【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及牛早幼粒细胞白血病蛋白及牛早幼粒细胞白血病蛋白核体的检测，具体涉及一种牛早幼粒细胞白血病蛋白单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、早幼粒细胞白血病蛋白核体（promyelocytic leukemia protein nuclearbodies, pml nbs），又称为pml nd10（nucleardomin 10, nd10），是普遍存在于哺乳动物细胞核内的一种亚细胞核结构，大约为直径0.1-1.0 μm的球体，其在生理和非生理状态下的表达量、形状、分布呈现动态变化。大量研究证明pml nbs广泛参与机体多种生物学功能，如细胞周期、细胞凋亡、衰老、应激、dna损伤反应和抗病毒及肿瘤抑制等。早幼粒细胞白血病蛋白（promyelocytic leukemia protein, pml）是构成pml nbs的关键组分，最初发现于具有染色体易位的急性早幼粒细胞白血病患者中。根据c端的不同，pml至少分为7种亚型（i-vii型），其中i-vi型定位于细胞核中，而vii型则位于细胞质中。pml是三基序（tripartitemotif, trim）蛋白家族的一员。trim蛋白家族具有三个连续的保守rbcc结构域特征，包括ring结构域（r）、一个或两个串联的b-box结构域（b）和coiled coil结构域（cc）。pml蛋白与其他伙伴蛋白相互作用参与了多种细胞生物学的调控过程，同时它又构成了pml nbs的骨架，所以pml nbs的大部分功能与pml的功能相重合。
2、近年来，随着细胞内源性免疫概念的提出，作
3、人的pml-i，ii，iv被证实具有抗病毒感染的功能，但猪pml亚型只有ii/iia能够发挥抗猪伪狂犬病毒活性，说明pml的功能具有种属特异性。然而，牛源的pml（bovine pml,bpml）及pml nbs的功能尚未有报道。本实验室的前期研究表明，牛pml nbs具有抑制牛疱疹病毒i型的活性，因此可以作为一个宿主内源性抵御病毒因子进行新型抗病毒或免疫调节的产品的研发。特异性抗体是研究蛋白质功能的重要工具之一，而目前市售的pml抗体均是针对人、小鼠和兔的特异性抗体，由于缺乏检测牛pml的试剂和方法，导致针对牛pml的生物学功能研究无法开展。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是准确检测细胞内的牛pml或牛pml nbs。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供一种抗牛pml单克隆抗体，其由保藏编号为cgmcc no. 45711的杂交瘤细胞所分泌。
3、还提供分泌抗牛pml单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为cgmcc no. 45711。
4、还提供用于检测牛pml或牛pml nbs的试剂盒，其包含所述的抗牛pml单克隆抗体。
5、优选地，所述试剂盒还包含用作二抗的抗小鼠igg抗体。
6、优选地，所述抗小鼠igg抗体由荧光基团标记。
7、优选地，所述试剂盒还包含免疫荧光法检测通用试剂。
8、所述的抗牛pml单克隆抗体在制备用于检测牛pml或牛pml nbs的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。
9、所述的分泌抗牛pml单克隆抗体的杂交瘤细胞在制备用于检测牛pml或牛pml nbs的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。
10、优选地，所述检测为免疫荧光法检测。
11、所述的抗牛pml单克隆抗体在牛pml或牛pml nbs检测中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述的牛pml或牛pml nbs检测可用于非诊断目的。
12、还提供一种检测细胞内牛pml或牛pml nbs的方法，其包括如下步骤：
13、（1）取待测细胞，用多聚甲醛固定；
14、（2）去除多聚甲醛，用pbs洗涤细胞后加入表面活性剂进行处理；
15、（3）去除表面活性剂，用pbs洗涤细胞后加入bsa封闭液进行封闭；
16、（4）去除bsa封闭液，加入所述的抗牛pml单克隆抗体进行孵育；
17、（5）去除抗牛pml单克隆抗体，用pbs洗涤细胞后加入荧光基团标记的抗小鼠igg抗体进行孵育；
18、（6）去除抗小鼠igg抗体，用pbs洗涤细胞后加入dapi染色液进行孵育；
19、（7）去除dapi染色液，用pbs和去离子水依次洗涤细胞，封片后置于激光共聚焦显微镜下观察细胞中荧光的有无、数量和亚细胞定位。
20、本专利技术中，牛pml或牛pml nbs的检测可以用于任何目的，包括基础研究。
21、本专利技术首次克隆了牛pml基因，截短表达后制备了高纯度重组牛pml蛋白，并利用细胞融合技术制备了鼠抗牛pml单克隆抗体bpml-2g5。经实验证明，该单克隆抗体对牛pml蛋白的亲和力较高且特异性强。基于该单克隆抗体，本专利技术建立了对牛源细胞中内源性表达或其他种属细胞中外源性表达的牛pml进行免疫印迹检测和免疫荧光检测的方法。经实验证明，建立的免疫荧光检测方法能够直观检测牛源细胞中pml nbs的数量和亚细胞定位。
22、本专利技术为揭示牛pml及pml nbs的生物学功能，及相关理化因素对pml的影响，尤其是病毒感染和干扰素对pml的影响，提供了技术支持，也为研究牛细胞内源pml相关功能奠定了基础。
23、本专利技术提供的分泌抗牛pml单克隆抗体的杂交瘤细胞已进行专利保藏，保藏信息如下：
24、生物材料：bpml-2g5
25、分类命名：杂交瘤细胞株
26、保藏日期：2023年09月04日
27、保藏编号：cgmcc no. 45711
28、保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc）
29、地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
30、序列说明
31、seq id no: 1为野生型牛pml（bpml）全长基因的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗牛PML单克隆抗体，其由保藏编号为CGMCC No. 45711的杂交瘤细胞所分泌。
2.分泌抗牛PML单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为CGMCC No. 45711。
3.用于检测牛PML或牛PML NBS的试剂盒，其包含权利要求1所述的抗牛PML单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含用作二抗的抗小鼠IgG抗体。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述抗小鼠IgG抗体由荧光基团标记。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含免疫荧光法检测通用试剂。
7.权利要求1所述的抗牛PML单克隆抗体在制备用于检测牛PML或牛PML NBS的产品中的应用。
8.权利要求2所述的分泌抗牛PML单克隆抗体的杂交瘤细胞在制备用于检测牛PML或牛PML NBS的产品中的应用。
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述检测为免疫荧光法检测。
10.权利要求1所述的抗牛PML单克隆抗体在用于非诊断目的的牛PML
...【技术特征摘要】
1.抗牛pml单克隆抗体，其由保藏编号为cgmcc no. 45711的杂交瘤细胞所分泌。
2.分泌抗牛pml单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为cgmcc no. 45711。
3.用于检测牛pml或牛pml nbs的试剂盒，其包含权利要求1所述的抗牛pml单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含用作二抗的抗小鼠igg抗体。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述抗小鼠igg抗体由荧光基团标记。
6.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：程晶，李永清，陈沛霖，刘文晓，江波，周林宜，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：
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