一种高通量对受精卵进行基因编辑的电转方法技术

本发明专利技术涉及医学生物技术领域，特别涉及一种高通量对受精卵进行基因编辑的电转方法。其中，着重对所述的电转培养基溶液和电转参数进行了调整。根据本发明专利技术方法，通过电转实验，发现小鼠阳性比例明显提高了2倍，在提高阳性率的同时，也减少了后期动物管理和鉴定的工作量。

An electroporation method for high throughput gene editing of fertilized eggs

The invention relates to the field of medical biotechnology, in particular to a high throughput electrospinning method for gene editing of fertilized eggs. Among them, the electrospinning medium solution and electrospinning parameters were adjusted. According to the method, it was found that the positive ratio of mice increased by 2 times, while the positive rate was increased, and the workload of later animal management and identification was reduced.

【技术实现步骤摘要】
一种高通量对受精卵进行基因编辑的电转方法
本专利技术涉及医学、生物
，特别涉及一种高通量对受精卵进行基因编辑的电转方法。
技术介绍
CRISPR/Cas9基因编辑技术以其高效、操作简便、成本低等特点被广泛应用于基因敲除小鼠实验中，但在将RNAs注入受精卵的环节中，传统的显微注射需要借助精密的显微操作系统人工的逐个进行受精卵注射，成本高，对操作人员培训要求较高，操作耗时较长。随着CRISPR/Cas9基因编辑技术的发展，出现了用电转受精卵替代传统显微注射的方法。该技术采用适合于动物受精卵电转的仪器和体系，将处理过的受精卵和RNA共同放入电场中进行电击处理，可成功实现对受精卵基因的编辑。将经过电转修饰的受精卵移植到代孕鼠体内，后期可获得基因修饰过的小鼠，并能稳定遗传。但目前受精卵的电转技术还处于比较初级的阶段，在大片段敲除、高通量、稳定性、阳性率、出生率上还存在明显不足。
技术实现思路
本专利技术目的是解决现有受精卵的电转技术存在的缺陷，提高受精卵进行基因编辑的效率，提高一次电转卵的数量、小鼠出生阳性率。为解决上述技术问题，本专利技术的提供的技术方案为：一种高通量对受精卵进行基因编辑的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高通量对受精卵进行基因编辑的电转方法，其包括如下步骤：(1)吸取适量培养的受精卵转移到M2培养液中清洗，再将上述受精卵转移到台式酸化液进行消化，将消化后的受精卵转移到电转缓冲液内清洗；(2)吸取少量孵育好的电转培养基溶液放入电转皿，然后将受精卵转移到电转皿内的电转培养基溶液，(3)立即将电转皿正负电极接到电转仪上开始电转操作；(4)电转结束后，取下电转皿拿到显微镜下，将卵转移到M2培养基中清洗，然后放入CO2培养箱中继续培养观察；其特征在于，所述的电转培养基溶液的成分如下：

【技术特征摘要】
1.一种高通量对受精卵进行基因编辑的电转方法，其包括如下步骤：(1)吸取适量培养的受精卵转移到M2培养液中清洗，再将上述受精卵转移到台式酸化液进行消化，将消化后的受精卵转移到电转缓冲液内清洗；(2)吸取少量孵育好的电转培养基溶液放入电转皿，然后将受精卵转移到电转皿内的电转培养基溶液，(3)立即将电转皿正负电极接到电转仪上开始电转操作；(4)电转结束后，取下电转皿拿到显微镜下，将卵转移到M2培养基中清洗，然后放入CO2培养箱中继续培养观察；其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑敦武，丁春钦，方明，
申请(专利权)人：赛业苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32