The present invention discloses a preparation method of a green fluorescent cyanobacterial photosensitive pigment fluorescent marker, which includes second GAF domains of the cyanobacteria photosensitive pigment protein all3691 and streptavidin. The fusion protein sequence of the invention is easy to be expressed steadily in microbes, avoiding the difficulty in obtaining high purity natural algin and cyanobacteria, the preparation cost is high, the use of chemical modifier, and the instability of the polymerization form of natural algal protein. The expression method of the invention does not require the participation of the algal protein cleavage enzyme, reduces the number of transformed genes, and improves the stability and screening efficiency of the strain. At the same time, the yield of fusion protein was greatly improved by optimizing fermentation medium and fermentation conditions.
【技术实现步骤摘要】
一种绿色荧光的蓝细菌光敏色素荧光标记物的制备方法
本专利技术涉及融合蛋白表达领域,特别涉及一种光敏色素荧光标记物的制备方法。
技术介绍
荧光探针(或荧光标记物)是荧光免疫检测技术的重要基础原料,主要是通过化学修饰法,将荧光底物同生物素-链霉亲和素系统结合得到,可进一步放大荧光信号,提高免疫检测的灵敏度。天然藻胆蛋白是最常见的荧光底物之一,其天然结构一般为六聚体,亚基由脱辅基蛋白和藻胆色素,通过裂合酶催化结合而成。藻胆色素则由血红素经过血红素氧化酶(HO1)和各种胆绿素还原酶催化形成,常见的藻胆色素有藻红胆素(PEB),藻尿胆素(PUB),藻蓝胆素(PCB)和藻紫胆素(PVB)。通过结合不同的藻胆色素,藻胆蛋白吸收400nm~700nm范围内不同波段的光后,可发出不同的荧光。传统的藻胆蛋白荧光探针制备流程,首先是获取高纯度天然藻胆蛋白,然后通过化学修饰法,与生物素-链霉亲和素系统结合,进一步纯化后再用于免疫检测。但是高纯度的天然藻胆蛋白获取困难,制备成本高,同时结构不稳定,聚合形态多变。这使得藻胆蛋白荧光探针的成本居高不下。通过微生物表达融合蛋白是一种成本较低的蛋白制备方法。然而融合蛋白的表达往往受到融合基因的设计和发酵工艺的限制,并不能稳定的表达,难以得到质量稳定的合格产品。如何选择合适的蛋白片断进行融合,使其可以更为稳定地发酵生产,是有待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足,提供一种易于表达的融合蛋白序列及其表达方法。本专利技术所采取的技术方案是:一种融合蛋白,其包括蓝细菌光敏色素蛋白all3691的第2个GAF结构域和链霉 ...
【技术保护点】
一种融合蛋白,其包括蓝细菌光敏色素蛋白all3691的第2个GAF结构域和链霉亲和素。
【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白,其包括蓝细菌光敏色素蛋白all3691的第2个GAF结构域和链霉亲和素。2.根据权利要求1所述的融合蛋白,其特征在于:融合蛋白中还添加有亲和标记。3.根据权利要求1所述的融合蛋白,其特征在于:融合蛋白的序列为:MGSSHHHHHHSQDPEAGITGTWYNQLGSTFIVTAGADGALTGTYESAVGNAESRYVLTGRYDSAPATDGSGTALGWTVAWKNNYRNAHSATTWSGQYVGGAEARINTQWLLTSGTTEANAWKSTLVGHDTFTKVKPSAASGSGTDDDDKAMADGILFNVVNQMRQSLDLNAIFCVVTQNIRRILDVDRVGIYQFHLDVNYEYGEFVAEDVSPAFPSALAVKVQDHCFGENYANLYKQGRICAITDVQSSEILDCHRQILAQFHVRASLVVPIMQEEELWGLLCIHQCDRPRQWEPLEMQFAQQVGAQMGIALKQTDLLIQTQK。4.表达权利要求1或2所述融合蛋白的核苷酸序列。5.根据权利要求3所述的核苷酸序列,其特征在于:核苷酸序列根据宿主菌进行密码子优化。6....
【专利技术属性】
技术研发人员:王小明,宋建勋,夏坤,付卫雷,佟顺刚,
申请(专利权)人:广州天宝颂原生物科技开发有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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