一种红锥嫩枝组培繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种红锥嫩枝组培繁殖方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生红锥嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3‑4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根。本发明专利技术缩短了红锥的育苗周期，节省育苗材料，克服了传统育苗方法中存在的育苗所需材料多、周期长等问题，大大降低了生产成本，提高了生产效率，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

Red cone twig tissue culture propagation method

The invention discloses a red cone shoot tissue culture propagation method, including explant selection, explant, bud induction culture, proliferation culture, strong bud culture and rooting culture acquisition process, semi lignified and robust growth in C. hystrix shoots as explants. The explants were cut, sterilization and disinfection treatment after the initial inoculation to obtain the initial bud bud inducing culture medium, then inoculated on bud proliferation medium after 3 4 cycles of proliferation, formation of buds, the clusters of medium access bud strong buds, the single bud is more than or equal to 2cm into the culture medium for rooting and rooting. The invention shortens the breeding cycle of red cone, saving seedling material, overcomes the problem of materials needed, long cycle of the traditional breeding methods in the nursery there, greatly reduce the production cost, improve production efficiency, and has good economic benefits, social benefits and ecological benefits.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物繁殖
，涉及一种红锥嫩枝组培繁殖方法。
技术介绍
红锥(CastanopsishystrixA.DC)隶属壳斗科(Fagaceae)栲属(Castanopsis)，成年树高可达30m，胸径1m以上，是我国南亚热带和亚热带植被常绿阔叶林的优势组成树种，属华南地区重要的乡土阔叶珍贵用材和高效多用途生态公益林树种。红锥天然分布于东经95°20′～118°00′，北纬18°30′～25°00′，主产地集中于广东、广西、福建南部，其周边分布在海南、云南南部、贵州东南部以及湖南、江西等省南部。红锥具有生长快、材质优、适应广、效益高等优良特性。其主干通直，材质坚硬，呈红色，色泽和纹理美观，耐腐蚀性强，不开裂、不变形、易加工，是优质珍贵用材，可供建筑、造船、高档家具、木制地板、军工用品、体育器材等用。种子富含淀粉，可用于炒食、饲料和酿酒，种实、壳斗均富含单宁，可提制栲胶。红锥林萌芽力强，萌条生长迅速，一次造林可采伐10次以上，合理经营可获利上百年。红锥枝叶浓密，较耐荫蔽，混生性能好，可作为用材和水源涵养林进行纯林种植，亦可为残次林改造，生态公益林改造的混交造林。目前我国多个省如广东、广西、福建等将红锥推选为当地区经济价值高、发展前途大的优良树种进行推广，造林面积大，推广应用前景广。目前红锥人工林栽培所用苗木多采用混采种子育苗，导致苗木及其造林后的林分个体分化大，参差不齐，进而影响到人工林的造林质量、产量及经济效益。通过科技工作者近十几年的研究，已选育出一批红锥优良单株，但由于所选优株数量有限，加之树龄年轻，结实率低，所收获种子远不能满足造林需求。前期研究表明，红锥优树无论采用嫁接还是扦插进行繁殖，繁殖率低，同时存在程度不同的偏冠现象，所繁育苗木难以用于生产。以红锥优树萌枝进行组培研究虽有报道，但仍存在出芽慢，无菌系建立困难等问题，难以用于生产。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对红锥组织培养过程中芽增殖系数低，生长缓慢等问题,提供一种生长效果好、扩繁快的红锥嫩枝组培繁殖方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一种红锥嫩枝组培繁殖方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生红锥嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生红锥嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10-15min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.1%的升汞溶液中，控制浸泡时间15-20min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35d，初始芽萌发、生长；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-40d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35-40d，形成壮芽；（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。以上所述的初始芽诱导培养基的配方为：1/2改良WPM培养基+6-BA4.0-6.0mg/L+NAA2.0-3.0mg/L+KT1.0-2.0mg/L+ZT1.5-2.0mg/L+VC15mg/L+叶酸10mg/L+VB215mg/+琼脂3.0g/L+蔗糖25g/L。以上所述的增殖培养基的配方为：改良WPM培养基+6-BA6.0-8.0mg/L+NAA2.0-3.0mg/L+ZT0.5-1.0mg/L+VC15mg/L+VB215mg+天冬氨酸20mg/L+琼脂3.6g/L+蔗糖30g/L。以上所述的壮芽培养基的配方为：改良WPM培养基+6-BA3.0-4.0mg/L+NAA1.0-1.5mg/L+VC15mg/L+VB215mg+天冬氨酸20mg/L+琼脂3.5g/L+蔗糖25g/L。以上所述的生根培养基的配方为：1/2改良WPM培养基+6-BA1.5-2.5mg/L+NAA1.0-1.5mg/L+琼脂3.5g/L+蔗糖30g/L。以上所述的改良WPM培养基的配方为：以上所述改良WPM培养基的组分和体积重量比为：NH4NO3390mg/L，CaCl2·2H2O82mg/L，MgSO4·7H20265mg/L，KH2PO4170mg/L，Ca(NO3)2·4H2O165mg/L，KI0.83mg/L，MnSO4·H2O22.4mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，CuSO4·5H2O0.025mg/L，Na2·EDTA33.4mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，肌醇200mg/L，烟酸0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，盐酸硫胺素1.0mg/L，甘氨酸2.0mg/L。以上步骤（3）所述的初始芽诱导培养的培育控制条件为：光培养、光照500-1000lx，培养温度20±1℃；步骤（4）所述的增殖培养、步骤（5）所述的壮芽培养、步骤（6）所述的生根培养的培育控制条件均为：光培养，光照2500-4000lx，每日光照16h，培养温度25-28℃。相对于现有技术，本专利技术具有的优点和有益效果如下：1、本专利技术以红锥当年生嫩枝作为外植体，经过初始芽培养基培养，初始芽萌动率90%以上；经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，芽增殖系数5/30d-7/30d，再将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，从而缩短了红锥的育苗周期，节省育苗材料，克服了传统育苗方法中存在的育苗所需材料多、周期长等问题，大大降低了生产成本，提高了生产效率。2、本专利技术将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，余下小芽丛继续增殖培养，使得材料能够多次继代，实现大量增殖，规模化生产壮芽，实现黄樟油素型樟树的扩繁。3、本专利技术对WPM基本培养基进行了改良，同时重点调整了与红锥出芽壮芽相关元素，使得培养基更科学，更有针对性，更易促使红锥芽诱导的发生、增殖和壮芽，效果显著。4、本专利技术操作过程简便，培养周期短，继代芽产量大,并且质量优，增殖系数达到5以上的组培苗产业化技术要求，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生红锥嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.1%的升汞溶液中，控制浸泡时间15min，最后用纯净水洗净药物，将外本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红锥嫩枝组培繁殖方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生红锥嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3‑4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生红锥嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10‑15 min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度 0.1%的升汞溶液中，控制浸泡时间15‑20 min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5‑3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30‑35 d，初始芽萌发、生长；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35‑40 d转接一次，循环往复，经3‑4个周期的培养，形成丛生芽；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4‑5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35‑40 d，形成壮芽；（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。...

【技术特征摘要】
1.一种红锥嫩枝组培繁殖方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生红锥嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生红锥嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10-15min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.1%的升汞溶液中，控制浸泡时间15-20min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35d，初始芽萌发、生长；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-40d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，培养35-40d，形成壮芽；（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。2.根据权利要求1所述的一种红锥嫩枝组培繁殖方法，其特征在于：所述的初始芽诱导培养基的配方为：1/2改良WPM培养基+6-BA4.0-6.0mg/L+NAA2.0-3.0mg/L+KT1.0-2.0mg/L+ZT1.5-2.0mg/L+VC15mg/L+叶酸10mg/L+VB215mg/+琼脂3.0g/L+蔗糖25g/L。3.根据权利要求1所述的一种红锥嫩枝组培繁殖方法，其特征在于：所述的增殖培养基的配方为：改良WPM培养基+6-...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐春艳，陈素云，
申请(专利权)人：唐春艳，陈素云，
类型：发明
国别省市：广西;45