The present invention provides a method for improving the direct seedling ratio of Chinese cabbage embryoid by using liquid culture technology. This method uses a special device for liquid medium, which is used as a medium containing 25 ~ 30g/L sucrose, 6 BA 0.2 ~ 0.3mg/L, ampicillin 0.1 ~ 0.15mg/L, pH 5.8 ~ 6 B5 medium. During the culture process, the aeration should be carried out to this medium, once every 15min is carried out, the aeration time is 2 ~ 3min, and the level of the level of the liquid level in the aeration process is not completely submerged in the embryo, at the temperature of 25 + 3, the light intensity is 3000 ~ 4000lx, and the number of seedlings can be counted after 20 to 30d under the condition of the photoperiod 16h/8h. The seedlings were succeeding and transferred. Through statistics and calculation, the ratio of direct seeding to embryoid is 80% to 90%, which is 1.5 to 2 times that of traditional culture.
【技术实现步骤摘要】
一种利用液体培养技术提高白菜胚状体直接成苗比率的方法
本专利技术涉及一种细胞育种
尤其涉及一种利用液体培养技术提高白菜胚状体直接成苗比率的方法。
技术介绍
小孢子培养是对新鲜的游离小孢子给予适当的培养基及培养条件使之发育成胚状体,进而发育成再生植株的技术,可快速得到双单倍体纯系作为亲本。应用于优势杂交育种,缩短育种年限,是一项实用的细胞育种技术。小孢子培养技术包括小孢子成胚以及胚状体成苗两个过程,成熟的小孢子培养技术应为小孢子成胚率高及胚状体直接成苗率高。小孢子胚状体直接成苗受到很多因素的影响,本领域常规接种胚状体使之成苗采用三角瓶、罐头瓶、组培瓶等容器,培养方式采用固体培养,效率低下,耗费大量的人力和时间,所以建立一种高效的小孢子直接成苗方法至关重要。常规操作步骤是培养基分装到100mL三角瓶中,将再生植株转入培养基后,在温度25±2℃,光照强度3000~4000lx,光周期16h/8h的条件下培养,本专利技术通过对培养培养方式的具体参数,进而实现高效的胚状体直接成苗的目的。
技术实现思路
本专利技术通过一种利用液体培养技术提高白菜胚状体直接成苗比率的方法,需要使用一个特制的液体培养装置。1)配制液体培养基:此培养基为含蔗糖25~30g/L,6-BA0.2~0.3mg/L,Amp0.1~0.15mg/L,pH5.8~6.0的B5培养基,培养基分装量至装置的塑料网平齐处,Amp成分采用过滤灭菌,其它成分采用121℃,20min高温湿热灭菌。2)在无菌操作台中将白菜胚状体转接入装置的塑料网上。3)培养过程中要向此培养基中进行曝气,每15min进行一次,曝气 ...
【技术保护点】
一种利用液体培养技术提高白菜胚状体直接成苗比率的方法,其特征在于:需要使用一个特制的液体培养装置。1)配制液体培养基:此培养基为含蔗糖25~30g/L,6‑BA 0.2~0.3mg/L,Amp0.1~0.15mg/L,pH 5.8~6.0的B5培养基,培养基分装量至装置的塑料网平齐处,Amp成分采用过滤灭菌,其它成分采用121℃,20min高温湿热灭菌。2)在无菌操作台中将白菜胚状体转接入装置的塑料网上。3)培养过程中要向此培养基中进行曝气,每15min进行一次,曝气时间2~3min,确保曝气过程中液面升高程度以不完全淹没胚状体为准。4)在温度25±3℃,光强度3000~4000lx,光周期16h/8h的条件下培养20~30d后可统计成苗数量,并将苗进行下一步地继代转接。
【技术特征摘要】
1.一种利用液体培养技术提高白菜胚状体直接成苗比率的方法,其特征在于:需要使用一个特制的液体培养装置。1)配制液体培养基:此培养基为含蔗糖25~30g/L,6-BA0.2~0.3mg/L,Amp0.1~0.15mg/L,pH5.8~6.0的B5培养基,培养基分装量至装置的塑料网平齐处,Amp成分采用过滤灭菌,其它成分采用121℃,20min高温湿热灭菌。2)在无菌操作台中将白菜胚状体转接入装置的塑料网上。3)培养过程中要向此培养基中进行曝气,每15min进行一次,曝气时间2~3min,确保曝气过程中液面升高程度以不完全淹没胚状体为准。4)在温度25±3℃,光强度3000~4000lx,光周期16h/8h的条件下培养20~...
【专利技术属性】
技术研发人员:戴速航,
申请(专利权)人:沈阳静冶生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:辽宁,21
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