一种饱和脂肪酸特异性脂肪酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种饱和脂肪酸特异性脂肪酶突变体及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术根据华根霉脂肪酶(RCL)结构分析，对其进行定点突变，获得了脂肪酸特异性改变的突变酶。比较野生型脂肪酶与突变酶催化水解动物油的能力，得到了水解率远高于野生型脂肪酶的突变酶。相比野生型RCL，突变酶T286Q、I281F和A116W/I281F由于增强了对饱和脂肪酸的特异性，其对猪油水解率分别由55％提高到了85％、90％和86％。

A saturated fatty acid specific lipase mutant and its application

The invention discloses a saturated fatty acid specific lipase mutant and its application, belonging to the field of gene engineering technology. According to the structural analysis of Rhizopus Rhizopus lipase (RCL), the mutagenase of fatty acid has been obtained by site directed mutagenesis. Comparing the ability of lipase and mutant enzyme to hydrolyze animal oil, the mutant enzyme with higher hydrolysis rate than wild type lipase was obtained. Compared with wild type RCL, the mutant enzyme T286Q, I281F and A116W/I281F enhanced the specificity of saturated fatty acids, and their hydrolysis rate of lard increased from 55% to 85%, 90% and 86%, respectively.

【技术实现步骤摘要】
一种饱和脂肪酸特异性脂肪酶突变体及其应用
本专利技术涉及一种饱和脂肪酸特异性脂肪酶突变体及其应用，属于基因工程

技术介绍
脂肪酸是油脂化工中最基础，使用最为广泛的原料之一。天然油脂水解是获得游离脂肪酸的重要途径之一。脂肪酸的生产技术主要有皂化法、水解法、蒸汽裂解法以及酶水解法，其中酶水解法由于具有反应条件温和、不饱和脂肪酸不易被氧化、副产物少的优势，成为脂肪酸制取方法的研究热点。不同类型、不同碳链长度及不同比例的脂肪酸具有不同的功能。短链脂肪酸可作为饲料添加剂，促进动物生长。中链脂肪酸广泛应用于医药、保健食用油及养殖业。长链不饱和脂肪酸在代谢中具有广泛的生理活性，用于健康保健。植物油脂中不饱和脂肪酸含量较高，如大豆油、菜籽油和油茶油中不饱和脂肪酸含量分别为84.34％、77.70％和81.43％。长链饱和脂肪酸如棕榈酸和硬脂酸，广泛存在于猪、牛和羊等动物油中，主要用于生产作为乳化剂的脂肪酸盐，并作为常用的塑料制品的稳定剂。动物油中各类饱和脂肪酸质量分数之和通常在60％以上，而且脂肪酸链长多为十六碳、十八碳，合计可达90％以上，含有十六个及十八个碳原子的脂肪酸经甲酯化后得到的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂肪酶突变体，其特征在于，所述脂肪酶突变体相对于具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的脂肪酶，包括脂肪酶底物结合口袋的一个、两个或三个氨基酸残基的变化；所述变化增加口袋空间位阻；所述变化与脂肪酶对饱和脂肪酸的特异性相关。

【技术特征摘要】
1.一种脂肪酶突变体，其特征在于，所述脂肪酶突变体相对于具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的脂肪酶，包括脂肪酶底物结合口袋的一个、两个或三个氨基酸残基的变化；所述变化增加口袋空间位阻；所述变化与脂肪酶对饱和脂肪酸的特异性相关。2.根据权利要求1所述的脂肪酶突变体，其特征在于，所述脂肪酶突变体是在氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的序列的基础上，将第286位的苏氨酸突变为谷氨酰胺，或者将第281位的异亮氨酸突变为苯丙氨酸，或者将第116位的丙氨酸突变为色氨酸的同时将第281位的异亮氨酸突变为苯丙氨酸。3.根据权利要求2所述的脂肪酶突变体，其特征在于，所述脂肪酶突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.2、SEQIDNO.3或SEQIDNO.4所示。4.根据权利要求2所述的脂肪...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻晓蔚，徐岩，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32