高温、高传真脱氧核糖核酸(DNA)聚合酶(HiFi Bst)制造技术

本发明专利技术表明，一种将嗜热脂肪芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ），经紫外线等处理制备所获得的高温、高传真ＤＮＡ聚合酶（ＨｉＦｉ Ｂｓｔ）。具有高效地切除不配对的核苷酸的活力，使ＤＮＡ顺序反应具有独特的专一性，从而保证了ＤＮＡ顺序测定图谱的高质量。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用于ＤＮＡ顺序测定的高温、高传真ＤＮＡ聚合酶（ＨｉＦｉ Ｂｓｔ）和它的分析系统，其特征在于：（１）它切除配对的核苷酸，也切除不配对的核苷酸；（２）切除不配对的核苷酸的速度大于切除配对核苷酸的速度；（３）引物的设计为：５′ ＣＡＴＴＴＴＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＡ ３′（４）ＤＮＡ模板设计（ａ）３′－ＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＣＴＴ－５′（ｂ）３′－ＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＣＧＧ－５′（５）引物的同位素标记：５′ ＣＡＴＴＴＴ ＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＡ ３′－ＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＣＴＴ－↓α↑［ａ２］ｐｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，Ｔａｑ酶ＣＡＴＴＴＴＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＡＧＡ→Ａ→Ａ（→表示［３２］↑Ｐ标记）（６）将标记引物与ＤＮＡ模板配对： 引物＋ ＋＊＊＊５′ＣＡＴＴＴＴＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＡＧＡ＊Ａ＊３′３′－ＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＣＧＧ－５′５′ ＣＡＴＴＴＴＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＡＧＡ＊Ａ＊ ３′３′－ＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧ ＴＣＴＴ－５′。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：洪国藩，翟峰，
申请(专利权)人：中国科学院上海生物化学研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]