【技术实现步骤摘要】
一种耐高温重组β-甘露聚糖酶及其应用
本专利技术涉及一种耐高温重组β -甘露聚糖酶及其应用，属于生物工程
。
技术介绍
甘露低聚糖是由甘露糖与葡萄糖以β_1，4糖苷键连接形成的聚合度为2~10的功能性寡糖。甘露低聚糖具有促进人和动物肠道内以双歧杆菌为代表的有益菌的增殖、改善肠道内菌群结构等功能性低聚糖共同的理化特性，同时也有清除自由基、增强机体抗氧化性的能力，若将甘露低聚糖作为功能性食品添加剂应用于工业开发，应用前景十分广阔。魔芋是我国云南、四川、陕西、贵州等地盛产的多年生草本植物，其芋块茎中含有丰富的甘露聚糖。目前，魔芋粉主要被作为食用粗纤维或作为食品添加剂，开发利用程度不够。利用β_甘露聚糖酶将魔芋水解制成甘露低聚糖，可大大拓宽魔芋粉的应用范围，提高原料附加值，具有广泛的经济效益和社会效益。酶法制备甘露低聚糖的核心技术是采用高活力甘露聚糖酶和高浓度魔芋胶溶液。但目前发酵酶活力低，导致酶的生产和使用成本高；同时由于魔芋胶水溶液的粘度非常大，40g/L的魔芋胶已呈凝胶状态，可阻止酶对它的水解作用。因此国内外文献报道的魔芋胶酶水解工艺均采用10~3...
【技术保护点】
一种耐高温重组β‑甘露聚糖酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。
【技术特征摘要】
1.一种耐高温重组β -甘露聚糖酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。2.一种耐高温重组β_甘露聚糖酶的编码基因，其特征在于，是满足下列要求的核苷酸序列之一: (1)编码如SEQID No:2所示氨基酸序列的核苷酸序列； (2)如SEQID No: I所示的核苷酸序列。3.一种表达耐高温重组甘露聚糖酶的重组菌株，其特征在于，该菌株为基因组上整合了权利要求2所述的β-甘露聚糖酶的编码基因的毕赤酵母。4.根据权利要求3所述的重组菌株，其特征在于，所述的毕赤酵母为分泌型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。5.构建权利要求3所述的重组菌株的方法，其特征在于，它包括如下步骤: (1)应用常规重组质粒构建方法构建出重组密码子优化质粒pPICZa A - man,该质粒以AOXl为启动子，并含有SEQ ID No:1所示的β -甘露聚糖酶基因和Zeocin抗性基因； (2)将重组密码子优化质粒pPICZa A - man用Sac I酶切线性化后，电击转化入毕赤酵母宿主菌中，即构成表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母重组菌株； (3)将重组菌株经过甲醇利用表型筛选、外源基因多拷贝整合筛选以及诱导表达筛选后，即筛选出过量表达甘露聚糖酶的重组工程菌。6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的重组质粒pPICZ a A - man是密码子偏好性优化后合成的目的基因man插入到质粒pPICZ a A中形成的重组质粒。7.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，在将重组密码子优...
【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳嘉，倪玉佳，周旻昱，郑兆娟，李鑫，朱均均，徐勇，勇强，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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