狭长孢灵芝总三萜提取物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种真菌提取物，具体公开了狭长孢灵芝总三萜提取物及其制备方法与应用。本发明专利技术以狭长孢灵芝(Ganoderma boninense)为研究对象，对狭长孢灵芝总三萜提取物进行了提取工艺和生物活性研究，发现狭长孢灵芝总三萜提取物中含有较大量的三萜类化合物，经验证具有调节机体免疫力的作用，对机体具有多方面的保健和调节作用，具有很好的药用和食用价值，具有广阔的应用前景。

Long and glossy ganoderma lucidum total three terpene extract and preparation method and application thereof

The invention relates to a fungal extract, in particular discloses a total three terpene extract of long narrow spore of Ganoderma lucidum, a preparation method and an application thereof. The present invention by a Bao Lingzhi (Ganoderma boninense) as the research object, to narrow the total three terpenoid extract of Ganoderma lucidum spore of extraction and biological activity, was found to contain three terpenoids of ganoderma spore strip total three terpene extract, validated with regulation of immunity function, it has many aspects of health care and regulating effect on the body, has good medicinal and edible value, has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
狭长孢灵芝总三萜提取物及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种真菌提取物，具体地说，涉及狭长孢灵芝总三萜提取物及其制备方法与应用。
技术介绍
灵芝(Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst.)隶属于真菌门(Eumycota)、担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、灵芝科(Gamodermataceae)、灵芝属(Ganoderma)类。《中华本草》中记录“其性甘；味平；无毒；归肺、心、脾、肾经。益气血；安心神；健脾胃。主治虚劳、心悸、失眠、头晕、神疲乏力、久咳气喘、冠心病、矽肺、肿瘤。”《中国药典》中将灵芝收录为中药材，其中的灵芝多糖、三萜、核苷、生物碱、氨基酸多肽、微量元素等成分是其药效物质的主要基础，以三萜和多糖为其中主要活性成分。现代药理研究表明，灵芝三萜类化合物具有保肝、抗肿瘤、抗HIV-4及HIV-4蛋白酶活性、抗组织胺释放、抑制血管紧张素、抗氧化等作用。灵芝分类历史悠久，归类各有不同，《本草纲目》等古籍中以“六色”将灵芝归为：青芝、赤芝、黄芝、白芝、黑芝、紫芝。狭长孢灵芝Ganoderma.boninense隶属于担子菌门(Basidiomycota)，伞菌亚门(Agaricomycotina)，伞菌纲(Agaricomycetes)，多孔菌目(Polyporales)，灵芝科(Ganodermataceae)，灵芝属(Ganoderma)，该菌寄生于棕榈科植物，曾有文献报道其子实体提取物具有抗肿瘤生物活性，但没有检索到对调节机体免疫力方面的报道。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供狭长孢灵芝总三萜提取物及其制备方法与应用。为了实现本专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：第一方面，本专利技术提供了狭长孢灵芝(Ganodermaboninense)总三萜提取物，其制备方法包括如下步骤：1)以狭长孢灵芝子实体为原料，粉碎后按照一定比例加入有机溶剂浸泡2～10小时，浸泡后回流1～3次，每次提取2～3小时，过滤收集提取液；2)对提取液进行减压浓缩，获取狭长孢灵芝提取物；3)用有机溶剂对狭长孢灵芝提取物进行加热超声溶解，并将所得溶解液滴加到装有大孔树脂的柱床中进行静止吸附至少2小时，用水和不同浓度的有机溶剂对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离；4)收集洗脱液，浓缩获得狭长孢灵芝总三萜提取物。所得的狭长孢灵芝(Ganodermaboninense)总三萜提取物中含有狭长孢灵芝酮E(图2所示1)、狭长孢灵芝酮F(图2所示2)、狭长孢灵芝缩酮A(图2所示3)、狭长孢灵芝缩酮F(图2所示4)。进一步地，步骤1)中所述溶剂为水、70％v/v～100％v/v的甲醇、70％v/v～95％v/v的乙醇、100％v/v的乙酸乙酯、100％v/v的丙酮或100％v/v的二氯甲烷。进一步地，步骤1)中所述子实体与所述溶剂的质液比为1:3～1:10(w/v)。进一步地，步骤2)中减压浓缩时，醇提取液浓缩温度为35～60℃。步骤3)中加热超声溶解的温度为60～80℃。进一步地，步骤3)中所述有机溶剂为70％v/v～100％v/v的甲醇、70％v/v～95％v/v的乙醇、100％v/v的乙酸乙酯、100％v/v的丙酮或100％v/v的二氯甲烷。进一步地，步骤3)中大孔树脂可以是极性、中等极性、弱极性或非极性大孔树脂。进一步地，步骤3)中用水和浓度分别为50％v/v、70％v/v、100％v/v的甲醇溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，每一浓度洗脱3-5个保留体积；或用水和浓度分别为50％v/v、75％v/v、95％v/v的乙醇溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，每一浓度洗脱3-5个保留体积；或用水和浓度分别为50％v/v、70％v/v、90％v/v的丙酮溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，每一浓度洗脱3-5个保留体积；进一步地，步骤4)收集70％v/v和100％v/v的甲醇、75％v/v和95％v/v的乙醇或70％v/v和90％v/v的丙酮洗脱液。。第二方面，本专利技术提供一种狭长孢灵芝(Ganodermaboninense)总三萜的提取方法，包括如下步骤：1)以狭长孢灵芝的子实体为原料，粉碎后加入溶剂浸泡2～10小时，浸泡后回流提取1～3次，每次提取2～3小时，过滤收集提取液；2)对提取液进行减压浓缩，获取狭长孢灵芝提取物；3)用有机溶剂对狭长孢灵芝提取物进行加热超声溶解，并将所得溶解液滴加到装有大孔树脂的柱床中进行静止吸附2小时以上，用水和不同浓度的有机溶剂对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离；4)收集洗脱液，浓缩获得狭长孢灵芝总三萜提取物。作为优选，本专利技术提供了一种较佳的提取方法，按照该方法提取得到的提取物具有更优的活性和/或功效。所述优选的提取方法具体包括如下步骤：1)以狭长孢灵芝子实体为原料，粉碎后按照狭长孢灵芝和有机溶剂的重量比为1：(5～6)的比例加入乙酸乙酯浸泡2-5小时，浸泡后回流1-3次，每次提取2-3小时，过滤收集提取液；2)在35～60℃，对提取液进行减压浓缩，获取狭长孢灵芝提取物；3)在60-80摄氏度的温度范围内，用100％v/v的甲醇对狭长孢灵芝提取物进行加热超声溶解，并将所得溶解液以5mL/min的速度滴加到装有D101或AB-8大孔树脂的柱床中进行静止吸附至少2小时，用水和50％v/v、75％v/v、95％v/v的乙醇溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，且每一个浓度洗脱3-5个保留体积；4)收集70％和95％的乙醇洗脱液，浓缩获得狭长孢灵芝总三萜。第三方面，本专利技术提供了狭长孢灵芝总三萜提取物在制备调节机体免疫力的药物或食品中的应用。所述狭长孢灵芝总三萜提取物为含有狭长孢灵芝酮E(图2所示1)、狭长孢灵芝酮F(图2所示2)、狭长孢灵芝缩酮A(图2所示3)和狭长孢灵芝缩酮F(图2所示4)的混合物。优选为前述狭长孢灵芝总三萜提取物，或按照前述提取方法得到的狭长孢灵芝总三萜提取物。调节机体免疫力是指提高正常机体IFN-γ，IL-2，TNF-α等免疫因子的水平，增强机体免疫功能，也可指提高免疫抑制患者的IFN-γ，IL-2，TNF-α等免疫因子的水平，增强机体免疫功能，也包括提高放化疗引起的白细胞降低等；也可指抑制免疫亢进患者的抗自身抗体和总IgG水平，也包括对红斑狼疮类疾病的治疗/辅助治疗作用。第四方面，本专利技术提供了含有前述狭长孢灵芝总三萜提取物或由其制备的药物组合物或可食用的产品。所述药物组合物可包括一种或多种药学上可接受的辅料。所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、缓释剂等。所述药物组合物可为注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂、喷剂等剂型。各种剂型可以按照药学领域的常规方法制备。所述药物组合物可通过口服、胃肠内给药、注射、喷射、物理或化学介导等方法给药，或是被其他物质混合或包裹后给药。所述药物组合物同样具有调节机体免疫力的作用。所述可食用的产品可用于例如日常保健、以及调节机体免疫力相关方面的预本文档来自技高网...

【技术保护点】
狭长孢灵芝总三萜提取物，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：1)以狭长孢灵芝的子实体为原料，粉碎后加入溶剂浸泡2～10小时，浸泡后回流提取1～3次，每次提取2～3小时，过滤收集提取液；2)对提取液进行减压浓缩，获取狭长孢灵芝提取物；3)用有机溶剂对狭长孢灵芝提取物进行加热超声溶解，并将所得溶解液滴加到装有大孔树脂的柱床中静止吸附2小时以上，用水和不同浓度的有机溶剂对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离；4)收集洗脱液，浓缩获得狭长孢灵芝总三萜提取物。

【技术特征摘要】
2016.12.16 CN 20161117068641.狭长孢灵芝总三萜提取物，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：1)以狭长孢灵芝的子实体为原料，粉碎后加入溶剂浸泡2～10小时，浸泡后回流提取1～3次，每次提取2～3小时，过滤收集提取液；2)对提取液进行减压浓缩，获取狭长孢灵芝提取物；3)用有机溶剂对狭长孢灵芝提取物进行加热超声溶解，并将所得溶解液滴加到装有大孔树脂的柱床中静止吸附2小时以上，用水和不同浓度的有机溶剂对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离；4)收集洗脱液，浓缩获得狭长孢灵芝总三萜提取物。2.根据权利要求1所述的狭长孢灵芝总三萜提取物，其特征在于，步骤1)中所述子实体与所述溶剂的质液比为1:3～1:10，所述溶剂为水、70％v/v～100％v/v的甲醇、70％v/v～95％v/v的乙醇、100％v/v的乙酸乙酯、100％v/v的丙酮或100％v/v的二氯甲烷。3.根据权利要求1或2所述的狭长孢灵芝总三萜提取物，其特征在于，步骤3)中加热超声溶解的温度为60～80℃，所述有机溶剂为70％v/v～100％v/v的甲醇、70％v/v～95％v/v的乙醇、100％v/v的乙酸乙酯、100％v/v的丙酮或100％v/v的二氯甲烷。4.根据权利要求3所述的狭长孢灵芝总三萜提取物，其特征在于，步骤3)：用水和浓度分别为50％v/v、70％v/v、100％v/v的甲醇溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，每一浓度洗脱3-5个保留体积；或用水和浓度分别为50％v/v、75％v/v、95％v/v的乙醇溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，每一浓度洗脱3-5个保留体积；或用水和浓度分别为50％v/v、70％v/v、90％v/v的丙酮溶液对静止吸附样品后的大孔树脂柱进行梯度洗脱分离，每一浓度洗脱3-5个保留体积；步骤4)：收集70％v/v和100％v/v的甲醇、75％v/v和95％v/v的乙醇或70％v/v和...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宏伟，宝丽，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11