表达嗜热毛壳菌基因cbh3的毕赤酵母工程菌株制造技术

本发明专利技术是一种表达嗜热毛壳菌（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）热稳定外切－β－１，４－葡聚糖酶基因ｃｂｈ３的毕赤酵母工程菌Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ　ＧＳ－ＣＢＨ３－２７。通过ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＡＣＥ方法从嗜热毛壳菌获得外切－β－１，４－葡聚糖酶基因ｃｂｈ３，然后将得到的外切－β－１，４－葡聚糖酶基因ｃｂｈ３表达载体ｐＰＩＣ９Ｋ／ｃｂｈ３导入到毕赤酵母ＧＳ１１５中，从中筛选出了表达外切－β－１，４－葡聚糖酶的酵母工程菌ＧＳ－ＣＢＨ３－２７。该工程菌外切－β－１，４－葡聚糖酶表达量高达１．７ｍｇ／ｍＬ，酶在６０℃是稳定的，在７０℃保温６０ｍｉｎ，仍有６０％的活性，８０℃的半衰期为１０ｍｉｎ，具热稳定性，用于转化植物纤维素的生物降解，具有较高经济价值和社会价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程，具体地说是一种表达嗜热毛壳菌(C力aeto则'顺 t力ei7^p力W湖)热稳定外切-e-l，4-葡聚糖酶基因的毕赤酵母工程菌株 尸fc力j'a pastarj's GS—CBH3—27。(二)
技术介绍
纤维素在自然界储量极其丰富，是第一大可再生资源。纤维素的生物降解是通过纤维素酶实现的。纤维素酶是一个复合酶系，包括内切-P-l，4-葡聚糖 酶(EC3. 2. 1.4) (EG)、 1，4-纤维二糖水解酶(EC3. 2. 1.91) (CBH)及e-1，4_ 葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21) (BG)。这三种酶协同作用，彻底切割1,4-糖苷 键，使纤维素最终降解为葡萄糖。其中内切-1，4-葡聚糖酶是纤维素酶系最 主要的成分，它首先作用纤维素，水解纤维素链非结晶区的1,4-糖苷键将纤 维素链打开，它对整个纤维素的降解起重要的作用。纤维素酶广泛应用于轻工、医药、环保、食品加工、饮料工业、纺织工业、 可再生资源的综合利用等方面，被认为是最有应用潜力的酶制剂之一。目前国 内外纤维素酶主要由嗜温真菌曲霉和木霉生产，但存在菌种产酶量低、活力低、 酶稳定性差及成本高本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达嗜热毛壳菌（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ　　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）热稳定外切－β－１，４－葡聚糖酶基因ｃｂｈ３的酵母工程菌株ＧＳ－ＣＢＨ３－２７，其特征在于，通过ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＡＣＥ方法从嗜热毛壳菌获得热稳定外切－β－１，４－葡聚糖酶基因ｃｂｈ３，将该基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体ｐＰＩＣ９Ｋ，获得表达重组质粒ｐＰＩＣ９Ｋ／ｃｂｈ３，转化毕赤酵母ＧＳ１１５，从中筛选出表达热稳定外切－β－１，４－葡聚糖酶基因ｃｂｈ３的毕赤酵母工程菌株ＧＳ－ＣＢＨ３－２７，该菌用于植物纤维素的生物降解。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李多川，赵春青，李亚玲，李安娜，李华，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]