一种小分子多肽、及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体涉及一种小分子多肽、及其编码基因和在制备治疗慢性炎症疾病药物中的应用。小分子多肽，具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明专利技术基于非受体酪氨酸激酶(Fyn)与细胞因子信号通道抑制剂‑1(SOCS1)的相互作用结构域的确立，构建出了多肽(SS2)，并通过细胞生物学实验证明本发明专利技术的小分子多肽(SS2)具有抑制肠上皮细胞异常凋亡的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种小分子多肽及其编码基因，以及该小分子多肽在制备治疗慢性炎症疾病(抑制肠上皮细胞异常凋亡)药物中的应用。
技术介绍
克罗恩(Crohn’sdiseasesCD)是一种胃肠道慢性炎性肉芽肿性疾病。近年来，CD发病率逐年增加，且有终生复发倾向，重症患者迁延不愈，预后不良，严重影响患者的生活质量。长久以来克罗恩病的治疗是临床上的难点之一，本病尚无特殊治疗方法。无并发症时，支持疗法和对症治疗十分重要，可缓解有关症状。常用药物有水杨酸类和肾上腺皮质激素，其中柳氮磺胺吡啶和5-氨基水杨酸(5-ASA)适用于慢性期和轻、中度活动期病人，肾上腺皮质激素常用于中、重症或暴发型患者，许多病人出现并发症，需手术治疗，手术治疗用于完全性肠梗阻、肠瘘与脓肿形成、急性穿孔或不能控制的大出血，以及难以排除癌肿的患者。以上治疗方法中药物治疗用于抑制炎症活动，控制炎症缓解症状，改善全身状况，但是近年来大量临床观察发现5-ASA药物对缓解期维持疗效不肯定，抗生素因长期使用出现胃肠道副作用，糖皮质激素可以使患者免疫功能下降，对人体造成一系列毒副作用。而手术治疗的术后复发率很高。因此寻找新的克罗恩病的治疗手段十分重要。基于CD的发生发展及治疗预后的机制研究中，普遍认为在遗传易感的基础上，各种内外源性诱因的作用下肠道免疫系统发生异常，导致肠道的屏障结构破坏，最终导致疾病的发生。完整的肠黏膜上皮细胞组成重要的肠道屏障抵御外界毒素和抗原物质入侵，选择性允许营养物质、电解质和水的吸收，维持机体内环境稳态，所以肠上皮细胞异常凋亡是肠黏膜机械屏障破坏的主要发生机制。因此控制肠上皮细胞异常凋亡成为减轻炎症诱导上皮屏障破坏的关键环节。在炎症诱导肠道上皮细胞异常凋亡的同时，肠上皮细胞炎症环境下由细胞因子激活产生细胞因子信号通道抑制剂-1(SOCS1)表达增高，非磷酸化SOCS1抑制JAK1/STAT1信号通道，从而抑制下游靶caspase3,9的表达是抑制细胞凋亡修复肠道上皮抑制疾病进展的关键。但在CD发展过程中SOCS1被磷酸化，磷酸化的SOCS1失去抑制JAK1/STAT1信号通道作用，同时抑制凋亡能力受损，肠上皮细胞持续凋亡。近期研究表明，在炎症环境中还会发生严重的氧化应激反应，氧化应激诱导产生Fyn,CD发展过程中FYN表达增高，与肠上皮细胞凋亡密切相关，FYN属蛋白酪氨酸激酶家族(SRC家族)，通过调节多种细胞信号通道参与调节细胞凋亡等过程，主要通过磷酸化下游靶基因发挥作用。关于细胞因子信号通道抑制剂-1(SOCS1)由IL-1beta诱导抑制软骨代谢方面的相关报道，可参考文献(1、ArthritisResTher.2013；15(6):R191.Cytokinesignaling-1suppressorisinduciblebyIL-1betaandinhibitsthecataboliceffectsofIL-1betainchondrocytes:itsimplicationintheparadoxicaljoint-protectiveroleofIL-1beta.；2、ChoiYS,ParkJK,KangEH,LeeYK,KimTK,ChungJH,ZimmererJM,CarsonWE,SongYW,LeeYJ.)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种小分子多肽及其编码基因，以及该小分子多肽在制备治疗慢性炎症疾病药物中的应用。本专利技术基于非受体酪氨酸激酶(Fyn)与细胞因子信号通道抑制剂-1(SOCS1)的相互作用结构域的确立，构建出了多肽(SS2)，并通过细胞生物学实验证明本专利技术的小分子多肽(SS2)具有抑制肠上皮细胞异常凋亡的作用。本专利技术的目的主要通过以下技术方案实现：本专利技术的第一目的在于提供一种小分子多肽，具有如SEQIDNo：1所示的氨基酸序列。本专利技术的第二目的在于提供编码上述小分子多肽的基因，具有如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。本专利技术的第三目的在于提供小分子多肽在制备治疗慢性炎症疾病药物中的应用。进一步的，所述的慢性炎症疾病为克罗恩病、骨关节炎、肺炎、肝炎等。进一步的，所述的慢性炎症疾病是指肠上皮细胞在炎症环境下，由细胞因子激活产生的SOCS1被氧化应激诱导产生Fyn磷酸化，使SOCS1失去抑制细胞凋亡能力的疾病。进一步的，本专利技术还提供该小分子多肽及其编码基因在制备抑制肠上皮细胞异常凋亡药物中的应用。本专利技术的再一目的在于提供一种药物组合物，其包含上述小分子多肽以及药学上可接受的载体。进一步的，所述药学上可接受的载体为药学上可接受的赋形剂，悬浮剂，填充剂和/或稀释剂。本专利技术是基于CD发展中肠上皮细胞凋亡机制和治疗难点，通过抗凋亡基因治疗途径专利技术一段重组多肽，证明其具有抗凋亡的应用价值，并提供一段抗凋亡肽的特异的氨基酸序列和核苷酸序列。本专利技术的小分子多肽抑制肠上皮细胞异常凋亡的具体机理是：在肠上皮细胞炎症环境下由细胞因子激活产生的SOCS1本身具有抑制细胞因子信号通道的作用从而抑制JAK1/STAT1信号通道，抑制下游靶基因Caspase-3等分子表达从而抑制细胞凋亡，但是在炎症环境中还会发生严重的氧化应激反应，氧化应激诱导产生Fyn,分子Fyn磷酸化SOCS使其失去抑制细胞凋亡能力，研究发现Fyn与SOCS1发生作用的主要区域即为SS2区域，SS2过表达的细胞或组织内，SS2可以和Fyn发生竞争性的结合，抑制SOCS1与Fyn的结合，抑制SOCS1的磷酸化，恢复和维持SOCS1的抑制炎症反应和细胞凋亡的作用。本专利技术利用生物工程技术，基因重组一段71个氨基酸(aminoacid)多肽对应的DNA序列到GFP真核表达载体。经酶切和序列分析证明重组成功后，将此真核表达重组多肽转染到肠上皮细胞，免疫印迹证明多肽的蛋白表达，实现了多肽的重组。接着对多肽的抗凋亡功能进行了研究，细胞学和小鼠体内实验表明此多肽具有抑制肠上皮细胞凋亡和缓解小鼠克罗恩病的发生发展的功能。本专利技术发现CD发生部位FYN表达增高并且与SOCS1存在相互作用，分子Fyn磷酸化SOCS使其失去抑制细胞凋亡能力，研究发现Fyn与SOCS1发生作用的主要区域即为SS2区域，SS2抑制肠上皮细胞异常凋亡的具体机理是：SS2过表达的细胞或组织内，SS2可以和Fyn发生竞争性的结合，抑制SOCS1与Fyn的结合，抑制SOCS1的磷酸化，恢复和维持SOCS1的抑制炎症反应和细胞凋亡的作用。该多肽的设计为CD等慢性炎症疾病发生过程中缓解抑制炎症因子介导的肠上皮细胞凋亡提供新的药物设计和治疗靶点。附图说明图1为疾病活动指数(DAI)的检测；图2为大体观察及评分；图3为组织学评分；图4为WesternBlot检测SOCS1和FYN表达；其中，A为组织中两分子相互作用，B为细胞中两分子相互组作用；图5为WesternBlot检测SOCS1的SS2结构域和FYN之间的相互作用；图6为小分子多肽在细胞模型中的流式细胞术检测HT-29及凋亡情况；其中，a表示没有处理的细胞；b表示单独使用H2O2处理的细胞；c表示H2O2+SOCS1S1处理的细胞；d表示H2O2+SS2处理的细胞；e表示H2O2+SOCS1S3；f表示统计学；图7为小本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小分子多肽，具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种小分子多肽，具有如SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。2.一种编码权利要求1所述的小分子多肽的基因，具有如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的小分子多肽在制备治疗慢性炎症疾病药物中的应用。4.根据权利要求3所述的小分子多肽在制备治疗慢性炎症疾病药物中的应用，其特征在于：所述的慢性炎症疾病是指肠上皮细胞在炎症环境下，由细胞因子激活产生的SOCS1被氧化应激诱导产生Fyn磷酸化，使SOCS1失去抑制细胞凋亡能力的疾病。5.根据权利要求3所述的小分子多肽在制备治疗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张冬梅，刘晓娟，单晓航，倪润州，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32