The invention relates to a single chain DNA amplification method based on streptavidin coated nanoparticles. The existing PCR technology is suitable for the amplification and enrichment of double stranded DNA, while the amplification of single stranded DNA has the defects of mixed product double stranded DNA and cumbersome steps. In the present invention, the PCR amplification primers labeled with biotin were immobilized on the surface of the metal nanoparticles by the nanoparticle coated with streptomycin, and then the single strand DNA amplification reaction was carried out. The invention provides an irreversible combination of nanomparticles wrapped by biotin and streptomycin avidin, thus realizing single strand DNA amplification, which can selectively obtain the positive chain or reverse chain DNA of the sample DNA, which is simple, efficient and fast, obviously improving the amplification efficiency of single strand DNA.
【技术实现步骤摘要】
基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法
本专利技术涉及一种单链DNA的扩增方法,具体涉及一种基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法。
技术介绍
DNA的半保留复制是生物遗传和进化的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。而聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)技术则是在体外通过温度控制实现特定基因的体外复制的一种生物学技术。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍,这种迅速获取大量单一核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义,极大地推动了生命科学的研究进展。作为生命科学研究中广泛使用的一种选择性体外扩增DNA片段的方法,PCR反应原理与细胞内DNA的半保留复制相似,但PCR的反应体系要简单的多,主要包括DNA靶序列,与DNA靶序列单链3’末端互补的合成引物,四种dNTP、耐热DNA聚合酶以及合适的缓冲液体系。其基本过程是以拟扩增的DNA分子为模板,首先高温变性,将混合物加热到94℃维持15到30秒,使模板DNA双链解旋成两条单链,然后逐渐降温退火,温度降到55℃,使引物与模板DNA单链的互补序列配对结合,最后在引物、DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成。随着PCR技术在生命科学领域的广泛应用,在传统PCR技术的基础上,根据人民的需要及各个领域的应用要求,有衍生出很多不同种类的PCR技术:1、常规RT-PCR由于目前常利用cDNA来研究基因的功能 ...
【技术保护点】
基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法,其特征在于:由以下步骤实现:利用链霉亲和素包被的纳米微粒将生物素标记的PCR扩增引物固定在金属纳米微粒表面,之后进行单链DNA扩增反应。
【技术特征摘要】
1.基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法,其特征在于:由以下步骤实现:利用链霉亲和素包被的纳米微粒将生物素标记的PCR扩增引物固定在金属纳米微粒表面,之后进行单链DNA扩增反应。2.根据权利要求1所述的基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法,其特征在于:纳米微粒为纳米磁珠或不具有磁性的葡聚糖或琼脂糖微粒,直径不大于100nm。3.根据权利要求1所述的基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法,其特征在于:单链DNA扩增反应后,通过磁力吸附、离心或者过滤的方式将PCR扩增后吸附有单链DNA的纳米微粒分离出来。4.根据权利要求1所述的基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法,其特征在于:对PCR反应中的一条引物做5’端生物素化标记。5.根据权利要求1所述的基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法,其特征在于:将链霉亲和素包被的纳米微粒与生物素标记的引物在室温或者37℃孵育后加入PCR反应体系;或在PCR反...
【专利技术属性】
技术研发人员:宦怡,任静,黄旭方,文娣娣,仲津漫,张振华,赵娓娓,马婉玲,
申请(专利权)人:中国人民解放军第四军医大学,
类型:发明
国别省市:陕西,61
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