The invention provides a three-dimensional liver model based on qualitative filter paper and its application. The model is based on the normal physiological characteristics of the liver, using fibroblasts to direct the transfer of liver cell hiHep directly, and improve the traditional primary hepatocyte or liver cell line single layer culture model, and the qualitative filter paper. As a scaffold material for cell culture, the filter paper is placed in the 24 hole plate to suspend the filter paper in the culture medium, which can carry on the full material transfer and exchange the nutrients, thus making the cells grow on the filter paper. The liver model based on filter paper, namely, co culture hiHep cells and umbilical vein endothelial cells HUVEC on qualitative filter paper, realizes a three dimensional liver tissue that can be cultured for long-term and maintains liver specific function, and can be used to test and evaluate a series of hepatotoxic drugs in vitro. The main effect is in vitro. To study the long-term toxicity and liver damage of drug molecules on liver tissue.
【技术实现步骤摘要】
一种基于定性滤纸的三维肝模型的建立及其应用
本专利技术属组织工程及药物研究领域,具体涉及一种基于定性滤纸的三维肝模型的建立及其应用。
技术介绍
人体众多器官中,肝脏是人体内最大的腺体,有非常复杂的微结构,并拥有物质代谢、血液解毒和血浆蛋白分泌等多种功能,尤其是药物和毒素代谢功能,对维持机体的稳定和代谢起到重要的作用。然而目前各种肝脏疾病严重威胁着人类健康,肝脏疾病的研究以及药物筛选、毒性检测方面大都还是依赖于动物实验和临床研究。由于物种之间的差异性,动物实验的结果难以完全转化到临床中,药物开发受到严重制约。而且在肝组织工程中,治疗肝衰竭的传统的肝脏移植方法一直面临着器官供应短缺、免疫排斥以及伦理争议等诸多问题。因此体外构建有功能性的肝组织或肝模型在研究药物代谢、疾病模型构建、生物人工肝反应器、细胞移植治疗等方面有着非常重要的研究和临床应用价值。肝细胞在体内有很强的再生功能,然而一旦剥离出肝脏或以传统二维培养模式进行体外培养,就会很快失去增殖能力,丧失表型和正常的肝功能。因此在体外构建功能性的肝组织过程中,对体内肝细胞复杂微环境的模拟,实现体外肝细胞的三维培养,进而有效维持肝细胞的分化表型和改善肝细胞功能,就尤为重要。目前,体外维持肝细胞功能的方法有多种,包括利用非粘附性表面或带有凹形微孔结构的芯片形成肝细胞球,中空纤维以及液滴包埋技术形成肝组织,或者用图案化的细胞外基质和水凝胶支架材料构建肝组织。然而传统的肝模型或肝反应器拥有许多的局限性,如肝细胞种类和来源有限,生物材料的性能及安全性差,体外细胞生长微环境难以长期维持,培养体系复杂难以扩大等。滤纸作为一种 ...
【技术保护点】
一种基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:将滤纸置于细胞培养24孔板中,在其上包被一层细胞外基质,然后在其上面先后种上一种内皮细胞和肝细胞,两种细胞共培养一定时间后,得到具有肝特异性功能的三维肝组织,并能进行体外长期培养。
【技术特征摘要】
1.一种基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:将滤纸置于细胞培养24孔板中,在其上包被一层细胞外基质,然后在其上面先后种上一种内皮细胞和肝细胞,两种细胞共培养一定时间后,得到具有肝特异性功能的三维肝组织,并能进行体外长期培养。2.按照权利要求1所述基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:所述的肝细胞包括人原代肝细胞、肝细胞系或肝癌细胞系所有具有肝细胞结构和特异性功能的肝细胞。3.按照权利要求2所述基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:所述肝细胞为一种由成纤维细胞直接诱导转分化而来的肝细胞hiHep,此细胞系含有稳定转染的大T抗原的EGFP基因,可自发绿色荧光。4.按照权利要求1所述基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:所述内皮细胞包括肝窦内皮细胞、脐静脉内皮细胞、微血管内皮细胞所有具有血管内皮特征和功能的细胞。5.按照权利要求4所述基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:所述内皮细胞为脐静脉内皮细胞HUVEC。6.按照权利要求1所述基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:所述的细胞外基质包括胶原、基质胶在内的所有天然类及合成类的细胞外基质。7.按照权利要求6所述基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:所述细胞外基质为I型鼠尾胶原。8.按照权利要求1所述基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:所述的内皮细胞HUVEC和肝细胞hiHep共培养时的接种比例为1:1~2。9.按照权利要求1所述基于定性滤纸的三维肝模型的建立,其特征在于:所述共培养中所用的培养基为hiHep细胞用培养基,基础成分为DMEM/F12(1:1),再加入占总体...
【专利技术属性】
技术研发人员:秦建华,王亚清,王丽,
申请(专利权)人:中国科学院大连化学物理研究所,
类型:发明
国别省市:辽宁,21
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