一种引起番茄酱腐败的枯草芽孢杆菌制造技术

公开了一种能引起番茄酱腐败的枯草芽孢杆菌ｘｊｔｐ００１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ｘｊｔｐ００１）ＣＣＴＣＣ．Ｎｏ．Ｍ２０８１４０。具有引起番茄酱腐败的作用，能造成番茄酱中总酸量升高、ｐＨ值下降、外观颜色加深、出现酸败味等现象。对于确定番茄酱腐败菌的检测，对促进番茄酱产业的快速发展，维护国际市场中番茄酱贸易的优势地位，均具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物菌种及在检测食品微生物中的应用领域，特别 是涉及到微生物菌抹及其在检测番茄酱腐败中的领域。
技术介绍
袋装或罐装番茄酱中由于不同原因造成微生物的污染，生存的微 生物许多可利用番茄酱中的一些营养物质造成产品的腐败。在对引起番茄酱腐败微生物的研究中，芽孢杆菌占50%,其中枯草芽孢杆菌为主 要的种类。针对由枯草芽孢杆菌引起番茄酱腐败方面的研究工作在中 国仍是一片空白。番茄酱属酸性罐头食品(pH4. 5以下)，在其中存活的微生物多为耐酸、 抗热性极强的杆菌、球菌等，它们的存在常常会导致罐头食品的腐败。国 外有文献报道，尼日利亚乳酸菌是番茄酱中的优势微生物，但是近年报道， 世界各地番茄酱中的优势微生物并不是尼日利亚乳酸菌，其缺乏相应科学 数据支持。而经过大量试验研究表明，经新疆进出口的番茄酱其微生物的 种群构成与国外报道不相同。番茄酱中的微生物种类很丰富，近6年对新 疆进出口番茄酱中微生物研究中分离出的芽孢杆菌占50%,葡萄球菌占 25°/。，其它杆菌占15%,酵母菌占3%,乳酸菌占2%及霉菌占1%，大肠菌群、 厌氧菌等占4%。数据表明芽孢杆菌为优势菌群。而当前国内外还没有报道 由枯草芽孢杆菌引起番茄酱腐败方面的研究内容。对枯草芽孢杆菌的研究国内外报道很多，主要涉及到其代谢产物方面 的研究，但作为检测引起番茄酱产品腐败变质的一种目标菌未见有所报道。
技术实现思路
针对目前导致番茄酱腐败的枯草芽孢杆菌的检测未见有所报道。近几 年， 一些国家和地区对进出口番茄酱要求检测造成产品腐败的主要微生物 项目，要求能够建立起检测番茄酱枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌作为主要 引起番茄酱腐败的微生物，对其研究现在仍为空白。本专利技术从新疆生产的变质的番茄酱中取样，筛选出 一抹具有 一定耐热性的芽孢杆菌(xjtpOOl ),经筌定为枯草芽孢杆菌，该菌林能导致番茄 腐败，是目前检测番茄腐败菌中主要菌抹。本专利技术根据番茄酱产品腐败现象，从变质的番茄酱中进行微生物 菌种的培养、分离与筛选，获得一批菌，并从中分离筛选出xjtp001，编 号为CCTCC NO.M208140,从而提供了 一4朱能引起番茄酱产品腐败的细 菌，经微生物学分类与鉴定，属于枯草芽孢杆菌属、枯草芽孢杆菌本专利技术具体提供了xjtp001细菌，命名为枯草芽孢杆菌，其能够有 效导致番茄酱产品腐败变质。参照《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》 (《Aerge/， x他/ m/0/分We鹏〃c勘"e"'0-/。^7》)第九版和《常 用细菌系统鉴定手册》等对该xjtp001菌林进行形态学测定，生理生化 检测、分子生物学鉴定。xjtp001菌抹已于申请日前保藏于布达佩斯条 约微生物国际保藏单位中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。地址湖 北省武汉市武昌珞珈山，邮编430072。保藏日期是2008年10月5曰，保藏号是CCTCC. No. M208140。经微生物学鉴定为枯草芽孢杆菌xjtpOOl (勘c///^ 57/々〃//sxjtp001)。优先生长于平酸菌增菌培养基表面(培 养基组分为胰蛋白胨5. Og、酵母浸膏5. Og、葡萄糖5. Og、可溶性淀粉2. Og、磷酸氢二钾4. Gg、 1。/。溴甲酚紫酒精溶液lmL、 蒸馏水1000mL) 35°C 37。C下培养24小时的菌落细胞呈圆形、表面皱 褶、呈乳白色、不透明、菌落大小在l. 90 X 2. 20mm左右。菌体经革兰 氏染色染色为革兰氏阳性杆菌、有芽孢，且中生，培养温度35。C 37 。C, PH为7. 0~7.2,耐盐浓度为12。/。NaCL，能水解淀粉、溶解明胶、还 原硝酸盐、过氧化氢酶阳性、V-P测定阳性、MP试验阴性、能利用多种 糖。菌株为芽孢杆菌属(勘c/7/m)中的成员。通过全自动微生物鉴 定系统VITEK-32分析、16SrRNA同源分析。表明xjtp001菌抹为枯草芽 孢杆菌(&"7/"《,以下简称枯草芽孢杆菌。本专利技术还提供了一抹枯草芽孢杆菌xjtp001引起番茄酱腐败的现 象。在正常无枯草芽孢杆菌污染的番茄酱中，人为加入xjtp001枯草 芽孢杆菌，将枯草芽孢杆菌xjtp001制成0. 5麦氏浓度的菌悬液，按 10% (体积/重量)的比例加入番茄酱中，放入37。C左右的环境下，每 4小时取^样进行番茄酱中PH的测定。12小时左右，番茄酱中总酸由6. 7变为8. 9, PH值由4. 36下降到4. 15 ,番茄酱体由红色或深红 色变为深褐色。气味由较好的气味及滋味、无异味变为具有较刺鼻的 酸味等现象，表明本专利技术的一抹枯草芽孢杆菌xjtp001为引起番茄酱 腐败的微生物。通过对番茄酱中一抹枯草芽孢杆菌xjtp001的研究， 建立了优化的分离方法。掌握了引起番茄酱产品腐败的成因。通过实施本专利技术具体的技术指标，实现本
技术实现思路
，可以达到以 下有益效果。本专利技术获得的枯草芽孢杆菌xjtp001 (勘c/7/m xjtpOOl)CCTCC. No.M208140，具有引起番茄酱腐败的作用，能造成番茄 酱中总酸量升高、PH值下降、外观颜色加深、出现酸败味等现象。 附图说明图1显示为枯草芽孢杆菌xjtp001对番茄酱液总酸量的影响，图 中-命-为枯草芽孢杆菌在番茄酱液中37。C培养0h-24h,对番茄酱液总 酸量的影响；图2显示为枯草芽孢杆菌xjtp001对番茄酱液pH的影响，图中- -为枯草芽孢杆菌在番茄酱液中37。C培养Oh-24h中PH的变化情况。具体实施方式 实施例一通过对新疆昌吉、玛纳斯、石河子等地采集生产的番茄酱，并同时 收集变质的番茄酱。封口处用75%酒精消毒，无菌称取一定量的番茄酱样 品于平酸增菌培养基中，37。C恒温培养24小时，平皿上相继长出圆形、表面不 透明、有皱褶、呈乳白色的菌落，对分离的微生物进行全自动微生物鉴定 系统VITEK-32分析、16SrRNA同源分析,xjtp001芽孢杆菌为枯草芽 孢杆菌(^c/"m 6^〃7/s )。 实施例二对从新疆不同地区采集的变质的番茄酱称取25克于225ml的平酸 增菌培养液中(胰蛋白胨5g、酵母浸膏5g、葡萄糖5g、可溶性淀粉62g、磷酸氲二钾4g、 1%溴曱酚紫酒精溶液lmL、蒸馏水1000mL), 37。C恒温培养24小时后，再转入固体平酸增菌培养基中，继续在37。C 恒温培养24小时，挑取表面不透明、有皱褶、呈乳白色的圆形菌落， 经涂片染色确定为革兰氏阳性芽孢杆菌。 实施例三本专利技术能引起番茄酱腐败的枯草芽孢杆菌xjtp001,其微生物学特性有为杆状、革兰氏阳性、具有芽孢生成。经全自动孩i生物鉴定系统VITEK-32分析，获得xjtp001菌的生理生化特性，其结果与枯草芽孑包杆菌(勘c///〃51 ^〃/A)相似性达99%。生物学特性如表l所示。表l菌抹xjtp001的生理生化特征特征特征特征NEG (阴性对照)—RAF(棉籽糖)+KCN (硫氰酸钾)+sue (蔗糖)+SAL(水杨素)+NCL (7%氯化钠)+TZR (四氮峻红)—AGA(扁桃苷)_MEN (苦杏仁酸)+TAG (塔格糖)—INU(菊糖)+OLD (竹桃霉素)_GLU (葡萄糖)+RIB(核糖)+NAA (乙酸钠)+I NO (肌醇)—MLT(甘露糖)+本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能引起番茄酱腐败的枯草芽孢杆菌ｘｊｔｐ００１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓｘｊｔｐ００１）ＣＣＴＣＣ．Ｎｏ．Ｍ２０８１４０。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄玲，蒋刚强，刘小兰，田延河，杨忠，
申请(专利权)人：新疆出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]