陈斌，杜和山，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京,11