一种固液联合合成地索莫泰的方法技术

本发明专利技术公开了一种固液联合合成地索莫泰的方法，该方法先采用液相合成法以Fmoc‑Ile‑COOH和蛋氨酸、天冬氨酸为原料合成Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑OH，以Fmoc‑Gln(Trt)‑COOH和缬氨酸、脯氨酸为原料合成Fmoc‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑OH，然后采用固相合成法，在2‑CTC Resin上依次连接Fmoc‑Val‑OH、Fmoc‑Ser(tBu)‑OH、Fmoc‑Phe‑OH、Fmoc‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑OH、Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑OH，得到Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑Phe‑Ser(tBu)‑Val‑2‑CTC Resin，对其进行脱Fmoc‑保护基、切割、分离和纯化得到地索莫泰肽产品。本发明专利技术方法具有合成成本低、合成效率高、合成方法简单的优点，可用于规模化合成地索莫泰。

A method of combining solid and liquid to synthesize Thailand

The invention discloses a solid-liquid combined synthetic cable Mo Tai method, this method adopts liquid phase synthesis method with Fmoc Ile COOH and methionine, aspartic acid was synthesized from Fmoc Ile Met Asp OH, Fmoc Gln (Trt) COOH and valine, proline as raw material the synthesis of Fmoc Gln (Trt) Val Pro OH, then by solid-state synthesis method in 2 CTC Resin connected Fmoc Val OH, Fmoc Ser (tBu) OH, Fmoc Phe OH, Fmoc Gln (Trt) Val Pro OH, Fmoc Ile Met Asp OH, Fmoc Ile Met Asp Gln (Trt) Val Pro Phe Ser (tBu) Val CTC 2 Resin, the removal of Fmoc protective base, cutting, separation and purification of peptide products obtained Mo Tai cable. The method has the advantages of low synthesis cost, high synthesis efficiency and simple synthesis method, and can be used in scale synthetic ground Thailand.

【技术实现步骤摘要】
一种固液联合合成地索莫泰的方法
本专利技术属于多肽合成
，具体涉及固液相联合法合成地索莫泰。
技术介绍
黑色素瘤一般指恶性黑色素瘤(malignantmelanoma，MM)，是皮肤恶性黑色素瘤的一种，与皮肤鳞状细胞癌及皮肤基底细胞癌共同组成最常见的皮肤三大恶性肿瘤。黑色素瘤多由黑色素细胞所形成的痣或黑色素斑发生恶变而来。黑色素瘤已成为近年来所有恶性肿瘤中发病率增长最快的恶性肿瘤，年增长率3％～5％。并且，恶性黑色素瘤一旦进入快速生长期，则患者预后极差、病死率较高。地索莫泰是一种含有九个氨基酸的活性多肽，其序列为H-Ile-Met-Asp-Gln-Val-Pro-Phe-Ser-Val-OH，是一种治疗黑色素瘤的多肽。现有合成地索莫泰的方法主要为传统固相合成，其存在合成效率低，杂质累积大等缺点。因此，研究地索莫泰的合成方法对预防治疗黑色素瘤有着重要的意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种合成成本低、合成效率高、合成方法简单的固液联合合成地索莫泰的方法。解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：1、合成Fmoc-Ile-Met-Asp-OH(1)以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc-Ile-COOH、N-羟基丁二酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺在室温条件下搅拌反应2～3小时，过滤除去固体不溶物，得到Fmoc-Ile-COOSu的四氢呋喃溶液；向Fmoc-Ile-COOSu的四氢呋喃溶液中滴加含蛋氨酸和碳酸氢钠的水溶液，滴加完后在室温条件下搅拌反应18～20小时，减压浓缩，用质量分数为10％的柠檬酸水溶液调节浓缩液的pH值至2～3，用乙酸乙酯萃取，有机相依次经水洗、饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥、减压过滤、减压浓缩，得到Fmoc-Ile-Met-COOH。(2)按照上述步骤(1)的方法，用Fmoc-Ile-Met-COOH和天冬氨酸合成Fmoc-Ile-Met-Asp-OH。2、合成Fmoc-Gln(Trt)-Val-Pro-OH按照步骤1的方法，先以Fmoc-Gln(Trt)-COOH和缬氨酸为原料，合成Fmoc-Gln(Trt)-Val-COOH，然后用Fmoc-Gln(Trt)-Val-COOH和脯氨酸合成Fmoc-Gln(Trt)-Val-Pro-OH；3、合成Fmoc-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin(1)以二氯甲烷为溶剂，将二氯甲烷溶胀后的2-CTCResin与Fmoc-Val-OH、N,N′-二异丙基乙胺在氮气保护下室温反应1～2小时，得到Fmoc-Val-2-CTCResin；(2)将Fmoc-Val-2-CTCResin用哌啶与N,N-二甲基甲酰胺体积比为1:4的混合液脱除Fmoc保护基后加入N,N-二甲基甲酰胺中，并加入Fmoc-Ser(tBu)-OH、1-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐、N,N′-二异丙基乙胺，在氮气保护下室温反应1～2小时，得到Fmoc-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin；4、合成Fmoc-Ile-Met-Asp-Gln(Trt)-Val-Pro-Phe-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin按照步骤3中(2)的方法，向Fmoc-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin上依次连接Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Gln(Trt)-Val-Pro-OH、Fmoc-Ile-Met-Asp-OH，得到Fmoc-Ile-Met-Asp-Gln(Trt)-Val-Pro-Phe-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin；5、合成地索莫泰将步骤4得到的Fmoc-Ile-Met-Asp-Gln(Trt)-Val-Pro-Phe-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin用哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc-保护基后，对其进行切割、分离和纯化，得到H-Ile-Met-Asp-Gln-Val-Pro-Phe-Ser-Val-OH，即地索莫泰产品。上述步骤1的(1)中，优选Fmoc-Ile-COOH与N-羟基丁二酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、蛋氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1～2:1～2:1.1～2:1.1～2。上述步骤1的(2)中，优选N-羟基丁二酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、天冬氨酸、碳酸氢钠与Fmoc-Ile-COOH的摩尔比为1～2:1～2:1.1～2:1.1～2:1。上述步骤2中，优选Fmoc-Gln(Trt)-COOH和缬氨酸、脯氨酸的摩尔比为1:1.1～2:1.1～2。上述步骤3的(1)中，优选2-CTCResin与Fmoc-Val-OH、N,N′-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1～3:2～4。上述骤3的(2)中，优选Fmoc-Ser(tBu)-OH、1-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐、N,N′-二异丙基乙胺与2-CTCResin的摩尔比为1～3:2～4:2～4:2～4:1。上述步骤4中，优选Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Gln(Trt)-Val-Pro-OH、Fmoc-Ile-Met-Asp-OH与2-CTCResin的摩尔比均为1～3:1。上述步骤5中，切割所用切割液的质量百分比组成为：三氟乙酸83％、苯酚5％、苯甲硫醚4％、水3％、三异丙基硅烷5％。本专利技术方法将传统的固相合成方法和液相合成方法进行组合，采用片段法进行地索莫泰的合成，既克服了现有经典固相合成地索莫泰合成效率低、杂质累积大，也克服了液相合成地索莫泰过程复杂、合成周期长、效率低的缺点，具有合成成本低、合成效率高、合成方法简单的优点，可用于规模化合成地索莫泰。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不仅限于这些实施例。实施例11、合成Fmoc-Ile-Met-COOH(1)将17.67g(0.05mol)Fmoc-Ile-COOH加入170mL四氢呋喃中，室温搅拌溶解后加入6.33g(0.055mol)N-羟基丁二酰亚胺，搅拌至溶解，然后缓慢滴加23mL含11.35g(0.055mol)N,N'-二环己基碳二亚胺的四氢呋喃溶液，滴加完后室温搅拌反应3小时，减压过滤除去固体不溶物，得到Fmoc-Ile-COOSu的四氢呋喃溶液。将8.21g(0.055mol)蛋氨酸和4.62g(0.055mol)碳酸氢钠溶解于250mL蒸馏水中，所得溶液滴加到Fmoc-Ile-COOSu的四氢呋喃溶液中，室温搅拌反应20小时，减压浓缩，用质量分数为10％的柠檬酸水溶液调节浓缩液的pH值至2～3，用乙酸乙酯萃取，有机相依次经水洗、饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥、减压过滤、减压浓缩，得到Fmoc-Ile-Met-COOH。该步反应中Fmoc-Ile-COOH与N-羟基丁二酰亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、蛋氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1:1.1。(2)将步骤(1)得到的Fmoc-Ile-Met-COOH加入200mL四氢呋喃中，室温搅拌溶解后加入6.33g(0.055mol)N-羟基丁二酰亚胺，搅拌至溶解，然后缓慢滴加23mL含11.35g(0.055mol)N,N'-二环己基碳二亚胺的四氢呋喃溶液，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种固液联合合成地索莫泰的方法，其特征在于它由以下步骤组成：(1)合成Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑OH①以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc‑Ile‑COOH、N‑羟基丁二酰亚胺、N,N'‑二环己基碳酰亚胺在室温条件下搅拌反应2～3小时，过滤除去固体不溶物，得到Fmoc‑Ile‑COOSu的四氢呋喃溶液；向Fmoc‑Ile‑COOSu的四氢呋喃溶液中滴加含蛋氨酸和碳酸氢钠的水溶液，滴加完后在室温条件下搅拌反应18～20小时，减压浓缩，用质量分数为10％的柠檬酸水溶液调节浓缩液的pH值至2～3，用乙酸乙酯萃取，有机相依次经水洗、饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥、减压过滤、减压浓缩，得到Fmoc‑Ile‑Met‑COOH；②按照上述步骤①的方法，用Fmoc‑Ile‑Met‑COOH和天冬氨酸合成Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑OH；(2)合成Fmoc‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑OH按照步骤(1)的方法，先以Fmoc‑Gln(Trt)‑COOH和缬氨酸为原料，合成Fmoc‑Gln(Trt)‑Val‑COOH，然后用Fmoc‑Gln(Trt)‑Val‑COOH和脯氨酸合成Fmoc‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑OH；(3)合成Fmoc‑Ser(tBu)‑Val‑2‑CTC Resin①以二氯甲烷为溶剂，将二氯甲烷溶胀后的2‑CTC Resin与Fmoc‑Val‑OH、N,N′‑二异丙基乙胺在氮气保护下室温反应1～2小时，得到Fmoc‑Val‑2‑CTC Resin；②将Fmoc‑Val‑2‑CTC Resin用哌啶与N,N‑二甲基甲酰胺体积比为1:4的混合液脱除Fmoc保护基后加入N,N‑二甲基甲酰胺中，并加入Fmoc‑Ser(tBu)‑OH、1‑羟基苯丙三唑、苯并三氮唑‑N,N,N’,N’‑四甲基脲六氟磷酸盐、N,N′‑二异丙基乙胺，在氮气保护下室温反应1～2小时，得到Fmoc‑Ser(tBu)‑Val‑2‑CTC Resin；(4)合成Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑Phe‑Ser(tBu)‑Val‑2‑CTC Resin按照步骤(3)中②的方法，向Fmoc‑Ser(tBu)‑Val‑2‑CTC Resin上依次连接Fmoc‑Phe‑OH、Fmoc‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑OH、Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑OH，得到Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑Phe‑Ser(tBu)‑Val‑2‑CTC Resin；(5)合成地索莫泰将步骤(4)得到的Fmoc‑Ile‑Met‑Asp‑Gln(Trt)‑Val‑Pro‑Phe‑Ser(tBu)‑Val‑2‑CTC Resin用哌啶与N,N‑二甲基甲酰胺的体积比为1:4的混合液脱Fmoc‑保护基后，对其进行切割、分离和纯化，得到H‑Ile‑Met‑Asp‑Gln‑Val‑Pro‑Phe‑Ser‑Val‑OH，即地索莫泰产品。...

【技术特征摘要】
1.一种固液联合合成地索莫泰的方法，其特征在于它由以下步骤组成：(1)合成Fmoc-Ile-Met-Asp-OH①以四氢呋喃为溶剂，将Fmoc-Ile-COOH、N-羟基丁二酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺在室温条件下搅拌反应2～3小时，过滤除去固体不溶物，得到Fmoc-Ile-COOSu的四氢呋喃溶液；向Fmoc-Ile-COOSu的四氢呋喃溶液中滴加含蛋氨酸和碳酸氢钠的水溶液，滴加完后在室温条件下搅拌反应18～20小时，减压浓缩，用质量分数为10％的柠檬酸水溶液调节浓缩液的pH值至2～3，用乙酸乙酯萃取，有机相依次经水洗、饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥、减压过滤、减压浓缩，得到Fmoc-Ile-Met-COOH；②按照上述步骤①的方法，用Fmoc-Ile-Met-COOH和天冬氨酸合成Fmoc-Ile-Met-Asp-OH；(2)合成Fmoc-Gln(Trt)-Val-Pro-OH按照步骤(1)的方法，先以Fmoc-Gln(Trt)-COOH和缬氨酸为原料，合成Fmoc-Gln(Trt)-Val-COOH，然后用Fmoc-Gln(Trt)-Val-COOH和脯氨酸合成Fmoc-Gln(Trt)-Val-Pro-OH；(3)合成Fmoc-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin①以二氯甲烷为溶剂，将二氯甲烷溶胀后的2-CTCResin与Fmoc-Val-OH、N,N′-二异丙基乙胺在氮气保护下室温反应1～2小时，得到Fmoc-Val-2-CTCResin；②将Fmoc-Val-2-CTCResin用哌啶与N,N-二甲基甲酰胺体积比为1:4的混合液脱除Fmoc保护基后加入N,N-二甲基甲酰胺中，并加入Fmoc-Ser(tBu)-OH、1-羟基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐、N,N′-二异丙基乙胺，在氮气保护下室温反应1～2小时，得到Fmoc-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin；(4)合成Fmoc-Ile-Met-Asp-Gln(Trt)-Val-Pro-Phe-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin按照步骤(3)中②的方法，向Fmoc-Ser(tBu)-Val-2-CTCResin上依次连接Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Gln(Trt)-Val-Pro-OH、Fmoc-Ile-Met-Asp-OH，得到Fmoc-Ile-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张博，张忠旗，王慧，高长波，王斌，杨晓琳，赵金礼，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61