ＡＦＰ基因修饰树突状细胞瘤苗对原发性肝癌发生发展的免疫保护作用制造技术

本发明专利技术涉及构建了ＡＦＰ分泌型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠肝癌动物模型和制备ＡＦＰ基因修饰的树突状细胞（ＤＣｓ）瘤苗及其抗肿瘤作用。包括以下步骤：Ａ、建立ＡＦＰ分泌型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠原发性肝癌模型；Ｂ、从小鼠原发性肝癌细胞中克隆甲胎蛋白（ｍＡＦＰ）基因并测序鉴定；Ｃ、构建ｐＡｄＢＭ５－ｍＡＦＰ重组腺病毒载体、筛选并克隆获得高滴度重组腺病毒（ＡｄＢＭ５－ｍＡＦＰ）；Ｄ、树突状细胞的诱导扩增及表型分析；Ｅ、重组腺病毒转导ＤＣ（ＡｄＢＭ５－ｍＡＦＰ－ＤＣ），从而获得表达ＡＦＰ基因的树突状细胞瘤苗。本发明专利技术的ＡＦＰ基因修饰的树突状细胞瘤苗对肝癌的发生有一定的免疫保护作用，也可用于肝癌的治疗。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
ＡＦＰ基因修饰树突状细胞瘤苗，特征在于采用以下方法制备：Ａ、采用二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）大剂量一次腹腔注射Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠１００ｍｇ／ｋｇ（生理盐水配制）。３天后开始灌胃四氯化碳（ＣＣｌ↓［４］）和橄榄油（配制体积比２０∶８０），０．０５ｍｌ／１０ｇ，２次／周。第３周ＤＥＮ再灌胃１次，５０ｍｇ／ｋｇ，同时开始给予含有９％乙醇饮用水，第４周开始ＣＣｌ↓［４］加大剂量到０．０８ｍｌ／１０ｇ，每周一次，连续２０周，建立Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠肝癌模型。Ｂ、通过ＲＴ－ＰＣＲ法扩增的小鼠ＡＦＰ基因编码区全长通过ＢｇｌＩＩ和ＰｍｅＩ定向构建到ｐＡｄＢＭ５穿梭质粒中。Ｃ、重组质粒与腺病毒骨架在ＨＥＫ２９３细胞中重组，扩增获得高滴度的重组腺病毒（ＡｄＢＭ５－ＡＦＰ），通过报告基因绿色荧光蛋白基因（ＧＦＰ）进行阳性克隆的筛选。Ｄ、用小鼠ＩＬ－４和ＧＭ－ＣＳＦ从小鼠骨髓中扩增树突状细胞（ＤＣ）。Ｅ、将重组腺病毒转染ＤＣ，获得ＡＦＰ基因修饰树突状细胞瘤苗。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢裕安，匡志鹏，罗小玲，
申请(专利权)人：广西壮族自治区肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：45[中国|广西]