一种促进皮肤损伤修复的小分子多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种促进皮肤损伤修复的小分子多肽及其应用，属于生物医药领域。该小分子多肽为含有SNFLHLG核心序列的连续4个及其以上的4～12个氨基酸长度的线性肽或环肽。本发明专利技术提供的小分子多肽与目前类似的产品外用重组bFGF相比，促增殖效果相当，但亲和力更高，分子量更小，且采用化学合成方法而非基因工程方法，故在同等摩尔浓度的使用条件下，所需的生产成本和使用成本更低，所以是很好的替代重组bFGF的促皮肤创伤修复和细胞增殖产品。而本发明专利技术提供的多肽相对bFGF，因为仅有几个到十几个氨基酸，故降解程度大大降低，而且本发明专利技术公开的实验结果证明，该种多肽能持续作用于治疗部位，因此具有技术上的先进性。

A small molecular polypeptide for promoting skin injury and its application

The invention discloses a small molecular polypeptide for promoting skin damage and its application, and belongs to the field of biological medicine. The small polypeptide is a linear peptide or cyclic peptide with a length of 4 and above 4~12 amino acids with a SNFLHLG core sequence. The small molecular peptide provided by the invention is comparable to the recombinant bFGF, which is similar to the current product, and has the same growth promotion effect, but the affinity is higher, the molecular weight is smaller, and the chemical synthesis method is not the genetic engineering method, so the production cost and the cost of use are lower at the same molar concentration, so it is lower. It is a good alternative to recombinant bFGF for skin wound repair and cell proliferation. The polypeptide provided by the invention is relatively bFGF because only a few to a dozen amino acids, so the degree of degradation is greatly reduced, and the experimental results disclosed in the invention prove that the polypeptide can continue to act on the site of treatment and therefore has the technical advanced nature.

【技术实现步骤摘要】
一种促进皮肤损伤修复的小分子多肽及其应用
本专利技术属于生物医药领域，特别涉及一种促进皮肤损伤修复的小分子多肽及其应用。
技术介绍
皮肤是人体面积最大的且最直接与外界接触组织，同时也是最容易受到外界刺激而损伤的器官。正常创伤的愈合对维持机体稳态至关重要，而异常愈合如大面积烧烫伤造成的不愈或者迟愈、其他疾病导致的慢性创面愈合、以及不正常的愈合如病理性瘢痕的形成等等不仅影响了美观，更会造成结构和功能的障碍，往往对患者造成沉重的心理压力，严重影响着患者的身心健康。因此，如何在皮肤创伤治疗中快速达到最佳愈合效果，一直是人们研究的热点。皮肤的愈合过程是一个复杂的、协调有序的组织修复再生过程，是多种细胞及细胞因子共同作用完成的过程。该过程大致可以分为炎症反应期、增生期和重塑期，三个期相互交叉并无严格的界线，且均有大量的细胞及细胞因子参与愈合过程。参与愈合的细胞包括角质细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、中性粒细胞、单核/巨噬细胞和肥大细胞等；参与愈合的细胞因子包括成纤维细胞生长因子(FibroblastGrowthFactor，FGF)、血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)、血小板衍生因子(Plateletderivedgrowthfactor，PDGF)、肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、转化生长因子(Transforminggrowthfactor，TGF)、胰岛素样生长因子(Insulin-likegrowthfactors，IGF)和多种凝血因子等。细胞分泌细胞因子调节创伤愈合，细胞因子又反过来影响细胞的功能，其中任何一个环节的异常都可能造成皮肤愈合结果的异常，而且皮肤愈合过程受到的影响因素众多(年龄、营养状况、内分泌变化、药物、局部血液循环、感染、电离辐射和系统性疾病等)，因此，皮肤愈合的机制目前仍不完全明确。目前临床上，皮肤创伤修复主要针对急性皮肤软组织创伤、慢性皮肤软组织创伤来进行不同的用药和处理。基于我国传统中医药的优势，在创伤修复领域涌现了许多单方如康复新液，复方则由少则四、五味，多则二三十味中药进行配伍制备而来，例如治疗烧烫伤的“湿润烧伤膏”、“京万红”等。现代医药开发特别是基因工程技术介入的生物医药开发后，促细胞生长的重组生长因子的生产也是创伤修复药物开发的生力军，比如已经在临床上应用于创伤、烧烫伤等的生物技术药物--外用重组碱性成纤维细胞生长因子，就是我国第二个基因工程I类新药(注：碱性成纤维细胞生长因子又称为成纤维细胞生长因子-2，bFGF)。与皮肤修复的多肽药物开发方面，2014年中科院昆明动物研究所报道了来源于蜥蜴的一条强效的皮肤修复肽Tylotoin，含12个氨基酸残基，表现出强烈的促创伤愈合活性，可以促进角质上皮和成纤维细胞的增殖和迁移，还能促进TGF-b和IL-6的生成。也有中国专利技术专利公开了从华南雨蛙、红瘰疣螈、无指盘臭蛙中分别提取出了能促进皮肤修复的多肽，分别为16肽、13肽、24和11肽。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种促进皮肤损伤修复的小分子多肽。该小分子多肽促进皮肤细胞增殖从而重塑皮肤组织结构。本专利技术提供的是一种4～12个氨基酸残基组成的小分子多肽，该种多肽是基于序列SNFLHLG而衍生的若干线肽和环肽，均暂命名为重塑肽，该种多肽序列的核心序列的获得是通过噬菌体肽库，以成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)的膜外段为靶点，多轮筛选并鉴定而获得的。目前为止尚无文献报道含有该核心序列多肽能用于皮肤创伤修复。本专利技术的另一目的在于提供上述这种促进皮肤损伤修复的小分子多肽的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：本专利技术的目的是提供一种促进皮肤损伤修复的小分子多肽，暂命名为重塑肽，该重塑肽为含有SNFLHLG核心序列的连续4个及其以上的4～12个氨基酸长度的线性肽或环肽。该重塑肽能靶向FGFR2，并具有高亲和力。具体的，所述的重塑肽的T1肽序列为SNFLHLG，T2肽序列为ATDVSNFL，T3肽序列为NFLHLGADLWPD，T4肽序列为CSNFLHLGC。其中T1肽仅含有核心序列；T2肽含有核心序列的四个连续氨基酸SNFL；T3肽含有核心序列的六个连续的氨基酸NFLHLG；T4肽含有核心序列的全部7个氨基酸，且通过两端两个半胱氨酸的二硫键形成环肽。本专利技术所述的重塑肽可以采用化学合成的方法获得。本专利技术的目的是提供重塑肽在制备皮肤创伤、烧烫伤、慢性创面愈合、放射性溃疡、皮肤细胞修复和新生等方面的产品中的应用。所述的产品优选为医用产品、护肤品或化妆品。所述的产品的制剂类型优选但不局限为溶液、乳剂、霜剂、凝胶、面膜或敷料等。本专利技术的内容为在小鼠成纤维细胞balb/c3T3、人血管内皮细胞HUVEC、鸡胚尿囊膜和小鼠的动物模型上的实验。本专利技术相对于现有技术，具有如下的优点及效果：本专利技术提供的重塑肽是一种能够与FGFR2有高亲和的氨基酸短肽，与目前类似的产品外用重组bFGF(包括155个氨基酸)相比，促增殖效果相当，但亲和力更高，分子量更小，而且采用化学合成方法而非基因工程方法，故在同等摩尔浓度的使用条件下，所需的生产成本和使用成本更低，所以是很好的替代重组bFGF的促皮肤创伤修复和细胞增殖产品。而且重组bFGF在体外保存和运输条件较为苛刻，易降解，导致治疗部位的积累低，难以持续作用，因此在某些程度上限制和影响了其使用和相关剂型的开发，而本专利技术提供的多肽相对bFGF，因为仅有几个到十几个氨基酸，故降解程度大大降低，而且本专利技术公开的实验结果证明，该种多肽能持续作用于治疗部位，因此具有技术上的先进性。附图说明图1是ITC法检测重塑肽的T1肽和bFGF与FGFR2的亲和力的结果图；其中，A：重塑肽的T1肽→FGFR2；B：bFGF→FGFR2。图2是CCK-8法检测重塑肽的T1、T2、T3和T4肽和bFGF对小鼠成纤维细胞Balb/c3T3的促细胞增殖作用的结果图。图3是CCK-8法检测重塑肽的T1、T2、T3和T4肽和bFGF对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的促细胞增殖作用的结果图。图4是重塑肽的T1、T2、T3和T4肽促进鸡胚尿囊膜中血管生成的结果图。图5是重塑肽的T1、T2、T3和T4肽促进小鼠皮肤创伤的修复的结果图。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。下列实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，实施例中所使用的实验材料、试剂等如无特殊说明，均为商业途径获取。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不是用于限制本专利技术的范围。实施例11、ITC法检测重塑肽SNFLHLG与FGFR2的亲和力采用等温微量量热仪(ITC)检测的亲和力，结果如图1所示，A图为重塑肽T1肽与FGFR2的结合力检测结果，它们的亲和常数K＝3.11E7±1.63E6M-1，解离常数Kd≈32.1nM，B图为bFGF与FGFR2的结合力检测结果，它们的亲和常数为K＝1.62E5±2.50E4M-1，解离常数Kd≈6.17μM。结果显示重塑肽T1肽与FGFR2的亲和力远远高于bFGF与FGFR2的亲和力，前者是后者的约2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促进皮肤损伤修复的小分子多肽，其特征在于：所述小分子多肽，暂命名为重塑肽，该重塑肽为含有SNFLHLG核心序列的连续4个及其以上的4～12个氨基酸长度的线性肽或环肽。

【技术特征摘要】
1.一种促进皮肤损伤修复的小分子多肽，其特征在于：所述小分子多肽，暂命名为重塑肽，该重塑肽为含有SNFLHLG核心序列的连续4个及其以上的4～12个氨基酸长度的线性肽或环肽。2.根据权利要求1所述的促进皮肤损伤修复的小分子多肽，其特征在于：所述的重塑肽的T1肽序列为SNFLHLG的线性肽。3.根据权利要求1所述的促进皮肤损伤修复的小分子多肽，其特征在于：所述的重塑肽的T2肽序列为ATDVSNFL的线性肽。4.根据权利要求1所述的促进皮肤损伤修复的小分子多肽，其特征在于：所述的重塑肽的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈小佳，洪岸，赵影，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44