一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的试剂盒。本发明专利技术提供的试剂盒，包括用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A和用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B；所述外周血Treg为健康人接受动员剂后得到的外周血Treg细胞。本发明专利技术提供的试剂盒操作简单、方便实用，可以预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险，为降低单倍体相合造血干细胞移植术后并发症，优化单倍体相合造血干细胞移植术研究应用奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的试剂盒
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的试剂盒。
技术介绍
血液系统恶性疾病复发率高，长期生存率低，有相当比例的患者对于普通化疗不敏感。造血干细胞移植术为根治以上恶性疾病带来了希望。但是，供者选择是该治疗措施面临的最大问题。由于目前我国实行计划生育的基本国策，患者想要找到人类白细胞抗原(HLA)相合的供者存在很大的困难，研究结果显示仅有不到10％的患者能够找到HLA全相合的供者。而且，寻找非血缘供者的周期长，骨髓库志愿者库存容量不足，反悔率高等不利因素，严重限制了全相合造血干细胞移植术的开展。而单倍体相合造血干细胞移植术仅需要HLA单倍体相合即可开展移植，这极大地拓宽了供者来源，缓解了供者来源紧张的困难局面。从理论上说，几乎每个患者都能找到至少一个单倍体供者。此外，单倍体相合的移植物具有较强移植物抗肿瘤效应(GVL)，有利于抑制原发肿瘤复发。但是，正如一个硬币具有两面，单倍体相合造血干细胞移植术也具有显著的不足。因为移植物和受者并非HLA完全匹配，移植后常常引起更为严重的免疫排斥反应，导致了较严重的并发症如肺部感染、造血重建和免疫重建困难等等。其中，最为严重的是急性移植物抗宿主病(aGVHD)。aGVHD是移植物中的免疫细胞(主要是T细胞)针对受者靶器官发生的免疫攻击活动。aGVHD发生的病理过程可大致分为4个阶段。首先，由预处理造成的组织损伤而引起抗原释放及炎症趋化因子的表达；然后，抗原呈递细胞活化；接下来，供者T细胞接受呈递的抗原，发生活化；最终，免疫细胞和细胞因子风暴对靶器官造成损伤，引起的皮肤、肺脏、肝脏及肠等多脏器损伤。而靶器官的损伤可进一步释放抗原，进入一个渐进的恶性循环。开展单倍体相合造血干细胞移植术时，移植物和受者之间的HLA不完全匹配，aGVHD的发生率更高，疾病程度更加严重。虽然目前临床采取了激素治疗、免疫抑制剂治疗和间充质干细胞输入等多种方案干预，但是aGVHD仍然是影响单倍体相合造血干细胞移植后患者生存率及生活质量的主要因素。一旦患者发生aGVHD，将严重影响移植后造血重建和免疫重建，甚至影响病人生命。目前aGVHD相关死亡率占移植后死亡的50％以上。为此，寻求有效的aGVHD预先诊断技术，提早防范aGVHD发生的风险，是单倍体相合造血干细胞移植术研究的热点之一。调节性T细胞(Treg)是一类具有免疫调节能力的T细胞，一般认为Treg是由初始CD4+T细胞在转化生长因子(TGF-β)的诱导下分化为而来的，主要包括天然产生的自然调节性T细胞(nTreg)和诱导产生的适应性调节性T细胞(iTreg)等多个亚群。前者产生于胸腺，以CD4+CD25+Foxp3+Treg为主，后者是成熟T细胞在某些条件下诱导产生，是Foxp3非依赖性的亚群。CD4+CD25+的Treg于1995年首次被报道，研究人员发现其在人类和鼠类的胸腺、淋巴组织及外周血中均有分布。而后Fontenot等研究发现，胞内表达的叉头样转录因子(Foxp3)是Treg的重要特征性标志，当Foxp3表达逐渐升高时，CD45RA+FoxP3low的幼稚Tregs也逐渐发育为CD45RA-FoxP3high的活化Tregs。进一步研究发现CD4+CD25+Foxp3+的Treg亚群免疫功能较强，可参与维持机体免疫功能的平衡，诱导免疫耐受。因为Treg具有强大免疫抑制能力，且和免疫性疾病的发生进展密切相关，相关领域的研究人员和临床工作者已经尝试分析Treg的构成和功能，来判Treg和断类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮疾病进展之间的联系，并取得了不错的效果。Ponchel及同事研究后发现，患者外周血中Treg和T细胞等亚群的变化可以预测类风湿性关节炎患者对甲氨蝶呤的反应性。而Janssen等则报道了Treg亚群在预测血清反应阳性的关节炎患者的预后时具有重要价值。He等则发现系统性红斑狼疮的患者接受白细胞介素2治疗后，其外周血中的Treg亚群也发生了改变，提示活动性病变减少。与类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮相似，aGVHD本质上也是一类免疫因素介导的疾病，因此Treg在aGVHD发生发展中的作用日益受到关注。Rieger等通过回顾分析发现患者肠粘膜的Foxp3+的Treg减少会导致aGVHD发生风险增高。同期，另一研究小组的动物实验研究结果表明：CD4+CD25+CD62L+的Treg亚群可以减少小鼠的致死性aGVHD。但是，这些结果虽然令人振奋，但是大都基于临床回顾性资料分析和动物实验得出的结果。因此，多个医疗中心观察了移植物内Treg和移植后患者体内Treg与造血干细胞移植后aGVHD发生发展之间的联系。令人遗憾的是，现有的结论并不统一，甚至自相矛盾。Zhai等报道移植后患者体内CD4+CD25+Treg亚群较高有助于降低II度以上aGVHD的发生率。而Magenau小组声称，只有CD4+CD25+Foxp3+的Treg亚群和aGVHD的发生相关。更晚一些发表的Rosenzwajg小组的结果则表明，移植物中的Treg不能预测aGVHD。更重要的是，相关结果均为全相合造血干细胞移植病例的结果。而单倍体相合造血干细胞移植具有预处理方案更加复杂、供者细胞来源更加多变、aGVHD发生率和致死率更高的特点，全相合病例的研究结果不能直接套用到单倍体相合病例中，目前相关的研究尚属空白。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后发生aGVHD风险的试剂盒。本专利技术提供的试剂盒，包括用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A和用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞是否具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B；所述外周血Treg细胞为健康人接受动员剂后得到的外周血Treg细胞。上述健康人指给患者输入的外周血的来源人，为健康人接受动员剂后的血。上述动员剂为粒细胞集落刺激因子；上述试剂盒中，所述试剂盒还包括记载如下判断标准A的可读载体：所述判断标准A为：若符合如下条件：移植术时待测患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16×106个/公斤体重，则待测患者术后发生或候选发生aGVHD低风险，若不符合所述条件，则待测患者术后发生或候选发生aGVHD非低风险。上述试剂盒中，所述试剂盒还包括记载如下判断标准B的可读载体：所述判断标准B为：移植术时输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16×106个/公斤体重的待测患者术后发生aGVHD的风险低于移植术时输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量小于2.16×106个/公斤体重的待测患者。上述试剂盒中，所述待测患者术后发生或候选发生aGVHD为待测患者术后2年或180天内发生或候选发生aGVHD。上述试剂盒中的可读载体在制备预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后特定时间内发生aGVHD风险的产品中的应用也是本专利技术保护的范围。上述用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A和所述用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后发生aGVHD风险的试剂盒，包括用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A和用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞是否具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B；所述外周血Treg细胞为健康人接受动员剂后得到的外周血Treg细胞。

【技术特征摘要】
2017.01.13 CN 20171002446011.一种预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后发生aGVHD风险的试剂盒，包括用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A和用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞是否具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B；所述外周血Treg细胞为健康人接受动员剂后得到的外周血Treg细胞。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括记载如下判断标准A的可读载体：所述判断标准A为：若符合如下条件：移植术时待测患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16×106个/公斤体重，则待测患者术后发生或候选发生aGVHD低风险，若不符合所述条件，则待测患者术后发生或候选发生aGVHD非低风险。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括记载如下判断标准B的可读载体：所述判断标准B为：移植术时输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16×106个/公斤体重的待测患者术后发生aGVHD的风险低于移植术时输入外...

【专利技术属性】
技术研发人员：王恒湘，丁丽，郭子宽，朱恒，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军总医院，
类型：发明
国别省市：北京,11