地鳖酶解提取物在制备预防和/或治疗四氯化碳肝损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及地鳖酶解提取物在制备预防和/或治疗四氯化碳肝损伤药物中的应用。所述地鳖酶解提取物是通过包括下述步骤的方法制备得到的：将地鳖粉溶于水中，加入木瓜蛋白酶，调节体系的pH值至6.0，酶解反应，离心，收集上清液，即可。地鳖酶解提取物能显著减低CCl4对小鼠肝细胞的损伤，增强急性肝损伤小鼠的抗氧化能力，可能成为一种非常优秀的预防和/或治疗四氯化碳肝损伤的候选药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，具体涉及地鳖酶解提取物在制备预防和/或治疗四氯化碳肝损伤药物中的应用。
技术介绍
肝脏是机体最重要的脏器之一，承担着物质代谢和生物转化的功能，易受到体内外各种致病因素和刺激因子的侵袭，引起肝脏的损伤与炎症反应。肝损伤是各种有害因素如病毒、细菌、药物、酒精、缺血、肝脏部分切除等，直接或间接损伤肝脏，造成肝细胞的炎症、坏死、甚至凋亡和纤维化等一系列病变，是各种肝病共同的病理基础。因此，研究具有护肝保肝功能的保健食品或药物，对保护人体健康是非常必要的。四氯化碳有轻度麻醉作用，对肝、肾有严重损害作用，其可在体内转变为自由基，扰乱肝细胞膜上类脂质的代谢，引起肝细胞坏死，是常用的致肝损伤化合物，利用其构建的肝损伤动物模型是目前研究化学性肝损伤和氧化应激介导的肝损伤的首选实验动物模型之一，也是开发保肝护肝类药物的常用模型之一。地鳖是我国传统活血化瘀类中药，现代医学研究及临床试验证明，地鳖具有抑制肿瘤、调节血脂、抗衰老、抗突变、耐缺氧等功效，其含生物碱、蛋白质、氨基酸、酚类、糖类、甾体、油质等多种营养成分，有着极高的药用及保健价值。目前有关地鳖生物学功能的化学(组分)基础和生物学机理尚未完全阐明。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供地鳖酶解提取物的一种药物新用途。本专利技术所提供的地鳖酶解提取物的新用途是其在制备预防和/或治疗四氯化碳肝损伤药物中的应用。所述地鳖酶解提取物是通过包括下述步骤的方法制备得到的：将地鳖粉溶于水中，加入木瓜蛋白酶，调节体系的pH值至6.0-7.0，酶解反应，离心，收集上清液，即可。上述方法中，地鳖粉与水的料水比为1g:15mL-1g:25mL，具体可为1g:15mL。所述水具体可为蒸馏水。地鳖粉与木瓜蛋白酶的配比为1g:500U-1g:700U，具体可为1g:500U。所述酶解反应的反应温度为55℃，时间为3-5h，具体可以4h。所述离心的条件为：10000r/min下离心15min。上述方法在对酶解体系进行离心之前还包括将所述酶解体系置于100℃沸水中10min以终止酶解反应的操作。包含上述地鳖酶解提取物的药物制剂也属于本专利技术的保护范围。上述药物制剂可制成各种形式的口服制剂，包括：胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、滴丸剂、缓控释制剂、口服液、合剂和糖浆剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。本专利技术采用小鼠CCl4致肝损伤模型进行动物实验，通过分光光度法检测急性肝损伤小鼠血清中AST、ALT活力，与模型组比较，地鳖酶解提取物组血清中ALT、AST活力均极显著降低，地鳖酶解提取物组小鼠肝组织中的CAT活力极显著升高，中高剂量组SOD、GSH-Px活力显著升高，而低高剂量组MDA的含量明显降低，另外，地鳖酶解提取物组小鼠肝组织中TNF-α、IL-6及iNOS含量及基因相对表达量均显著降低。综上说明，地鳖酶解提取物能显著减低CCl4对小鼠肝细胞的损伤，增强急性肝损伤小鼠的抗氧化能力，可能成为一种非常优秀的预防和/或治疗四氯化碳肝损伤的候选药物。附图说明图1示出了地鳖酶解提取物对急性肝损伤小鼠肝组织病理形态学的影响。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术进行说明，但本专利技术并不局限于此。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。1材料与方法1.1试验材料四氯化碳(CCl4)购自北京化工厂，水飞蓟素胶囊购自德国马博士大药厂，丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、总蛋白定量试剂盒购自南京建成生物科技有限公司，TUREscript1stStrandcDNASynthesisKit购自北京艾德莱生物科技有限公司，PremixExTaqTM(TliRNaseHPlus)(RR420A)购自日本TaKaRa公司，所用引物由华大科技公司合成，地鳖酶解提取物由本实验室制备。健康昆明小鼠，雄性，体重20-22g，购于中国军事医学科学院实验动物中心【SCXK-(军)2012-0004】。1.2方法1.2.1地鳖酶解物的提取取地鳖粉按料水比为1g:15mL的比例溶于蒸馏水，根据1g:500U的料酶比(W/U)加入木瓜蛋白酶，调节pH为6.0，将上述溶液置于55℃水浴锅内水浴4h后再置于100℃沸水中10min以终止酶解反应，然后10000r/min离心15min，吸取上清即得到地鳖酶解液。1.2.2试验分组取60只健康小鼠随机分为Ⅰ组(溶剂组)、Ⅱ组(模型组)、Ⅲ组(水飞蓟素100mg/kg)、Ⅳ～Ⅵ组(地鳖酶解提取物50、100、200mg/kg)，每组10只。溶剂组和模型组每天灌服生理盐水，阳性对照组灌服水飞蓟素，地鳖酶解提取物组灌服不同剂量酶解物，每天一次，连续7d，末次给药2h后，除溶剂组外(橄榄油)，模型组及各给药组均腹腔注射0.1％CCl4橄榄油溶液10ml/kg，禁食不禁水，18h后眼眶采血，离心制备血清，分离肝组织，取小鼠肝左叶作HE染色进行组织学检查，其余部分制成10％组织匀浆备用。1.2.3肝功能指标检测根据ALT、AST试剂盒说明，检测血清中ALT、AST含量。1.2.4抗氧化能力的测定根据SOD、CAT、GSH-Px和MDA试剂盒说明，检测肝组织中SOD、CAT、GSH-Px活力及MDA含量。1.2.5肝中TNF-α、IL-6和iNOS含量及mRNA相对表达量测定根据TNF-α、IL-6和iNOS试剂盒说明，检测肝中TNF-α、IL-6含量及iNOS活性。Trizol法提取肝组织中总RNA，将RNA用Oligo(dT)18Primer反转录合成cDNA第一链，以cDNA为模板进行PCR扩增。最后采用与荧光定量PCR仪配套StepOneSoftwarev2.1分析PCR数据。1.2.6肝组织切片观察将小鼠肝组织用4℃生理盐水冲洗后，滤纸拭干，浸泡于体积分数4％多聚甲醛溶液中固定，石蜡包埋，常规切片，苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察肝组织切片的病理变化。1.3统计分析试验数据用平均值±标准差表示，采用GraphpadPrism6.0软件进行单因素方差分析(one-wayANOVA)，差异显著时进行LSD各组间多重比较，P<0.05为差异显著。2结果2.1地鳖酶解提取物对急性肝损伤小鼠肝功能的影响转氨酶是反映肝功能的一项重要指标，通过分光光度法检测急性肝损伤小鼠血清中AST、ALT活力，结果如表1所示，与溶剂组比较，模型组小鼠血清中的ALT、AST含量显著升高(P<0.01)，说明CCl4致小鼠肝损伤造模成功。与模型组比较，阳性对照组和地鳖酶解提取物组血清中ALT、AST活力均极显著降低(P<0.01)。表1地鳖酶解提取物对急性肝损伤小鼠肝功能的影响注：与溶剂组相比，**P<0.01；与模型组相比，++P<0.01。2.2地鳖酶解提取物对急性肝损伤小鼠抗氧化能力的影响由表2可知，与溶剂组对比，肝损伤模型组小鼠肝组织中的SOD、CAT、GSH-Px活力均显著降低(P<0.01或P<0.05)，而M本文档来自技高网...

【技术保护点】
地鳖酶解提取物在制备预防四氯化碳肝损伤药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.地鳖酶解提取物在制备预防四氯化碳肝损伤药物中的应用。2.地鳖酶解提取物在制备治疗四氯化碳肝损伤药物中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述地鳖酶解提取物是通过包括下述步骤的方法制备得到的：将地鳖粉溶于水中，加入木瓜蛋白酶，调节体系的pH值至6.0-7.0，酶解反应，离心，收集上清液，即可。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述方法中，地鳖粉与水的料水比为1g:15mL-1g:25mL；地...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈红，谢梦蕊，邱思奇，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11