艰难梭状芽孢杆菌毒素的人源抗体制造技术

本发明专利技术提供了与艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)的毒素A或毒素B结合，或者与毒素A和毒素B均结合的全人源抗体，包括所述抗体的组合物及其使用方法。本发明专利技术的抗体用于中和来自C.difficile的毒素，因此提供了治疗与C.difficile感染相关的疾病和症状的方法，包括治疗由C.difficile导致的腹泻或假膜性结肠炎。所述抗体还可以阻止由C.difficile的存在导致的原发疾病的严重程度和/或持续时间，或者可以阻止所述疾病反复或复发的次数、持续时间和/或严重程度。本发明专利技术的抗体还可以用于诊断C.difficile感染。

【技术实现步骤摘要】
艰难梭状芽孢杆菌毒素的人源抗体本申请是申请号为201380012035.0、申请日为2013年3月1日、专利技术名称为“艰难梭状芽孢杆菌毒素的人源抗体”的中国专利技术专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2013/028630的国家阶段申请，该国际申请要求申请日分别为2012年3月2日、2012年3月8日和2012年10月23日，申请号分别为61/605,914、61/608,255和61/717,404的美国临时申请的优先权。专利
本申请涉及与艰难梭状芽孢杆菌(Clostridiumdifficile)的毒素A和/或毒素B特异性结合的人源抗体和人源抗体的抗原结合片段，含有这些抗体的组合物以及使用这些抗体的治疗方法。相关技术声明艰难梭状芽孢杆菌(C.difficile)是一种革兰氏阳性、厌氧、产芽孢细菌，其是人类医院获得性胃肠病的主要病因，导致的症状范围从轻微到重度的腹泻和结肠炎。据信使用广谱抗生素如氨苄西林、阿莫西林、头孢菌素、氟喹诺酮和克林霉素治疗可能导致正常肠道菌群的破坏，然后使得C.difficile在肠道中定殖(Kelly和Lamont,(1998),Ann.Rev.Med.49:375-90)。C.difficile感染的治疗可能涉及停止和改进广谱抗生素的使用并且需要开始使用特定抗梭状芽孢杆菌抗生素的治疗，例如万古霉素、甲硝唑或非达霉素(fidaxomicin)。在C.difficile感染患者中观察到的腹泻和炎症据信是由于该细菌产生的两种毒素：肠毒素(毒素A)和细胞毒素(毒素B)导致的。C.difficile毒素A和B是抑制GTPases的Rho家族成员的高分子量葡萄糖基转移酶。毒素A的分子量为308kDa，毒素B的分子量为270kDa。毒素A和毒素B均通过使苏氨酸残基糖基化使小GTPases如Rho、Rac和Cdc42失活。这些GTPases的抑制引起信号转导级联关闭，导致：细胞骨架解聚、某些应激活化蛋白激酶的基因转录、磷脂酰肌醇二磷酸合成下降和甚至可能导致细胞极性的丧失。细胞骨架结构的丧失导致细胞变圆，并且这种细胞骨架结构的丧失可能是导致宿主对C.difficile反应的原因。在细胞圆形化检测中毒素B的细胞毒性至少是毒素A的1,000倍。C.difficile的毒素A和B的氨基酸具有63％的同源性并且其具有相似的三维结构(Davies,AH,(2011),Biochem.J.,436:517-526)。位于两种毒素C-末端的三分之一的序列由称为梭状芽孢杆菌重复寡肽(CROP)的序列组成，其具有高度的抗原性。位于毒素A和BN末端的其余三分之二的序列彼此间序列同源性较低的相似性，但是各蛋白的这一部分具有葡糖基转移酶活性。在动物模型中观察到的结果支持了C.difficile感染后毒素A和/或毒素B在引起腹泻和炎症中发挥作用。例如，口服给予所述毒素模拟了该疾病(Kelly和Lamont,(1998),Ann.Rev.Med.49:375-90)。缺乏毒素A和B的突变株具有降低的或改变的毒力(LyrasD,O’ConnorJR,HowarthPK等，Nature458(7242),1176–1179(2009)；KuehneSA,CartmanST,HeapJT,KellyML,CockayneA,MintonNP,Nature15,467(7316),711–713(2010).)。而且，对仓鼠施用针对该毒素的多克隆抗体已显示出对该疾病的保护作用(Gianasca等，(1999),Infect.Immun.66(2):527-38)。在临床上，研究显示抗毒素A或抗毒素B抗体的存在与针对C.difficile相关的腹泻和疾病反复的保护作用之间具有相关性(Warny,M.等，(1994),Inf.Immun.62(2):384-389；Kyne,L.等，(2001),Lancet357:189-193；Leav,B.A.,(2010),Vaccine28(4):965-969)。抗毒素抗体的发展与无症状携带者之间具有关联(Kyne,L.等，(2000),NEJM342(6),390-397)。而且，使用C.difficile抗毒素A和抗毒素B抗体的组合，并联合甲硝唑或万古霉素的临床试验结果降低了C.difficile反复感染的比率(Lowy,I.等，(2010),NEJM362(3):197-205)。C.difficile毒素A的单克隆抗体已由Wilkins等在美国专利4,879,218中进行了描述。此外，Rothman等描述了与C.difficile的毒素A和B交叉反应的鼠源性单克隆抗体。此外，Coughlin等，描述了对C.difficile的毒素B特异的单克隆抗体，其与毒素A不发生交叉反应。已对C.difficile毒素的其他抗体进行了描述(参见例如US7,151,159；US7,625,559；US8,236,311；US8,257,709；US公开号2009/0087478；US2010/0233182；US2010/0233181；US2012/0288508；US2012/012160；US2011/0020356；US2012/0121607；EP1766093B1；EP1024826B1；EP1568378A1；EP2305303A2；EP2305293A2；EP2405940A1；EP2261253A2；WO2006/121422；WO2011/130650；WO2010/094970；WO2009/108652；WO2011/063346和WO2005/058353)。专利技术简述本专利技术提供了与艰难梭状芽孢杆菌(C.difficile)产生的毒素A或毒素B特异性结合，或者与C.difficile的毒素A和毒素B均结合的全人源单克隆抗体(mAb)及其抗原结合片段(即与毒素A和毒素B均发生交叉反应的人源单克隆抗体)。这种抗体可以用于中和与毒素A或毒素B或者这两者相关的毒性，例如可以用于减轻原发性与C.difficile相关的状况或疾病的严重程度，或者减少疾病反复的次数、持续时间或严重程度，或者改善与同C.difficile相关的状况或疾病相关的至少一种症状。这种抗体可以单独使用或者与另一种用于治疗与C.difficile相关的状况或疾病的药剂联用。在某些实施方式中，对毒素A、毒素B或者这两者具有特异性的抗体与另一种治疗剂联合给予以减轻原发性与C.difficile相关的状况或疾病的严重程度，或者减少疾病反复的次数、持续时间或严重程度，或者改善与同C.difficile相关的状况或疾病相关的至少一种症状。在某些实施方式中，所述抗体可以用于预防性的独立疗法以保护存在发展成与C.difficile相关的状况或疾病风险的患者。例如，某些患者群体可能存在发展成与C.difficile相关的状况或疾病的风险，包括老年患者，或存在长期和/或伴随的潜在医疗状况的患者，这种状况可能导致其对C.difficile易感。其他存在风险的患者群体包括长期住院的患者和使用可能破坏正常肠道菌群的广谱抗生素的患者从而可能导致其对C.difficile易感。最近的数据表明使用质子泵抑制剂(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性地与艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)毒素B结合，并包含：在选自SEQ ID NO：178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338和354的HCVR氨基酸序列中的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和在选自SEQ ID NO：186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346和362的LCVR氨基酸序列中的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

【技术特征摘要】
2012.03.02 US 61/605,914;2012.03.08 US 61/608,255;1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性地与艰难梭状芽孢杆菌(Clostridiumdifficile)毒素B结合，并包含：在选自SEQIDNO：178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338和354的HCVR氨基酸序列中的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和在选自SEQIDNO：186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346和362的LCVR氨基酸序列中的LCDR1、LCDR2和LCDR3。2.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：(a)具有氨基酸序列SEQIDNO：274的HCVR；和(b)具有氨基酸序列SEQIDNO：282的LCVR。3.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段包括：选自SEQIDNO：178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346和354/362的HCVR/LCVR氨基酸序列对。4.根据权利要求1或3所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：(a)具有选自SEQIDNO：180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340和356的氨基酸序列的HCDR1结构域；(b)具有选自SEQIDNO：182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342和358的氨基酸序列的HCDR2结构域；(c)具有选自SEQIDNO：184、200、216、232、248、264、280、296、312、328、344和360的氨基酸序列的HCDR3结构域；(d)具有选自SEQIDNO：188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348和364的氨基酸序列的LCDR1结构域；(e)具有选自SEQIDNO：190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350和366的氨基酸序列的LCDR2结构域；和(f)具有选自SEQIDNO：192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352和368的氨基酸序列的LCDR3结构域。5.根据权利要求1-4任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：(a)具有氨基酸序列SEQIDNO：276的HCDR1结构域；(b)具有氨基酸序列SEQIDNO：278的HCDR2结构域；(c)具有氨基酸序列SEQIDNO：280的HCDR3结构域；(d)具有氨基酸序列SEQIDNO：284的LCDR1结构域；(e)具有氨基酸序列SEQIDNO：286的LCDR2结构域；和(f)具有氨基酸序列SEQIDNO：288的LCDR3结构域。6.一种药物组合物，所述组合物包括权利要求1-5任意一项所述的一种或多种抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体或稀释剂。7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述组合物包括与艰难梭状芽孢杆菌的毒素B特异性结合的至少一种抗体或其抗原结合片段和进一步包括与艰难梭状芽孢杆菌的毒素A特异性结合的至少一种抗体或其抗原结合片段，其中：与艰难梭状芽孢杆菌的毒素A特异性结合的所述分离的抗体或抗原结合片段包括包含在选自SEQIDNO：2、98、114、130、146和162的任意一个重链可变区(HCVR)氨基酸序列中的三个重链互补性决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；和包含在选自SEQIDNO：10、106、122、138、154和170的任意一个轻链可变区(LCVR)氨基酸序列中的三个轻链互补性决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中与艰难梭状芽孢杆菌的毒素A特异性结合的所述抗体或其抗原结合片段包括HCVR/LCVR氨基酸序列对SEQIDNO:146/154，并且其中与艰难梭状芽孢杆菌的毒素B特异性结合的所述抗体或其抗原结合片段包括HCVR/LCVR氨基酸序列对SEQIDNO:274/282。9.根据权利要求7或8所述的药物组合物，所述组合物包括：(a)与艰难梭状芽孢杆菌的毒素A特异性结合的分离的第一抗体或其抗原结合片段，其包括具有氨基酸序列SEQIDNO:148的HCDR1、具有氨基酸序列SEQIDNO:150的HCDR2、具有氨基酸序列SEQIDNO:152的HCDR3、具有氨基酸序列SEQIDNO:156的LCDR1、具有氨基酸序列SEQIDNO:158的LCDR2、具有氨基酸序列SEQIDNO:160的LCDR3；(b)与艰难梭状芽孢杆菌的毒素B特异性结合的分离的第二抗体或其抗原结合片段，其包括具有氨基酸序列SEQIDNO:276的HCDR1、具有氨基酸序列SEQIDNO:278的HCDR2、具有氨基酸序列SEQIDNO:280的HCDR3、具有氨基酸序列SEQIDNO:284的LCDR1、具有氨基酸序列SEQIDNO:286的LCDR2、具有氨基酸序列SEQIDNO:288的LCDR3；以及(c)药学上可接受的载体或稀释剂。10.根据权利要求7-9任意一项所述的药物组合物，其中包含在所述组合物中的抗体或其抗原结合片段有效地中和来自艰难梭状芽孢杆菌高毒性菌株的毒素A和B。11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述艰难梭状芽孢杆菌的高毒性菌株是BI/NAP1/027菌株。12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述BI/NAP1/027菌株选自VA5、VA17、6336和6...

【专利技术属性】
技术研发人员：安·格内特班德，卡洛斯·亚瑞丘比塔，依瑞斯·洛威，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US