表达疏棉状嗜热丝孢菌基因1n的毕赤酵母工程菌株制造技术

本发明专利技术是一种表达疏棉状嗜热丝孢菌（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ　ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）热稳定脂肪酶基因ｌｎ的毕赤酵母工程菌Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ　ＧＳ－ＬＮ－６。通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从疏绵状嗜热丝孢菌获得脂肪酶基因ｌｎ，将其克隆并插入到毕赤酵母整合表达载体ｐＰＩＣ９Ｋ中，然后将得到的脂肪酶基因ｌｎ表达载体ｐＰＩＣ９Ｋ／ｌｎ导入到毕赤酵母ＧＳ１１５中，再从中筛选出一种表达脂肪酶的酵母工程菌ＧＳ－ＬＮ－６。该工程菌经诱导培养６ｄ后，脂肪酶表达量为１．９３ｍｇ／ｍＬ，酶在６０℃保温６０ｍｉｎ，仍有８２％的活性，在７０℃保温６０ｍｉｎ，仍有５０％的活性，８０℃保温６０ｍｉｎ仍有４５％的活性，具热稳定性，可用于热稳定脂肪酶的生产菌株，有重要的经济价值和社会价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程，具体地说是一种表达疏棉状嗜热丝孢菌 (77 ei7 ，yces h/wginams)热稳定脂肪酶基因^的毕赤酵母工程菌株Pj'c/ j's /7S5"tarz'51 GS-LN-6。(二)
技术介绍
脂肪酶(lipase, EC3. 1.1.3)，全称三酰甘油酰基水解酶，广泛存在于 生物体内。它能够催化油脂上甘油酯键的水解，也可催化酯交换、酯化、醇解 和酸解等反应。微生物来源的脂肪酶由于作用多样、易于培养、产量丰富等特 点而被广泛用于工业生产，其中热稳定脂肪酶的研究和开发更是具有重耍的商 业价值。疏棉状嗜热丝孢菌(7/ ei7WM/yceS h/7i^i'/709tAS)是一种分布广泛、生长上限温度较高的真菌。它能够产生热稳定的具有重要工业价值的脂肪酶，但是野 生菌用于大规模的工业生产脂肪酶，还存在一些尚未解决的问题。如嗜热菌培 养条件比较苛刻，嗜热酶的大规模发酵生产需要特殊设备，而且产酶效率低， 从而造成产品成本增加，因此限制了它的应用。解决这一问题的有效途径是应 用分子生物学手段，将热稳定脂肪酶基因导入屮温型微生物酵母中高效表达， 利用酵母生长快、易本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达疏棉状嗜热丝孢菌（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ　　ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）热稳定脂肪酶基因ｌｎ的酵母工程菌株ＧＳ－ＬＮ－６，其特征在于，通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从疏棉状嗜热丝孢菌获得热稳定脂肪酶基因ｌｎ，将该基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体ｐＰＩＣ９Ｋ，获得表达重组质粒ｐＰＩＣ９Ｋ／ｌｎ，转化毕赤酵母ＧＳ１１５，从中筛选出表达疏棉状嗜热丝孢菌热稳定脂肪酶基因ｌｎ的毕赤酵母工程菌株ＧＳ－ＬＮ－６，该菌株可作为热稳定脂肪酶的生产菌株。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李多川，郑燕，李安娜，李华，赵春青，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]