流感病毒疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术提供的是流感血细胞凝集素多肽，包括嵌合的流感病毒血细胞凝集素多肽和包含修饰的糖基化位点和非天然的糖基化位点的流感血细胞凝集素多肽，包含它们的组合物，包含它们的疫苗及它们的使用方法。 1

Influenza vaccine and its application

The present invention provides influenza hemagglutinin peptides, including chimeric influenza virus hemagglutinin peptides and influenza hemagglutinin peptides containing modified glycosylation sites and non natural glycosylation sites, including their compositions, their vaccines and their use methods. One

【技术实现步骤摘要】
流感病毒疫苗及其应用本申请是申请日为2012年09月19日、申请号为201280057023.5、名称为“流感病毒疫苗及其应用”的专利技术申请的分案。本申请要求美国临时申请号61/536,924(申请日为2011年9月20日)、美国临时申请号61/565,899(申请日为2011年12月1日)、美国临时申请号61/607,526(申请日为2012年3月6日)、美国临时申请号61/648,525(申请日为2012年5月17日)、美国临时申请号61/670,108(申请日为2012年7月10日)和美国临时申请号61/684,481(申请日为2012年8月17日)的优先权权益，所述美国临时申请以其整体并入本文作为参考。本专利技术是在政府资助下完成的，资助号为AI070469、AI086061和HHSN266200700010C，资助奖金由美国国家卫生研究院(theNationalInstitutesofHealth)提供。美国政府在本专利技术中具有一定的权利。1.引言本文提供的是流感血细胞凝集素多肽(fluhemagglutininpolypeptides)，例如，嵌合的流感病毒血细胞凝集素多肽，和包含它们的组合物、包含它们的疫苗及其使用方法。2.背景流感病毒流感病毒是有包膜的RNA病毒，属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)(Palese和Shaw(2007)Orthomyxoviridae:TheVirusesandTheirReplication(正粘病毒科：病毒及其复制),第5版,Fields'Virology,由B.N.Fields,D.M.Knipe和P.M.Howley编著,WoltersKluwerHealth/LippincottWilliams&Wilkins,Philadelphia,USA,p1647-1689)。甲型流感病毒的天然宿主主要是禽类，但是甲型流感病毒(包括禽类来源的那些)也可以在人类和其它动物宿主(蝙蝠、犬、猪、马、海洋哺乳动物和鼬科动物)中感染并引起疾病。例如，在亚洲流行的H5N1禽类甲型流感病毒已经在中国和印度尼西亚的猪中发现，并将其宿主范围扩展至包括猫、豹和虎，猫、豹和虎通常被认为对甲型流感不敏感(CIDRAP-AvianInfluenza:AgriculturalandWildlifeConsiderations)。动物中流感病毒感染的发生可以潜在地产生人类大流行性流感毒株。甲型流感病毒和乙型流感病毒是主要的人类病原体，引起呼吸系统疾病，严重范围从亚临床感染到可能导致死亡的原发性病毒性肺炎。感染的临床效果由于流感毒株的毒力和宿主的暴露情况、病史、年龄和免疫状况而不同。由于相对高的攻击率，季节性流感引起的累计发病率和死亡率是相当高的。在正常的季节里，在全球范围内，流感可以引起300万到500万病例的严重疾病和高达500,000例死亡(WorldHealthOrganization(2003)Influenza:Overview；March2003(世界卫生组织(2003)流感：综述；2003年3月))。在美国，流感病毒每年感染估计10-15％的人口(Glezen和CouchRB(1978)InterpandemicinfluenzaintheHoustonarea,1974-76(1974-76年休斯顿地区大流行间的流感).NEnglJMed298:587-592；Fox等人(1982)InfluenzavirusinfectionsinSeattlefamilies,1975-1979.II.Patternofinfectionininvadedhouseholdsandrelationofageandpriorantibodytooccurrenceofinfectionandrelatedillness(1975-1979年西雅图家庭中的流感病毒感染。II.侵入家庭的感染模式及年龄和现有抗体与发生感染和相关疾病的关系).AmJEpidemiol116:228-242)并与每年大约30,000例死亡有关(ThompsonWW等人(2003)MortalityAssociatedwithInfluenzaandRespiratorySyncytialVirusintheUnitedStates(在美国与流感病毒和呼吸道合胞病毒相关的死亡率).JAMA289:179-186；Belshe(2007)Translationalresearchonvaccines:influenzaasanexample(对疫苗的翻译研究：用流感作为实例).ClinPharmacolTher82:745-749)。除了每年的流行病以外，流感病毒还是罕见的大流行的起因。例如，甲型流感病毒可以引起大流行，例如在1918年、1957年、1968年和2009年发生的大流行。由于缺乏预先形成的针对主要病毒抗原血细胞凝集素(hemagglutinin,HA)的免疫力，因此大流行的流感可以在一年内影响超过50％的人口并经常引起比流行性流感更严重的疾病。一个经典型的实例是1918年的大流行，在1918年估计有5千万到1亿人死亡(Johnson和Mueller(2002)UpdatingtheAccounts:GlobalMortalityofthe1918-1920“Spanish”InfluenzaPandemicBulletinoftheHistoryofMedicine76:105-115)。由于1990年代后期高致病性禽类H5N1流感病毒的出现(Claas等人(1998)HumaninfluenzaAH5N1virusrelatedtoahighlypathogenicavianinfluenzavirus(与高致病性禽流感病毒相关的人类甲型流感病毒H5N1).Lancet351:472-7)，因此人们担心它可能是下一个引起大流行的病毒。再者，H7和H9毒株均是新的大流行的候选毒株，因为这些毒株偶尔会感染人类。免受流感病毒感染的一种有效方式是通过免疫接种；然而，当前的免疫接种方法依赖于实现流行毒株与包含在疫苗中的分离毒株之间的良好匹配。由于多种因素的组合，这样一种匹配常常是很难达到的。首先，流感病毒持续地发生变化：每3-5年甲型流感病毒的优势毒株就会被经历了充分的抗原性漂移(antigenicdrift)以逃避现有的抗体应答的变异毒株所代替。因此，疫苗制剂中包含的分离毒株必须基于世界卫生组织(WHO)协作中心的密切监视结果而每年进行筛选。其次，为了使得疫苗生产和分布具有足够的时间，毒株必须在流感季节来临之前大约六个月进行筛选。疫苗毒株筛选委员会(thevaccinestrainselectioncommittee)的预报经常是不准确的，这导致疫苗接种效果明显降低。甲型流感病毒的新亚型进入人群的可能性也显示了对当前疫苗接种策略的重大挑战。由于预报流感病毒的哪种亚型和毒株将会引起下一次大流行是不可能的，因此目前的毒株特异性方法不能用于制备大流行性流感疫苗。3.概述本文提供的是诱导针对流感病毒的保守的HA干结构域(stemdomain)(本文中有时称之为“茎”结构域(“st本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.嵌合的流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽，包含HA干结构域和HA球状头结构域，其中

【技术特征摘要】
2011.09.20 US 61/536,924;2011.12.01 US 61/565,899;1.嵌合的流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽，包含HA干结构域和HA球状头结构域，其中所述HA球状头结构域对所述HA干结构域是异源的。2.嵌合的流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽，包含季节性流感病毒毒株的HA干结构域和异源流感病毒毒株的HA球状头结构域。3.权利要求1或2的嵌合的流感病毒HA多肽，其中所述HA干结构域维持在图1中命名为Ap和Aq的半胱氨酸残基。4.权利要求1或2的嵌合的流感病毒HA多肽，其中所述HA干结构域是亚型H1的流感病毒的HA干结构域。5.权利要求1或2的嵌合的流感病毒HA多肽，其中所述HA干结构域是亚型H3的流感病毒的HA干结构域。6.权利要求4的嵌合的流感病毒HA多肽，其中所述HA球状头结构域是亚型H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16或H17的流感病毒的HA球状头结构域。7.权利要求5的嵌合的流感病毒HA多肽，其中所述HA球状头结构域是亚型H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16或H17的流感病毒的HA球状头结构域。8.权利要求6的嵌合的流感病毒HA多肽，其中所述HA球状头结构域是亚型H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13或H16的流感病毒的HA球状头结构域。9.权利要求7的嵌合的流感病毒HA多肽，其中所述HA球状头结构域是亚型H4、H7、H10、H14或H15的流感病毒的HA球状头结构域。10.核酸，其编码权利要求1-9中任一项的多肽。11.细胞，其表达权利要求10的核酸。12.病毒，其包含经工程改造以表达权利要求10的核酸的基因组。13.病毒，其包含权利要求1-9中任一项的多肽。14.权利要求12的病毒，其中所述病毒是流感病毒。15.权利要求13的病毒，其中所述病毒是流感病毒。16.权利要求14的病毒，它是灭活的或裂解的。17.权利要求15的病毒，它是灭活的或裂解的。18.病毒样颗粒，包含权利要求1-9中任一项的多肽。19.免疫原性组合物，包含权利要求1-9中任一项的多肽。20.免疫原性组合物，包含权利要求12的病毒。21.免疫原性组合物，包含权利要求13的病毒。22.免疫原性组合物，包含权利要求14的病毒。23.免疫原性组合物，包含权利要求15的病毒。24.免疫原性组合物，包含权利要求18的病毒样颗粒。25.给对象实施免疫的方法，包括给予所述对象有效量的权利要求19的免疫原性组合物。26.给对象实施免疫的方法，包括给予所述对象有效量的权利要求20的免疫原性组合物。27.给对象实施免疫的方法，包括给予所述对象有效量的权利要求21的免疫原性组合物。28.给对象实施免疫的方法，包括给予所述对象有效量的权利要求22的免疫原性组合物。29.给对象实施免疫的方法，包括给予所述对象有效量的权利要求23的免疫原性组合物。30.给对象实施免疫的方法，包括给予所述对象有效量的权利要求24的免疫原性组合物。31.权利要求25的方法，其中所述对象是人。32.权利要求26的方法，其中所述对象是人。33.权利要求27的方法，其中所述对象是人。34.权利要求28的方法，其中所述对象是人。35.权利要求29的方法，其中所述对象是人。36.权利要求30的方法，其中所述对象是人。37.权利要求25的方法，其中所述免疫原性组合物经肌内或鼻内给予所述对象。38.预防流感病毒疾病的方法，包括给予对象有效量的权利要求25的免疫原性组合物。39.治疗流感病毒感染或流感病毒疾病的方法，包括给予对象有效量的权利要求25的免疫原性组合物。40.预防流感病毒疾病的方法，包括给予对象有效量的权利要求25的免疫原性组合物。41.预防流感病毒疾病的方法，包括给予对象有效量的权利要求25的免疫原性组合物。42.权利要求26的方法，其中所述免疫原性组合物经肌内或鼻内给予所述对象。43.预防流感病毒疾病的方法，包括给予对象有效量的权利要求26的免疫原性组合物。44.治疗流感病毒感染或流感病毒疾病的方法，包括给予对象有效量的权利要求26的免疫原性组合物。45.预防流感病毒疾病的方法，包括给予对象有效量的权利要求26的免疫原性组合物。46.预防流感病毒疾病的方法，包括给予对象有效量的权利要求26的免疫原性组合物。47.预防对象的流感病毒疾病或感染的方法，包括给予所述对象流感病毒血细胞凝集素多肽，该对象对于所述多肽来说是原初的。48.权利要求47的方法，其中所述流感病毒血细胞凝集素多肽是来自亚型H2、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16和/或H17的流感病毒。49.权利要求48的方法，包括给予所述对象第二种流感病毒血细胞凝集素多肽，该对象对于所述多肽来说是原初的，其中所述第二种流感病毒血细胞凝集素多肽是来自亚型H2、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16和/或H17的流感病毒，和其中第一次和第二次给药的所述流感病毒血细胞凝集素多肽是来自不同的流感病毒亚型。50.权利要求49的方法，包括给予所述对象第三种流感病毒血细胞凝集素多肽，该对象对于所述多肽来说是原初的，其中所述第三种流感病毒血细胞凝集素多肽是来自亚型H2、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16和/或H17的流感病毒，和其中第一次、第二次和第三次给药的所述流感病毒血细胞凝集素多肽是来自不同的流感病毒亚型。51.预防对象的流感病毒疾病或感染的方法，包括给予所述对象流感病毒，其中所述流感病毒包含血细胞凝集素多肽，该对象对于所述多肽来说是原初的。52.权利要求51的方法，其中所述流感病毒血细胞凝集素多肽是来自亚型H2、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16和/或H17的流感病毒。53.权利要求52的方法，包括给予所述对象第二种流感病毒，其中所述第二种流感病毒包含血细胞凝集素多肽，该对象对于所述多肽来说是原初的；其中所述第二种流感病毒的所述血细胞凝集素多肽是来自亚型H2、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16和/或H17的流感病毒；和其中第一次和第二次给药的所述流感病毒血细胞凝集素多肽是来自不同的流感病毒亚型。54.权利要求53的方法，包括给予所述对象第三种流感病毒，其中所述第三种流感病毒包含血细胞凝集素多肽，该对象对于所述多肽来说是原初的；其中所述第三种流感病毒的血细胞凝集素多肽是来自亚型H2、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16和/或H17的流感病毒；和其中第一次、第二次和第三次给药的所述流感病毒血细胞凝集素多肽是来自不同的流感病毒亚型。55.嵌合的流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽，包含HA干结构域和HA球状头结构域，其中所述HA球状头结构域对所述HA干结构域是异源的，其中所述HA干结构域包含至少一个修饰的糖基化位点，其中所述修饰的糖基化位点包含具有氨基酸序列Asn-Xaa-Ser/Thr/Cys的天然存在的糖基化位点的修饰，和其中所述修饰破坏聚糖附着到所述修饰的糖基化位点的能力，和其中Xaa是任意氨基酸。56.权利要求55的嵌合的流感病毒HA多肽，其中所述修饰包含所述天然存在的糖基化位点中的一个或多个氨基酸取代。57.权利要求55的嵌合的流感病毒HA多肽，其中根据H3编号系统，所述修...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿道夫·加西亚塞斯特，彼得·帕雷斯，佛罗莱恩·克拉默，纳塔利·皮卡，德克·艾根克，拉法尔·A·麦迪纳席尔瓦，海容，
申请(专利权)人：西奈山医学院，
类型：发明
国别省市：美国,US