The present invention provides a method for culturing embryogenesis rate and seedling rate improvement of microspore broccoli, in order to solve the low incidence, low seedling rate, long training period of the problems of the prior art microspore embryo. By adding NLN to the culture medium induced by thidiazuron (thidiazuron, TDZ), in order to improve the broccoli microspore embryogenesis and seedling survival rate. In the NLN induced medium with 0.05 ~ 0.45mg/L TDZ, the rate of embryogenesis increased by 1.6 to 2.2 times, and the rate of embryogenesis increased by 1.5 to 1.6 times.
【技术实现步骤摘要】
一种用于提高青花菜游离小孢子培养胚胎发生率及成苗率的方法
本专利技术涉及生物
,尤其涉及一种用于提高青花菜游离小孢子培养胚胎发生率及成苗率的方法。
技术介绍
青花菜是国际、国内市场十分畅销的一种名特蔬菜,营养价值与风味、蛋白质、氨基酸及维生素的含量都比较高,菜价较贵,种子也非常昂贵,因此选育优异的青花菜品种很重要。青花菜属典型的十字花科异花传粉植物,具有很强的杂种优势。利用小孢子培养方法获得纯合的亲本时间只需要一年,时间短,效率高,可以加快育种速度。青花菜的小孢子培养目前有尚有许多难出胚的基因型以及胚状体成苗率低,限制了这一技术在实际育种工作中的应用。
技术实现思路
本专利技术通过改良青花菜小孢子培养的培养基配方专利技术一种用于提高青花菜游离小孢子培养的胚胎发生率及成苗率的方法,建立高效的青花菜小孢子培养体系,为育种工作奠定基础。本专利技术所述的小孢子培养方法主要过程包括一种提高青花菜游离小孢子胚胎发生率及成苗率的方法,包括如下步骤:首先,选取花蕾长度在2~4cm之间的无裂蕾、虫蕾和病蕾的健康花蕾,流水冲洗3min,将挑选后的花蕾放入灭过菌的大烧杯内,依次经过30s的75%乙醇溶液、6~8min的0.1%HgCl2溶液、3次5min的无菌水消毒、灭菌和洗涤。再加入10~15mL含130g/L蔗糖的B5液体培养基,用无菌研棒挤压花蕾,使小孢子游离出来。将含有小孢子的悬浮液先用300目细胞筛过滤,再用40μm与50mL离心管配套的细胞筛过滤,收集滤液于50mL离心管中,1000~1200rpm离心3min。弃上清液,重复2次,所得沉淀物即为纯净的小孢子。其次 ...
【技术保护点】
一种用于提高青花菜游离小孢子培养胚胎发生率及成苗率的方法,其特征在于:包括如下步骤:首先,选取花蕾长度在2~4cm之间的无裂蕾、虫蕾和病蕾的健康花蕾,流水冲洗3min,将挑选后的花蕾放入灭过菌的大烧杯内,依次经过30s的75%乙醇溶液、6~8min的0.1%HgCl2溶液、3次5min的无菌水消毒、灭菌和洗涤。再加入10~15mL含130g/L蔗糖的B5液体培养基,用无菌研棒挤压花蕾,使小孢子游离出来。将含有小孢子的悬浮液先用300目细胞筛过滤,再用40μm与50mL离心管配套的细胞筛过滤,收集滤液于50mL离心管中,1000~1200rpm离心3min。弃上清液,重复2次,所得沉淀物即为纯净的小孢子;其次,将游离出的纯净小孢子沉淀物用含TDZ浓度为0.05~0.45mg/L的NLN培养基进行稀释培养。在稀释时使细胞密度保持在1×10
【技术特征摘要】
1.一种用于提高青花菜游离小孢子培养胚胎发生率及成苗率的方法,其特征在于:包括如下步骤:首先,选取花蕾长度在2~4cm之间的无裂蕾、虫蕾和病蕾的健康花蕾,流水冲洗3min,将挑选后的花蕾放入灭过菌的大烧杯内,依次经过30s的75%乙醇溶液、6~8min的0.1%HgCl2溶液、3次5min的无菌水消毒、灭菌和洗涤。再加入10~15mL含130g/L蔗糖的B5液体培养基,用无菌研棒挤压花蕾,使小孢子游离出来。将含有小孢子的悬浮液先用300目细胞筛过滤,再用40μm与50mL离心管配套的细胞筛过滤,收集滤液于50mL离心管中,1000~1200rpm离心3min。弃上清液,重复2次,所得沉淀物即为纯净的小孢子;其次,将游离出的纯净小孢子沉淀物用含TDZ浓度为0.05~0.45mg/L的NLN培养基进行稀释培养。在稀释时使细胞密度保持在1×105~2×105个...
【专利技术属性】
技术研发人员:戴速航,
申请(专利权)人:沈阳静冶生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:辽宁,21
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