一种多功能农业土壤修复菌剂及其制备方法和应用技术

一种多功能农业土壤修复菌剂及其制备方法和应用，涉及一种菌剂及其制备方法和应用。是为了解决现有DBP的微生物降解方法中微生物易受土著微生物竞争、土壤温度等土壤环境因素的影响，难以保持较高的生物活性和功能较为单一的问题。该菌剂包括微生物菌剂A和DBP降解菌发酵液，所述微生物菌剂A包括鞘脂菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液。方法：制备微生物菌剂A；制备DBP降解菌发酵液；将DBP降解菌发酵液和微生物菌剂A混合，得到多功能农业土壤修复菌剂。该菌剂能够在土壤环境长时间保持较高的生物修复活性，有效提高DBP污染的修复效率，在修复DBP污染土壤的同时，又能够对污染土壤肥力进行改良。本发明专利技术用于土壤修复领域。

A multifunctional agricultural soil remediation inoculum and its preparation and Application

The utility model relates to a multifunctional agricultural soil remediation inoculum and a preparation method and application thereof, relating to an inoculum, a preparation method and application thereof. In order to solve the problem that microorganisms are susceptible to the soil environmental factors such as the aboriginal microorganism competition and soil temperature in the existing microbial degradation methods of DBP, it is difficult to maintain high bioactivity and single function. The bactericide includes microbial agent A and DBP degradation bacteria fermentation broth. The microbial agent A includes sphingomyelic fermentation broth, Bacillus gliaciacae fermentation broth and Klebsiella producing fermented liquid. Methods: the microbial inoculant A was prepared, the fermentation broth of DBP degrading bacteria was prepared, and the multifunction agricultural soil remediation bactericide was obtained by mixing the DBP degrading bacteria fermentation liquid and the microbial agent A. The bacteria can maintain a high bioremediation activity in the soil environment for a long time, effectively improve the efficiency of the remediation of DBP pollution, and can also improve the soil fertility of contaminated soil while restoring the contaminated soil of DBP. The present invention is used in the field of soil remediation.

【技术实现步骤摘要】
一种多功能农业土壤修复菌剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种菌剂及其制备方法和应用。
技术介绍
农业的快速发展导致了农用地膜的大量使用，中国农用地膜的使用量世界第一，农膜导致白色污染形势严峻。邻苯二甲酸二丁酯(DBP)是一种重要的酞酸酯(PAEs)化合物，作为一种增塑剂，被广泛的应用于塑料农膜中。农膜的大量使用，导致我国农业土壤中DBP污染严重，DBP污染不仅会导致土壤土质变差，影响农业生产，DBP还会通过作物积累，通过食物链进入到人体中，对人体内分泌、神经系统等产生危害。目前中国环境检测总站和美国环保署(EPA)均将DBP列为优先控制污染物，因此土壤中DBP污染的防治刻不容缓。土壤环境中的DBP不易水解和光解，微生物降解目前仍是农业面源污染的主要治理方法。农业面源污染是指由沉积物、农药、废料、致病菌等分散污染源引起的对水层、湖泊、河岸、滨岸、大气等生态系统的污染。与点源污染相比，面源污染的时空范围更广，不确定性更大，成分、过程更复杂，更难以控制。当前，在我国农业活动中，非科学的经管理念和落后的生产方式是造成农业环境面源污染的重要因素，如剧毒农药的使用、过量化肥的施撒、不可降解农膜年年弃于田间、露天焚烧秸秆、大型养殖场禽畜粪便不做无害化处理随意堆放等。这些污染源对环境的污染，尤其对水环境的污染影响最大，据统计，农业面源污染占河流和湖泊富营养问题的60％～80％。现有使用微生物处理土壤中DBP的方法中，微生物功能较单一，而且易受土著微生物竞争、土壤温度等土壤环境因素的影响，难以保持较高的生物活性。因此在自然环境的农业土壤中去除DBP的效果不佳。专利技术内容本专利技术是为了解决现有DBP的微生物降解方法中微生物易受土著微生物竞争、土壤温度等土壤环境因素的影响，难以保持较高的生物活性和功能较为单一的问题，提供一种多功能农业土壤修复菌剂及其制备方法和应用。本专利技术多功能农业土壤修复菌剂包括微生物菌剂A和DBP降解菌发酵液，所述微生物菌剂A包括鞘脂菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液。其中微生物菌剂A和DBP降解菌发酵液的质量比为(5-10)：(2-4)。所述微生物菌剂A中鞘脂菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液质量比为(1-2)：(1-2)：(5-10)。DBP降解菌发酵液的浓度为108cfu/mL以上。鞘脂菌发酵液的浓度为108cfu/mL以上。胶质芽孢杆菌发酵液的浓度为108cfu/mL以上。产酸克雷伯氏菌发酵液的浓度为108cfu/mL以上。所述DBP降解菌为假单胞菌(Pseudomonassp.)DNB-S1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年11月6日，保藏编号为CGMCCNo.9526。已经在专利201410798113.0中公开。所述鞘脂菌购买自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.4400。所述胶质芽孢杆菌购买自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.7240。所述产酸克雷伯氏菌购买自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.4155。将上述多功能农业土壤修复菌剂与载体按照质量比1:1混合，可得到固体修复菌剂。所述载体是由凹凸棒土、高岭土和腐殖酸按照质量比2:1:1组成。上述多功能农业土壤修复菌剂的制备方法，按以下步骤实现：一、制备微生物菌剂A：将鞘脂菌接种于Pikovskava解无机磷固体培养基，在27～29℃、120～130r/min条件下进行活化培养24～26h；然后再将活化的菌种接种于Pikovskava解无机磷液体培养基扩大培养4～6d后，得到鞘脂菌发酵液；将胶质芽孢杆菌接种于硅酸盐细菌固体培养基在27～29℃、120～130r/min条件下进行活化培养24～26h；然后再将活化的菌种接种于硅酸盐细菌液体培养基扩大培养4～6d后，得到胶质芽孢杆菌发酵液；将产酸克雷伯氏菌接种于阿须贝氏固氮固体培养基在27～29℃、120～130r/min条件下进行活化培养24～26h；然后再将活化的菌种接种于阿须贝氏固氮液体培养基扩大培养4～6d后，得到鞘脂菌发酵液；将鞘脂菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液混合，得到复合微生物菌剂A；二、将DBP降解菌接种于无机盐固氮固体培养基在27～29℃、120～130r/min条件下进行活化培养24～26h；然后再将活化的菌种接种于无机盐液体培养基扩大培养24～26h后，将扩大培养的DBP降解菌菌液按10％～15％的接种量接种到廉价发酵培养基中，27～29℃、120～130r/min条件下进行活化培养72～74h，得到DBP降解菌发酵液；三、将DBP降解菌发酵液和微生物菌剂A混合，得到多功能农业土壤修复菌剂。步骤一中鞘脂菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液质量比为(1-2)：(1-2)：(5-10)。步骤三中微生物菌剂A和DBP降解菌发酵液的质量比为(5-10)：(2-4)。步骤一中所述Pikovskava解无机磷固体培养基成分包括：10g磷酸钙，0.5g硫酸铵，10g葡萄糖，0.3g硫酸镁，0.3g氯化钠，0.3g氯化钾，0.03g硫酸铁，0.03g硫酸锰，1000mL蒸馏水，15g琼脂，pH＝7.0；步骤一中所述Pikovskava解无机磷液体培养基成分包括：10g磷酸钙，0.5g硫酸铵，10g葡萄糖，0.3g硫酸镁，0.3g氯化钠，0.3g氯化钾，0.03g硫酸铁，0.03g硫酸锰，1000mL蒸馏水，pH＝7.0。步骤一中所述硅酸盐细菌固体培养基成分包括：3g磷酸氢二钠，1.0g硫酸铁，10g葡萄糖，1.0g硫酸镁，0.2g氯化钠，1.5g钾长石，1000mL蒸馏水，15g琼脂，pH＝7.0；步骤一中所述硅酸盐细菌液体培养基成分包括：3g磷酸氢二钠，1.0g硫酸铁，10g葡萄糖，1.0g硫酸镁，0.2g氯化钠，1.5g钾长石，1000mL蒸馏水，pH＝7.0；步骤一中所述阿须贝氏固氮固体培养基成分包括：0.3g磷酸二氢钾，0.2g硫酸镁，0.12g氯化钠，1.0g碳酸钙，10g蔗糖，1000mL蒸馏水，15g琼脂，pH＝7.0；步骤一中所述阿须贝氏固氮液体培养基成分包括：0.3g磷酸二氢钾，0.2g硫酸镁，0.12g氯化钠，1.0g碳酸钙，10g蔗糖，1000mL蒸馏水，pH＝7.0。步骤二中所述无机盐固体培养基成分包括，1.0g磷酸二氢钾，0.4g硫酸镁，1.0g氯化钠，0.01g氯化铁，0.075g氯化钙，0.5g硝酸铵，500mg/mlDBP，1000mL蒸馏水，15g琼脂，pH＝7.0；步骤二中所述无机盐液体培养基成分包括，1.0g磷酸二氢钾，0.4g硫酸镁，1.0g氯化钠，0.01g氯化铁，0.075g氯化钙，0.5g硝酸铵，500mg/mlDBP，1000mL蒸馏水，pH＝7.0。步骤二中所述廉价发酵培养基成分包括，23.9g玉米粉，37.5g黄豆粉，0.8g磷酸二氢钾，0.4g硫酸镁，0.4g氯化钠，0.04g氯化铁，0.1g氯化钙，1000mL蒸馏水，p本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多功能农业土壤修复菌剂，其特征在于该菌剂包括微生物菌剂A和DBP降解菌发酵液，所述微生物菌剂A包括鞘脂菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液。

【技术特征摘要】
1.一种多功能农业土壤修复菌剂，其特征在于该菌剂包括微生物菌剂A和DBP降解菌发酵液，所述微生物菌剂A包括鞘脂菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液。2.根据权利要求1所述的一种多功能农业土壤修复菌剂，其特征在于微生物菌剂A和DBP降解菌发酵液的质量比为(5-10)：(2-4)。3.根据权利要求1或2所述的一种多功能农业土壤修复菌剂，其特征在于所述微生物菌剂A中鞘脂菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液质量比为(1-2)：(1-2)：(5-10)。4.根据权利要求3所述的一种多功能农业土壤修复菌剂，其特征在于DBP降解菌发酵液、胶质芽孢杆菌发酵液和产酸克雷伯氏菌发酵液的浓度均为108cfu/mL以上。5.根据权利要求4所述的一种多功能农业土壤修复菌剂，其特征在于在多功能农业土壤修复菌剂中还加入载体，多功能农业土壤修复菌剂与载体的质量比为1:1，所述载体是由凹凸棒土、高岭土和腐殖酸按照质量比2:1:1组成。6.如权利要求1所述的多功能农业土壤修复菌剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：一、制备微生物菌剂A：将鞘脂菌接种于Pikovskava解无机磷固体培养基，在27～29℃、120～130r/min条件下进行活化培养24～26h；然后再将活化的菌种接种于Pikovskava解无机磷液体培养基扩大培养4～6d后，得到鞘脂菌发酵液；将胶质芽孢杆菌接种于硅酸盐细菌固体培养基在27～29℃、120～130r/min条件下进行活化培养24～26h；然后再将活化的菌种接种...

【专利技术属性】
技术研发人员：张颖，王蕾，付嘉伟，董俊伟，于晖，陶月，林宇龙，姜昭，冯程程，曹博，孙瑞雪，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23