一种疫苗佐剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种疫苗佐剂及其制备方法，按重量份数计，原料内包括以下组分：注射用水、脂质体、吐温‑80、注射用白油、雷西莫特、司盘‑80。肌肉注射脂质体产生抗原缓释效应，脂质体能够将抗原引向抗原递呈细胞，增强机体免疫应答。雷西莫特可以促进树突状细胞成熟及增强细胞和体液免疫应答。雷西莫特依赖于注射发挥作用，分布于全身，在体内的半衰期变短，不能很好地引起适应性免疫反应。脂质体有利于活性成分跨越生理和细胞屏障，具有使药物靶向网状内皮系统、增强药效等优点。脂质体、雷西莫特和免疫原共用时，能够提高雷西莫特所引起的适应性免疫反应，脂质体和雷西莫特协作时能激发先天性免疫反应，能协同增效，提高机体的免疫应答。

A vaccine adjuvant and its preparation method

The present invention discloses a vaccine adjuvant and its preparation method. According to the weight number, the raw material includes the following components: injection water, liposomes, Twain 80, injection of white oil, Reci Mott and 80. Intramuscular injection of liposomes produces antigenic slow release effect. Liposomes can induce antigen to antigen presenting cells and enhance immune response. Reci Mott can promote dendritic cell maturation and enhance cellular and humoral immune responses. Reci Mott relies on injections, which are distributed throughout the body, and the half-life in the body becomes shorter. Liposomes help the active components to cross the physiological and cellular barrier, and have the advantages of drug targeting reticuloendothelial system and enhancing efficacy. When liposomes, Reci Mott and immunogen are shared, it can improve the adaptive immune response caused by limitmot. When the liposomes and reismot collaborate, they can stimulate the innate immune response, which can synergistically and improve the immune response of the body.

【技术实现步骤摘要】
一种疫苗佐剂及其制备方法
本专利技术涉及生物医药领域，更具体地，涉及一种疫苗佐剂及其制备方法。
技术介绍
免疫接种的目的是诱发机体产生对接种抗原强大的免疫反应，以保护机体免受相应病原体的侵袭。为了达到此目的，和减毒疫苗相比，灭活疫苗需要佐剂的协助组。佐剂又称疫苗调节剂或疫苗增强剂，佐剂是疫苗的一种添加剂，当它先于抗原或与抗原混合注入机体后，能够增强机体对抗原的免疫应答或者改变免疫反应的类型，属于非特异性免疫的增强剂，而其本身无抗原性。公开号为CN101428145A的中国专利公开了一种纳米微粒佐剂，该佐剂的成分含有矿物油、表面活性剂、免疫增强剂，矿物油选自注射用白油或轻质液体石蜡油，表面活性剂选自司盘-80、司盘-85、吐温-80、吐温-85、单硬脂酸甘油酯或ArlacelA，免疫增强剂为硬脂酸铝、纯化的黄芪多糖、黄芩苷、壳聚糖和卵磷脂中的一种或多种，以100ml佐剂混合物计，表面活性剂1-20ml，免疫增强剂0.1-100g。这种佐剂通过表面活性剂使佐剂内的原料充分乳化，并通过免疫增强剂增强免疫应答，但是这种佐剂对免疫应答的增强方式较为单一，增强效果较差，有待改进。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种疫苗佐剂及其制备方法，能够增强机体免疫应答。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种疫苗佐剂，按重量份数计，原料内包括以下组分：注射用水60-100份；脂质体3-6份；吐温-804-8份；注射用白油60-100份；雷西莫特5-8份；司盘-804-8份。通过采用上述技术方案，脂质体作为疫苗佐剂，肌肉注射脂质体产生抗原缓慢释放效应，并且脂质体有通过自然途径被巨噬细胞摄入的倾向，因而能够将抗原引向抗原递呈细胞，进而增强机体免疫应答。同时，脂质体中的磷脂酰胆碱等是细胞膜的正常成分，可以生物降解，所以它本身无毒性。雷西莫特作为TLR-7/8激动剂，可以促进树突状细胞的成熟以及增强细胞及体液免疫应答。但是雷西莫特是一种易溶于水的小分子，依赖于注射发挥作用，分布于全身而非停留在注射点上，导致雷西莫特在体内的半衰期就会变短，不利于在局部激发树突状细胞，进而不能很好地引起适应性免疫反应。脂质体是一种人工脂质膜，有利于活性成分跨越生理和细胞屏障，具有使药物靶向网状内皮系统、增强药效、减小药物毒性、避免耐受性、提高疗效、改变给药途径等优点。脂质体、雷西莫特和免疫原共用时，能够克服雷西莫特不能停留在注射点上的缺点，提高雷西莫特所引起的适应性免疫反应，且脂质体和雷西莫特协作时能够激发先天性免疫反应，具有协同增效的作用，进一步提高机体的免疫应答。本专利技术进一步设置为：按重量份数计，所述疫苗佐剂原料内包括，木鳖子皂苷3-6份。通过采用上述技术方案，木鳖子为木鳖的成熟种子，具有消肿散结和攻毒疗疮功能，从木鳖子中提取的木鳖子皂苷具有免疫佐剂活性。木鳖子皂苷具有溶血性，木鳖子皂苷与胆甾醇结合生成不溶性分子复合物，破坏血红细胞的渗透性而发生崩解，而脂质体内的胆固醇则能够与木鳖子皂苷发生结合，克服木鳖子皂苷的溶血性，同时保留木鳖子皂苷的免疫佐剂活性。本专利技术进一步设置为：按重量份数计，所述疫苗佐剂原料内包括，硬脂酸铝15-30份。通过采用上述技术方案，硬脂酸铝具有乳化的作用，提高雷西莫特、脂质体和木鳖子皂苷的相容性和分散的均匀度，提高雷西莫特和脂质体之间的协同效果、提高脂质体降低木鳖子皂苷溶血性的效果。同时，硬脂酸铝能够延缓免疫原在机体内的存留时间，使之持续缓慢释放，增强巨噬细胞的吞噬与杀菌能力。通过硬脂酸铝的缓释作用进一步延长了雷西莫特在基体内的半衰期，进一步提高雷西莫特所引起的适应性免疫反应。本专利技术的另一目的在于提供一种疫苗佐剂的制备方法，包括以下步骤，步骤1，佐剂水相的制备：将脂质体、木鳖子皂苷和吐温-80加入至注射用水中，充分搅拌；步骤2，佐剂油相的制备：将雷西莫特、司盘-80加入至注射用白油中，充分搅拌；步骤3，步骤3，在搅拌佐剂水相的过程中加入佐剂油相进行充分乳化，获得备用乳化液。通过采用上述技术方案，通过佐剂水相和佐剂油相的分开制作，分别提高了佐剂水相和佐剂油相的混合均匀度，再通过将佐剂水相和佐剂油相的搅拌形成备用乳化液，以提高佐剂水相和佐剂油相的混合均匀度，提高了雷西莫特、脂质体和木鳖子皂苷的免疫佐剂活性，同时提高雷西莫特和脂质体之间的协同增效、提高脂质体降低木鳖子皂苷溶血性的效果。本专利技术进一步设置为：步骤2，佐剂油相的制备：将雷西莫特、硬脂酸铝、司盘-80加入至注射用白油中，充分搅拌。通过采用上述技术方案，硬脂酸铝能够促进司盘-80、雷西莫特、注射用白油之间的混合与乳化，同时硬脂酸铝能够延缓免疫原在机体内的存留时间，使之持续缓慢释放，增强巨噬细胞的吞噬与杀菌能力。通过硬脂酸铝的缓释作用进一步延长了雷西莫特在基体内的半衰期，进一步提高雷西莫特所引起的适应性免疫反应。本专利技术进一步设置为：步骤4，将备用混合液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米乳化液。通过采用上述技术方案，从免疫学观点来看，采用纳米技术制备的佐剂均匀性好，其包裹或粘附的抗原颗粒正是巨噬细胞和DC的首选吞噬目标，为实现机体有效的免疫反应完成了重要的一步。纳米粒子的表面效应可使纳米粒子表面原子与，总原子数之比随粒径的变小而急剧增大后引起性质上的变化，从而使制备的疫苗产生一些新的性质，如：(1)靶向性，实现了抗原的有效呈递，可进一步提高粘附和刺激抗原呈递细胞吞噬的能力。(2)缓释性，疫苗进入机体后，缓慢释放抗原，提高了抗原生物利用度，充分加工处理抗原，表达抗原，免疫效应比较持久。(3)显著提高免疫细胞数量，增强淋巴细胞增殖活性及白细胞介素-2的诱生活性。本专利技术进一步设置为：采用0.2μm微孔滤膜对纳米乳化液进行滤过除菌。通过采用上述技术方案，通过0.2μm微孔滤膜对纳米乳化液进行除菌，能够有效去除疫苗佐剂内的细菌和微生物，保证了疫苗佐剂的无菌性和使用的安全性。综上所述，本专利技术具有以下有益效果：1.脂质体、雷西莫特和免疫原共用时，能够克服雷西莫特不能停留在注射点上的缺点，提高雷西莫特所引起的适应性免疫反应，且脂质体和雷西莫特协作时能够激发先天性免疫反应，具有协同增效的作用，进一步提高机体的免疫应答；2.脂质体内的胆固醇能够与木鳖子皂苷发生结合，克服木鳖子皂苷的溶血性，同时保留木鳖子皂苷的免疫佐剂活性；3.硬脂酸铝具有乳化的作用，提高雷西莫特、脂质体和木鳖子皂苷的相容性和分散的均匀度，提高雷西莫特和脂质体之间的协同效果、提高脂质体降低木鳖子皂苷溶血性的效果。同时，硬脂酸铝能够延缓免疫原在机体内的存留时间，使之持续缓慢释放，增强巨噬细胞的吞噬与杀菌能力。通过硬脂酸铝的缓释作用进一步延长了雷西莫特在基体内的半衰期，进一步提高雷西莫特所引起的适应性免疫反应。具体实施方式实施例1：一种疫苗佐剂，原料内各组分及重量份数如表1所示。一种疫苗佐剂的制备方法包括以下步骤：步骤1，佐剂水相的制备：将脂质体和吐温-80加入至注射用水中，充分搅拌；步骤2，佐剂油相的制备：将雷西莫特和司盘-80加入至注射用白油中，充分搅拌；步骤3，在搅拌佐剂水相的过程中加入佐剂油相进行充分乳化，获得备用乳化液；步骤4，将备用乳化液采用高压均质机进行纳米处理，获得纳米乳化液；步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗佐剂，按重量份数计，原料内包括以下组分：

【技术特征摘要】
1.一种疫苗佐剂，按重量份数计，原料内包括以下组分：2.根据权利要求1所述的一种疫苗佐剂，其特征在于：按重量份数计，所述疫苗佐剂原料内包括，木鳖子皂苷3-6份。3.根据权利要求2所述的一种疫苗佐剂，其特征在于：按重量份数计，所述疫苗佐剂原料内包括，硬脂酸铝15-30份。4.一种如权利要求1所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，步骤1，佐剂水相的制备：将脂质体、木鳖子皂苷和吐温-80加入至注射用水中，充分搅拌；步骤2，佐剂油相的制备：将雷西莫特、司盘-80加...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒建洪，何玉龙，陈健，王泽宇，
申请(专利权)人：杭州洪晟生物技术股份有限公司，浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33