一种miRNA生物标志物、组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种miRNA生物标志物、组合物及其用途。所述miRNA生物标志物可在制备肺癌检测试剂中应用。还涉及一种组合物，所述组合物包括miRNA中的至少一种以及各miRNA的正向引物和反向引物的序列；所述组合物可在肺癌检测试剂中应用。鉴定的miRNA与肺癌发生具有密切相关性，能够作为生物标志物对肺癌进行筛查和诊断，为临床个体化干预治疗提供有效依据。 1

【技术实现步骤摘要】
一种miRNA生物标志物、组合物及其用途
本专利技术属于生物
，具体而言本专利技术涉及生物标志物，尤其是涉及一种血清miRNA生物标志物及其在肺癌检测中的应用。
技术介绍
肺癌是目前世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，60-70％的患者在初诊时已为晚期，5年生存率仅为16.1％，而Ⅰ期肺癌治疗后的5年生存率可达82％，故早期筛查是提高肺癌生存率的重要手段。目前常用的肺癌筛查手段为低剂量螺旋CT，但该技术也存在明显缺陷：(1)筛查的假阳性率高(特别是5-10mm的纯肺内磨玻璃密度影)且随访筛查时间长，增加了医疗费用及辐射诱发癌变的风险。(2)导致过度的创伤性活检及手术介入。miRNA是一类长度约为20～24个核苷酸的非编码单链小RNA，广泛存在于动植物和病毒中，通过miRNA剪切和抑制蛋白翻译的方式调控靶基因，参与多种生物学信号通路的调节。研究表明，超过半数的miRNA在基因组上定位于与肿瘤发生相关的区域和脆性位点，与肿瘤的诊断、分期、预后等密切相关。目前为止还没有特异度和灵敏度好的miRNA适合用来做肺癌检测标志物，特别是血清标志物，更缺乏相关证据。而且，由于血清中miRNA的表达量较低，寻找一种灵敏度高、操作简便且成本低廉的适于肺癌检测的方法是目前血清miRNA应用于临床检测亟待解决的问题，实时荧光定量PCR是目前检测血清miRNA的主要方法，该方法快速、便捷，精确度和灵敏度可满足临床需求。综上所述，本领域仍然需要一种快速、灵敏、操作简便、成本低廉的肺癌检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种miRNA生物标志物、组合物及其用途。本专利技术第一方面提供一种miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物包含一个或多个选自以下的序列：miRNA-7：UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGU；miRNA-17：CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG；miRNA-21：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA；miRNA-126：CAUUAUUACUUUUGGUACGCG；miRNA-145：GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCC；miRNA-146a：UGAGAACUGAAUUCCAUGGGUU；miRNA-155：UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU；miRNA-182：UUUGGCAAUGGUAGAACUCACACU；miRNA-200b：CAUCUUACUGGGCAGCAUUGGA；miRNA-205：UCCUUCAUUCCACCGGAGUCUG；miRNA-210：CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA；miRNA-221：AGCUACAUUGUCUGCUGGGUUUC。一个优选实施方式中，所述miRNA生物标志物为血清miRNA生物标志物。本专利技术第二方面提供本专利技术第一方面的miRNA生物标志物在制备用于检测和/或诊断肺癌的试剂中的应用。一个优选实施方式中，所述试剂是试剂盒的形式。另一个优选实施方式中，所述检测试剂还包含Cel-miRNA-39作为内参miRNA。本专利技术第三方面提供一种组合物，所述组合物包含miRNA生物标志物以及各miRNA对应的正向引物和反向引物的序列，其中，所述miRNA生物标志物包含一个或多个选自以下的序列：miRNA-7：UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGU；miRNA-17：CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG；miRNA-21：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA；miRNA-126：CAUUAUUACUUUUGGUACGCG；miRNA-145：GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCC；miRNA-146a：UGAGAACUGAAUUCCAUGGGUU；miRNA-155：UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU；miRNA-182：UUUGGCAAUGGUAGAACUCACACU；miRNA-200b：CAUCUUACUGGGCAGCAUUGGA；miRNA-205：UCCUUCAUUCCACCGGAGUCUG；miRNA-210：CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA；miRNA-221：AGCUACAUUGUCUGCUGGGUUUC；并且其中，所述各miRNA对应的正向引物和反向引物的序列选自下组：其中V是A、G、或C，N是A、G、C、或T。一个优选实施方式中，所述miRNA生物标志物为血清miRNA生物标志物，并且所述组合物还包含Cel-miRNA-39作为内参miRNA和/或包含Cel-miRNA-39对应的正向引物序列TCACCGGGTGTAAATCAGCTTG(SeqIDNo.:13)和反向引物序列ACGACTCACTATAGGGCGAGCACAGAATTAATTTTTTTTTTTTTTTTVN(SeqIDNo.:14，其中V是A、G、或C，N是A、G、C、或T)。本专利技术第四方面提供本专利技术第三方面的组合物在制备用于检测和/或诊断肺癌的试剂中的用途。一个优选实施方式中，所述试剂是试剂盒的形式。本专利技术第五方面提供一种用于检测和/或诊断肺癌的引物组合物，该引物组合物包含一个或多个选自以下的引物：其中V是A、G、或C，N是A、G、C、或T。一个优选实施方式中，所述引物组合物还包含作为内参miRNA的Cel-miRNA-39的检测引物，所述检测引物选自正向引物TCACCGGGTGTAAATCAGCTTG(SeqIDNo.:13)和反向引物ACGACTCACTATAGGGCGAGCACAGAATTAATTTTTTTTTTTTTTTTVN(SeqIDNo.:14，其中V是A、G、或C，N是A、G、C、或T)。另一个优选实施方式中，所述引物组合物中的引物为荧光定量检测引物，例如荧光定量PCR检测引物。本专利技术具有以下有益效果：首先，血清相对组织样本较易获得，与穿刺相比，来源方便性能稳定，且属于无创(或微创)，减轻了患者的痛苦及穿刺导致的并发症的风险，同时解决了传统穿刺无法取材情况下的取材问题。其次，本专利技术确定的miRNA组合与肺癌发生的密切相关，能够作为生物标志物对肺癌进行筛查和诊断，为临床个体化干预治疗提供有效依据。最后，通过实时荧光定量PCR技术对肺癌病人的血清水平miRNA的检测，定量准确，方便可靠。本专利技术确定的miRNA组合与肺癌发生密切相关，能够作为生物标志物对肺癌病人进行筛查和诊断，为临床个体化干预治疗提供有效依据。为今后肺癌血清miRNA的研究提供了理论依据，并为肺癌的分子诊断提供了新思路，具有一定的理论意义和潜在的实用价值。具体实施方式miRNA在血清中可长期稳定存在，因此血液中肿瘤特异性miRNA可作为肿瘤特异性标志物。分析血液中肺癌特异miRNA的表达，利用miRNA作为分子标志物进行肺癌早期筛查、诊断及疗效预测等，有助于为肺癌的诊断、治疗提供新的途径，为肺癌的预防和早诊早治提供有力的理论和实践依据。本专利技术一方面提供一种miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物包含一个或多个选自以下的序列：miRNA-7：UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGU；miRNA-17：CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG；miRNA-21：UAG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物包含一个或多个选自以下的序列：

【技术特征摘要】
1.一种miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物包含一个或多个选自以下的序列：miRNA-7：UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGU；miRNA-17：CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG；miRNA-21：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA；miRNA-126：CAUUAUUACUUUUGGUACGCG；miRNA-145：GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCC；miRNA-146a：UGAGAACUGAAUUCCAUGGGUU；miRNA-155：UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU；miKNA-182：UUUGGCAAUGGUAGAACUCACACU；miRNA-200b：CAUCUUACUGGGCAGCAUUGGA；miRNA-205：UCCUUCAUUCCACCGGAGUCUG；miRNA-210：CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA；miRNA-221：AGCUACAUUGUCUGCUGGGUUUC。2.如权利要求1所述的miRNA生物标志物，其特征在于，所述miRNA生物标志物为血清miRNA生物标志物。3.如权利要求1或2所述的miRNA生物标志物在制备用于检测和/或诊断肺癌的试剂中的用途。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述试剂是试剂盒的形式。5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述试剂还包含Cel-miRNA-39作为内参miRNA。6.一种组合物，所述组合物包含miRNA生物标志物以及各miRNA对应的正向引物和反向引物的序列，其中，所述miRNA生物标志物包含一个或多个选自以下的序列：miRNA-7：UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGU；miRNA-17：CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG；miRNA-21：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA；miRNA-126：CAUUAUUACUUUUGGUACGCG；miRNA-145：GUCCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：闻丹忆，李荣宇，狄宇，
申请(专利权)人：上海立迪生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31