一种拟南芥双元过表达株系构建的技术方法技术

本发明专利技术公开了拟南芥双元过表达株系构建的技术方法，该方法是将拟南芥在培养箱培养后选择开始现蕾的单株，摘掉现蕾的花朵后密闭环境放置，用镊子摘掉用作母本单株的雄蕊后用1％的氯化钠溶液对拟南芥的花进行喷施，氯化钠溶液喷施后以用作父本的花朵对目标单株进行授粉。本发明专利技术由于在授粉前用氯化钠溶液进行了喷施处理，降低了母本单株柱头蛋白质对外界花粉的排斥反应，从而提高了父本花粉顺利通过柱头进入子房，有效提高了拟南芥双元过表达株系的结实率。同时由于拟南芥双元过表达株系的结实率较高，后续杂交后代筛选变得更加容易，大大降低了杂交后代筛选的工作量。而且整个拟南芥双元过表达株系构建过程操作简单，技术要求程度低。

【技术实现步骤摘要】
一种拟南芥双元过表达株系构建的技术方法
本专利技术涉及生物技术研究领域，特别是一种拟南芥双元过表达株系构建的技术方法。技术背景拟南芥是一种模式植物，为真核高等生物，由于其生育期短，基因组相对简单，在植物科学研究领域具有非常广泛的用途，在研究植物形态解剖、生理生化、分子遗传、基因表达调控、生物信息等方面发挥了非常重要的作用。随着植物科学的研究进展，对拟南芥的功能基因挖掘逐渐深入，大量的功能基因及转录调控因子被发现并进行了详细的解析。转录调控因子在拟南芥广泛存在，对拟南芥的生长发育、生理生化活动、抗衰老及抗逆境胁迫等发挥非常重要的生物学功能，常见的转录调控因子有MYB、NAC、NAM、WRKY等。而在对转录调控因子的研究过程中植物科学家逐渐发现，转录调控因子在发挥其功能的时候往往是2个或2个以上共同协调表达从而完成某一项具体的生物学功能，为深入探讨转录调控因子的时候构建双元过表达株系就显得十分必要，而在实际构建拟南芥双元过表达株系时，往往操作复杂、技术要求程度高，而且构建双元过表达株系杂交结实率较低，难以满足科研实际的需要。基于以上原因，摸索一套技术方案拟南芥双元过表达株系构建的技术方法，以提高拟南芥双元过表达株系构建杂交的结实率，是有十分重大的意义的。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术中拟南芥双元过表达株系构建时杂交结实率低、目标单株筛选困难、技术要求程度高的问题，提供一种拟南芥双元过表达株系构建的技术方法，该方法对操作者技术要求程度低、双元过表达株系构建时杂交结实率高、目标单株筛选容易。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：拟南芥在培养箱培养30天左右，选择开始现蕾的单株，摘掉现蕾的花朵后密闭环境放置2小时，用镊子摘掉用作母本单株的雄蕊后用1％的氯化钠溶液对拟南芥的花进行喷施，氯化钠溶液喷施2小时后以用作父本的花朵对目标单株进行授粉。上述方案实施的步骤为：1、拟南芥在培养箱培养30天左右，从母本株系中选择刚刚出现第一朵花的10个单株构成第一组，已经现蕾的花朵全部摘掉，然后用透明的塑料袋对拟南芥顶部及四周进行遮盖，防止外界花粉传入，在培养箱放置2小时后用1％的氯化钠溶液对拟南芥的花进行均匀喷施。2、相对于第一组提前3天播种拟南芥父本株系，在培养箱培养30天左右，从父本株系中选择刚刚出现第一朵花的10个单株构成第二组，已经现蕾的花朵全部摘掉，然后用透明的塑料袋对拟南芥顶部及四周进行遮盖，防止外界花粉传入，在培养箱中放置3-5天，待出现大量花朵进行下一步实验。3、用镊子摘掉第一组即母本株系中准备授粉单株上的雄蕊，从第二组即父本株系中选花朵开放较多的单株上的花朵，对第一组中准备进行授粉单株的柱头进行轻轻涂抹完成授粉。4、授粉结束后继续用塑料袋对拟南芥顶部及四周进行遮盖，防止外界花粉传入的同时注意保持70％左右的湿度，7天左右后摘掉塑料袋，收获果荚在抗性筛选培养基播种即可获得拟南芥双元过表达株系。与现有技术相比，本专利技术所具有的有益效果为：1、由于在授粉前用氯化钠溶液进行了喷施处理，降低了母本单株柱头蛋白质对外界花粉的排斥反应，从而提高了父本花粉顺利通过柱头进入子房，有效提高了拟南芥双元过表达株系的结实率。2、由于拟南芥双元过表达株系的结实率较高，后续杂交后代筛选变得更加容易，大大降低了杂交后代筛选的工作量。3、整个拟南芥双元过表达株系构建过程操作简单，技术要求程度低。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为对本专利技术的任何限制。实施例1：1、2017年6月10日对col生态型拟南芥父本株系OEWR26-1在4℃条件下进行春化处理，3天后拟南芥种子开始发芽，在组织培养室培养拟南芥28天后开始现蕾开花，从父本株系选择刚刚出现第一朵花的10个单株构成第一组，用镊子摘掉出现的花朵，然后用透明的塑料袋对拟南芥顶部及四周进行遮盖，防止外界花粉传入，在组织培养室中放置5天，待出现大量花朵进行下一步实验。2、2017年6月13日对col生态型拟南芥母本株系OEWR71-3在4℃条件下进行春化处理，3天后拟南芥种子开始发芽，在组织培养室培养拟南芥30天后开始现蕾开花，从母本株系选择刚刚出现第一朵花的10个单株构成第二组，用镊子摘掉出现的花朵，然后用透明的塑料袋对拟南芥顶部及四周进行遮盖，防止外界花粉传入，放置2小时后用1％的氯化钠溶液对拟南芥的花进行均匀喷施。3、对于步骤2用镊子摘掉拟南芥母本株系OEWR71-3第二组中准备授粉单株上的雄蕊，从拟南芥父本株系OEWR26-1第一组中选花朵开放较多的单株上的花朵，对母本株系OEWR71-3中准备进行授粉单株的柱头进行轻轻涂抹完成授粉。4、授粉结束后继续用塑料袋对母本株系OEWR71-3第二组中已经授粉单株顶部及四周进行遮盖，防止外界花粉传入的同时注意保持70％左右的湿度，7天后摘掉塑料袋，收获果荚在抗性筛选培养基播种即获得拟南芥双元过表达株系。说明：以上实施例子选择了拟南芥过表达株系OEWR26-1和过表达株系OEWR71-3构建双元过表达株系，实际对于所有过表达株系均适用。实施例2：1、选ler生态型拟南芥过表达株系OESE-10作为父本，在2017年8月10日对父本株系OESE-10在4℃条件下进行春化处理，3天后ler生态型拟南芥种子开始发芽，在光照培养箱培养拟南芥30天后开始现蕾开花，从过表达株系OESE-10选择刚刚出现第一朵花的15个单株构成第一组，用镊子轻轻摘掉花朵，接下来用透明的塑料袋对拟南芥花盆的顶部及四周进行遮盖，防止外界的花粉的传入，在光照培养箱放置7天，待出现大量花朵供下一步实验用。2、选ler生态型拟南芥过表达株系OEWR35-8作为实验用的母本，取适量过表达株系OEWR35-8的种子于2017年8月13日在4℃条件下进行春化处理3天，待拟南芥种子开始发芽进行播种，在光照培养箱培养拟南芥种子30天后开始现蕾开花，从母本株系选择刚刚出现第一朵花的15个拟南芥单株构成第二组，小心用镊子摘掉出现的花朵，然后用透明的塑料袋对拟南芥花盆的顶部及四周进行遮盖，放置2小时后用1％的氯化钠溶液对拟南芥的花进行均匀喷施。3、对于步骤2中的过表达株系OEWR35-8中的15个拟南芥单株，用镊子轻轻摘掉雄蕊，从拟南芥父本株系15个单株中选花朵开放较多的花朵，对过表达株系OEWR35-8中的15个拟南芥单株的柱头轻轻涂抹完成授粉。4、授粉结束后继续用塑料袋对母本株系即过表达株系OEWR35-8中的15个拟南芥单株进行遮盖，防止外界花粉传入的同时注意保持70％左右的湿度，7天后摘掉塑料袋，收获果荚在抗性筛选培养基播种即获得拟南芥双元过表达株系。说明：以上实施例子选择了col生态型拟南芥过表达株系OEWR26-1、过表达株系OEWR71-3及Ler生态型拟南芥OESE-10过表达株系、OEWR35-8过表达株系构建双元过表达株系，实际对于所有过表达株系均适用。以上只是本专利技术的具体应用范例，本专利技术还有其他的实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本专利技术所要求的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
根据权利要求1所述的拟南芥双元过表达株系构建的技术方法，其特征在于包括如下步骤：拟南芥在培养箱培养后选择开始现蕾的单株，摘掉现蕾的花朵后密闭环境放置，用镊子摘掉用作母本单株的雄蕊后用1％的氯化钠溶液对拟南芥的花进行喷施，氯化钠溶液喷施后以用作父本的花朵对目标单株进行授粉。

【技术特征摘要】
1.根据权利要求1所述的拟南芥双元过表达株系构建的技术方法，其特征在于包括如下步骤：拟南芥在培养箱培养后选择开始现蕾的单株，摘掉现蕾的花朵后密闭环境放置，用镊子摘掉用作母本单株的雄蕊后用1％的氯化钠溶液对拟南芥的花进行喷施，氯化钠溶液喷施后以用作父本的花朵对目标单株进行授粉。2.根据权利要求1所述的拟南芥双元过表达株系构建的技术方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1，拟南芥在培养箱培养30天左右，从母本株系中选择刚刚出现第一朵花的10个单株构成第一组，已经现蕾的花朵全部摘掉，然后用透明的塑料袋对拟南芥顶部及四周进行遮盖，防止外界花粉传入，在培养箱放置2小时后用1％的氯化钠溶液对拟南芥的花进行均匀喷施；步...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍林涛，奉斌，韩宏仕，徐春，曾章丽，
申请(专利权)人：贵州省油菜研究所，
类型：发明
国别省市：贵州,52