【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般涉及使用尺寸排阻色谱-质谱工作流程来表征治疗性蛋白质的高分子量尺寸变体的方法。
技术介绍
1、治疗性蛋白质已经成为治疗癌症、自身免疫性疾病、感染和心脏代谢紊乱的重要药物，并且它们代表了制药行业中增长最快的产品部分中的一者。治疗性蛋白质产品必须达到非常高的纯度标准。因此，在治疗性蛋白质的药物开发、生产、储存和处理的不同阶段监测杂质可能是重要的。
2、高分子量(hmw)尺寸变体可能作为杂质存在于治疗性蛋白质样品中，并且由于它们对产品安全性和功效的影响而需要被密切监测和表征。由于最终药物物质(ds)样品中的hmw尺寸变体的复杂性和通常低的丰度，此类hmw物质的表征具有挑战性，并且传统上需要对hmw物质进行离线富集，随后使用各种分析工具进行分析。
3、因此，在本领域中，长期需要用于表征治疗性蛋白质产品中的此类hmw物质的有效方法。
技术实现思路
1、本文公开的示例性实施方案通过提供用于通过使用与质谱仪(sec-ms)方法在线耦合的柱后变性辅助原生尺寸交换色谱来表征治疗性蛋白质产品中的此类hmw物质的方法来满足前述需求。这可以允许对直接来自未分级的样品中的hmw物质进行高度特异性、灵敏且全面的表征。该方法不仅基于完整组装体和组成亚基两者的准确的质量测量来提供高可信度的hmw物质鉴定，而且还允许深入分析相互作用性质和位置。此外，使用源自高质量、类似原生质谱的经提取离子色谱图，可以轻松地重建每个非共价和/或不可解离复合物的洗脱图谱，从而有助于理解复杂的hmw
2、本公开提供一种用于表征感兴趣的蛋白质的至少一种高分子量物质的方法，所述方法包括：获得包含所述感兴趣的蛋白质和所述至少一种高分子量物质的样品；使所述样品与尺寸排阻色谱柱接触；洗涤所述柱以收集洗出液；向洗出液添加变性溶液以形成混合物；以及使所述混合物经历质谱仪以表征所述至少一种高分子量物质。
3、在该实施方案的一个方面，感兴趣的蛋白质为抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、抗体片段、单克隆抗体或fc融合蛋白。
4、在该实施方案的一个方面，所述洗出液包含所述至少一种高分子量物质。在该实施方案的一个方面，所述混合物还经历紫外线检测。
5、在该实施方案的一个方面，质谱仪为电喷雾电离质谱仪。在该实施方案的一具体方面，质谱仪为纳升电喷雾电离质谱仪
6、在该实施方案的一个方面，所述质谱仪在原生条件下操作。在一具体方面，该方法进一步包括将来自使用获得的质谱的至少一个峰与通过在原生条件下对所述样品进行在线尺寸排阻色谱-质谱获得的质谱进行比较。
7、在该实施方案的一个方面，所述变性溶液包含乙腈、甲酸或乙腈和甲酸的组合。在该实施方案的一具体方面，所述变性溶液包含约60％v/v乙腈和4％v/v甲酸。在该实施方案的另一个具体方面，所述变性溶液包含约60％v/v乙腈。
8、在该实施方案的一个方面，所述质谱仪在原生条件下操作。
9、在该实施方案的一个方面，所述质谱仪中的所述混合物的流量小于约10μl/min。
10、在该实施方案的一个方面，将所述混合物分到所述质谱仪和紫外线检测器中。在该实施方案的一具体方面，使用多喷嘴发射器将去溶剂化气体与所述混合物一起添加。
11、在该实施方案的一个方面，在使(d)的所述混合物经历质谱仪之前向所述混合物添加去溶剂化气体。
12、在该实施方案的一个方面，所述至少一种高分子量物质为所述感兴趣的蛋白质的非共价高分子量物质或所述感兴趣的蛋白质的不可解离高分子量物质。
13、在该实施方案的一个方面，该方法进一步包括将来自质谱的至少一个峰与通过对所述样品进行在线尺寸排阻色谱-质谱获得的质谱进行比较。
14、本公开还提供一种用于表征感兴趣的蛋白质的至少一种高分子量物质的方法，所述方法包括：获得包含所述感兴趣的蛋白质和所述至少一种高分子量物质的样品；使用水解剂消化所述样品以形成经消化的样品；使所述经消化的样品与尺寸排阻色谱柱接触；洗涤所述柱以收集洗出液；向洗出液添加变性溶液以形成混合物；以及使所述混合物经历质谱仪以表征所述至少一种高分子量物质。
15、在该实施方案的一个方面，感兴趣的蛋白质为抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、抗体片段、单克隆抗体或fc融合蛋白。
16、在该实施方案的一个方面，所述洗出液包含所述至少一种高分子量物质。在该实施方案的一个方面，所述混合物还经历紫外线检测。
17、在该实施方案的一个方面，质谱仪为电喷雾电离质谱仪。在该实施方案的一具体方面，质谱仪为纳升电喷雾电离质谱仪
18、在该实施方案的一个方面，所述质谱仪在原生条件下操作。在一具体方面，该方法进一步包括将来自质谱的至少一个峰与通过在原生条件下对所述样品进行在线尺寸排阻色谱-质谱获得的质谱进行比较。
19、在该实施方案的一个方面，所述变性溶液包含乙腈、甲酸或乙腈和甲酸的组合。在该实施方案的一具体方面，所述变性溶液包含约60％v/v乙腈和4％v/v甲酸。在该实施方案的另一个具体方面，所述变性溶液包含约60％v/v乙腈。
20、在该实施方案的一个方面，所述质谱仪在原生条件下操作。
21、在该实施方案的一个方面，所述质谱仪中的所述混合物的流量小于约10μl/min。
22、在该实施方案的一个方面，将所述混合物分到所述质谱仪和紫外线检测器中。在该实施方案的一具体方面，使用多喷嘴发射器将所述去溶剂化气体与所述混合物一起添加。
23、在该实施方案的一个方面，在使所述混合物经历质谱仪之前向所述混合物添加去溶剂化气体。
24、在该实施方案的一个方面，所述至少一种高分子量物质为所述感兴趣的蛋白质的非共价高分子量物质或所述感兴趣的蛋白质的不可解离高分子量物质。
25、在该实施方案的一个方面，该方法进一步包括将来自质谱的至少一个峰与通过对所述样品进行在线尺寸排阻色谱-质谱获得的质谱进行比较。
26、本公开还提供一种用于表征至少一种高分子量物质的方法，所述方法包括：获得包含至少两种感兴趣的蛋白质和所述至少一种高分子量物质的样品；使所述样品与尺寸排阻色谱柱接触；洗涤所述柱以收集洗出液；向洗出液添加变性溶液以形成混合物；以及使所述混合物经历质谱仪以表征所述至少一种高分子量物质。
27、在该实施方案的一个方面，感兴趣的蛋白质为抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、抗体片段、单克隆抗体或fc融合蛋白。
28、在该实施方案的一个方面，所述洗出液包含所述至少一种高分子量物质。在该实施方案的一个方面，所述混合物还经历紫外线检测。
29、在该实施方案的一个方面，质谱仪为电喷雾电离质谱仪。在该实施方案的一具体方面，质谱仪为纳升电喷雾电离质谱仪
30、在该实施方案的一个本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于表征感兴趣的蛋白质的至少一种高分子量物质的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述感兴趣的蛋白质为抗体。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述洗出液包含所述至少一种高分子量物质。
4.根据权利要求1所述的方法，其中(d)的所述混合物还经历紫外线检测。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪为纳升电喷雾电离质谱仪。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪在原生条件下操作。
7.根据权利要求6所述的方法，其进一步包括将来自使用(e)获得的质谱的至少一个峰与通过在原生条件下对(a)的所述样品进行在线尺寸排阻色谱-质谱获得的质谱进行比较。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述变性溶液包含乙腈、甲酸或乙腈与甲酸的组合。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述变性溶液包含约60％v/v乙腈和4％v/v甲酸。
10.根据权利要求7所述的方法，其中所述变性溶液包含约60％v/v乙腈。
11.根据权利要求7所述的方法，其中所述质谱仪
12.根据权利要求1所述的方法，其中在(b)之前使用水解剂消化(a)的所述样品。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述水解剂为蛋白酶酵素。
14.根据权利要求11所述的方法，其中所述蛋白酶酵素为IdeS。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪中(d)的所述混合物的流量小于约10μL/min。
16.根据权利要求1所述的方法，其中将(d)的所述混合物分到所述质谱仪和紫外线检测器中。
17.根据权利要求1所述的方法，其中在使(d)的所述混合物经历质谱仪之前向所述混合物添加去溶剂化气体。
18.根据权利要求16所述的方法，其中使用多喷嘴发射器将所述去溶剂化气体与(d)的所述混合物一起添加。
19.根据权利要求1所述的方法，其中至少一种高分子量物质为所述感兴趣的蛋白质的非共价高分子量物质。
20.根据权利要求1所述的方法，其中至少一种高分子量物质为所述感兴趣的蛋白质的不可解离高分子量物质。
21.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括将来自使用(e)获得的质谱的至少一个峰与通过对(a)的所述样品进行在线尺寸排阻色谱-质谱获得的质谱进行比较。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于表征感兴趣的蛋白质的至少一种高分子量物质的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述感兴趣的蛋白质为抗体。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述洗出液包含所述至少一种高分子量物质。
4.根据权利要求1所述的方法，其中(d)的所述混合物还经历紫外线检测。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪为纳升电喷雾电离质谱仪。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪在原生条件下操作。
7.根据权利要求6所述的方法，其进一步包括将来自使用(e)获得的质谱的至少一个峰与通过在原生条件下对(a)的所述样品进行在线尺寸排阻色谱-质谱获得的质谱进行比较。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述变性溶液包含乙腈、甲酸或乙腈与甲酸的组合。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述变性溶液包含约60％v/v乙腈和4％v/v甲酸。
10.根据权利要求7所述的方法，其中所述变性溶液包含约60％v/v乙腈。
11.根据权利要求7所述的方法，其中所述质谱仪在原生条件下操作。
12.根据权利要求1所...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。