一种干细胞培养基制造技术

本发明专利技术涉及一种干细胞培养基，包括基础培养基，细胞生长因子、谷氨酰胺、含铁的食品添加剂。本发明专利技术基能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，干细胞的扩增速度较常规培养基提高3‑5倍，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，具有很高的科研和医学应用价值。

A stem cell culture medium

The invention relates to a stem cell culture medium, including a basal medium, a cell growth factor, a glutamine, and a food additive containing iron. The BenQ can rapidly amplify the stem cells without affecting the potential of stem cells at the same time. The amplification rate of stem cells is 5 times higher than that of the conventional medium, which is 3 times higher than that of the conventional medium. Moreover, the stem cells can be used for the cultivation of stem cells of various tissues. The stem cells have excellent applicability, the cultivated stem cells have a strong differentiation ability and can be differentiated into various functional cells. The value of scientific research and medical application.

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞培养基
本专利技术在于干细胞培养基及方法领域。
技术介绍
诸多研究表明干细胞不仅可以自我更新，在条件合适的情况下能分化成其他功能细胞，因此干细胞有望成为治疗人类疑难疾病的有效手段。然而，干细胞在正常成体组织中含量甚微，在体外如何快速扩增与培养干细胞培养是研究干细胞的作用机制及探索其在治疗人类疾病治疗方法的重要技术。干细胞尽量含量甚微，但广泛分布于哺乳动物的各个组织器官，这些组织或器官包括但不局限于骨髓、脐带、脂肪组织、脑组织、视网膜、心脏、肝脏、肺以及皮肤等。目前，在干细胞的常规培养体系中均加入了一定比例的动物血清，比较常用的是胎牛血清或新生小牛血清。血清是由很多大小不同生物分子组成的极为复杂的混合物，它对细胞在体外培养时的主要作用是提供生长因子、激素、结合蛋白，并提供保护作用。
技术实现思路
本专利技术提供的干细胞培养基，该培养基能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，干细胞的扩增速度较常规培养基提高3-5倍，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，具有很高的科研和医学应用价值。本专利技术的技术方案如下：一种干细胞培养基，其中，所述培养基组分包括基础培养基，细胞因子、谷氨酰胺、含铁的食品添加剂；所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述的细胞因子为甲状腺素、肾上腺素和胰岛素中一种或者多种；所述含铁的食品添加剂包括转铁蛋白、柠檬酸铁和葡糖酸铁中一种或多种。在本专利技术提供的干细胞培养基中，所述干细胞培养基中，细胞因子的浓度为1-15μg/ml、谷氨酰胺的浓度为1-5mmol/l、含铁的食品添加剂的浓度为20-200ng/ml。在本专利技术提供的干细胞培养基中，还包括HEPES、青霉素和链霉素。在本专利技术提供的干细胞培养基中，所述HEPES的浓度为2-20mmol/L，青霉素的浓度为1-10mg/L，链霉素的浓度为1-10mg/L。附图说明图1为本专利技术的培养基对人尿源干细胞增殖的加速作用的实验结果。具体实施方式实施例1：对干细胞增殖的加速作用的实验1.受试培养基：常规培养基组份：DMEM/F12基本培养基，10％胎牛血清(FBS)；本专利技术的培养基，包括：DMEM/F12基础培养基、甲状腺素50ng/ml、肾上腺素500ng/ml、胰岛素25ug/ml、转铁蛋白20ug/ml、谷氨酰胺5mM/L、HEPES25mM/L、青霉素1mg/L和链霉素1mg/L。2.培养干细胞来源：来源于人尿的尿源干细胞3.体外细胞培养实验：在无菌条件下，取健康志愿者清洁中段尿液200-250ml，为防止感染，加入含有青霉素100U/ml加链霉素0.1mg/ml的双抗5ml，并立即分离提取。将清洁尿液分装至50ml离心管中，400g离心10min，弃上清。经PBS以400g离心10min洗涤两次。取100μL细胞重悬液并应用台盼蓝检测细胞活性并计数，调整细胞密度，接种至含有无血清培养基的六孔板中，置于37℃C下5％CO2饱和湿度的孵箱中培养。14-21天后，可以陆续观察到克隆逐渐向四周延伸，克隆逐渐变大。待细胞达到80％左右的融合度后，胰蛋白酶消化离心，重悬后得到尿液间充质干细胞。干细胞接种密度为4000个/ml，接种于12孔板中放入培养箱培养(37℃，5％CO2)。每隔24小时里利用血球计数板测一次细胞数量，结果发现，经本专利技术的培养基培养的尿源干细胞比常规培养基培养的细胞便显出更快的扩增速度(数据为三次独立实验的平均值)。实施例2：对增殖后的尿源干细胞体外分化为成软骨细胞的实验1.受试培养基：本专利技术的培养基。2.培养细胞来源：人尿来源的尿源干细胞3.尿液间充质干细胞向软骨细胞的分化：(1)取实施案例1所获得的尿液间充质干细胞第四代培养(2)向尿液间充质干细胞中加入含有转化生长因子β110ng/ml、胰岛素样生长因子100ng/ml和地塞米松0.1μmol/L的诱导培养基(3)诱导培养28天后，阿尔新蓝染色细胞细胞外基质，免疫组化检测II型胶原表达情况。结果显示，诱导培养后的尿液间充质干细胞大部分阿尔新蓝着色，II型胶原表达增强，表明尿液间充质干细胞可以向软骨细胞分化。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种干细胞培养基，包括基础培养基，其特征在于：还包括细胞生长因子、谷氨酰胺、含铁的食品添加剂。

【技术特征摘要】
1.一种干细胞培养基，包括基础培养基，其特征在于：还包括细胞生长因子、谷氨酰胺、含铁的食品添加剂。2.根据权利要求1所述的干细胞培养基，其特征在于，所述细胞生长因子包括甲状腺素、肾上腺素、胰岛素中的一种或者多种。3.根据权利要求1所述的干细胞培养基，其特征在于，所述含铁的食品添加剂包括转铁蛋白、柠檬酸铁和...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文杰，陈巧云，
申请(专利权)人：江阴瑞康健生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32