用于定量高密度脂蛋白胆固醇的方法技术

用于定量ＨＤＬ胆固醇的方法，包括向血清中加入一种选自聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚的表面活性剂和一种用于测定胆固醇的酶试剂，以及任选的一种能够抑制血清脂蛋白胆固醇与上述酶试剂之间反应的物质，在脂蛋白中的ＨＤＬ胆固醇优选与上述酶试剂反应的时间阶段内测定所反应的胆固醇的量。利用这种方法。可以方便有效地定量ＨＤＬ胆固醇，无需诉诸于离心等任何预处理。因此，适用于多种自动分析仪。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种方法，该方法用少量样本，通过简单的操作，并且无需进行离心等操作，即可有效地仅与非高密度脂蛋白(HDL)的脂蛋白的胆固醇分开地定量HDL胆固醇。
技术介绍
胆固醇等脂质在血清中与脱辅蛋白质配合生成脂蛋白。根据物理性质的不同，脂蛋白分为乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等等。在这些脂蛋白中，LDL已知是致病性物质之一，包括动脉硬化，而HDL已知显示抗动脉硬化活性。在流行病学上，HDL胆固醇的水平已知与动脉硬化性疾病发生频率呈反比。当前，HDL胆固醇的测量广泛用于预防或诊断缺血性心脏病。已知用于测量HDL胆固醇的方法例如，用离心分离法从其他脂蛋白中分离HDL，然后进行胆固醇测量；另一种方法是用电泳法从其他脂蛋白中分离HDL后，将其脂质染色，再测量显色强度。不过，这些方法尚未成为常规方法，因为它们牵涉一个或多个这样的问题，即操作是令人厌烦的，不能处理大量样本。目前，普遍和广泛用于临床试验的HDL胆固醇的测量方法是沉淀法，在该方法中，向样本中加入沉淀剂以凝集除HDL以外的脂蛋白，离心除去所得凝集物，然后测量如此分离到的仅含有HDL的血清胆固醇。该方法比超速离心或电泳简单，但是由于包括了加入沉淀剂和进行分离的操作，这就要求每份样本的用量较大，牵涉产生分析误差的潜在问题，也不可能使整个分析步骤完全自动化。另一方面，已对HDL胆固醇的酶分级定量方法进行了研究。已知的方法例如包括在一种胆汁盐和一种非离子型表面活性剂的存在下进行酶催反应(JP 63-126498A)。该方法利用了这样一个事实，即在反应的最初阶段，酶催反应与LDL浓度成比例进行，然后与HDL胆固醇浓度成比例进行。不过仍然存在准确度问题，因为不能完全区分开与HDL胆固醇的反应和与其他脂蛋白胆固醇的反应。已知的方法还包括预先使除HDL以外的脂蛋白凝集，使HDL胆固醇单独进行酶催反应，再使酶失活，同时再次溶解凝集物，然后测量吸光度(JP 6-242110A)。不过，该方法需要至少三步操作加入试剂，因此该方法只能适用于特定的自动分析仪，实用性不够广泛。而且，由于再次溶解凝集物，使用高浓度的盐，因此从对分析设备的损害和试剂的处理观点上看，该方法也不是令人满意的。进一步地，日本专利2600065号公开了一种方法，该方法结合使用一种用在一般的沉淀法中以沉淀除HDL以外的脂蛋白的沉淀剂和一种用于测量HDL中未沉淀的胆固醇的普通的胆固醇测量剂。不过，无论按照该专利的哪个实施例，都不可能测量HDL胆固醇。因此，该专利被认为是这样一种专利，它错误地没有包括专利技术的必要特征，不能用作现有技术。专利技术的公开关于血清脂蛋白胆固醇的测量，本专利技术人以多种方式进行了研究。在研究过程中发现，当在一种能够溶解脂蛋白的特殊表面活性剂的存在下进行血清与一种胆固醇定量酶试剂之间的反应时，只有HDL胆固醇首先反应，继HDL反应之后是VLDL胆固醇反应，最后，延迟相当长时间后，LDL胆固醇反应。进一步研究结果发现，根据需要选择测量点，能够单独测量HDL胆固醇，选择测量点以使能够测量依赖于HDL胆固醇浓度的第一个反应，通过使系统中存在一种抑制血清脂蛋白胆固醇与胆固醇定量试剂之间反应的物质，可以长时间保持仅依赖于HDL胆固醇浓度的反应，这些方法也能适用于自动分析仪，从而完成了本专利技术。本专利技术因此提供了高密度脂蛋白胆固醇的定量方法，该方法包括向血清中加入一种选自聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚的表面活性剂和一种胆固醇定量酶试剂；然后在高密度脂蛋白胆固醇优先与胆固醇定量酶试剂反应的时间内测量反应量的高密度脂蛋白胆固醇。本专利技术也提供了上述HDL胆固醇的定量方法，其中进一步加入一种物质，该物质具有抑制血清脂蛋白胆固醇与胆固醇定量酶试剂之间的反应的作用。本专利技术也提供了定量酶和试剂盒，有利于实施上述全部方法。附图的简要说明附图说明图1显示由本专利技术方法得到的分析数据与由实施例1沉淀法得到的分析数据之间的相关性；图2阐明由本专利技术方法得到的分析数据与由实施例2沉淀法得到的分析数据之间的相关性。实施本专利技术的最佳方式用在本专利技术方法中的表面活性剂(以下称为“脂蛋白溶解剂”)选自聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚，是一种具有溶解脂蛋白作用的表面活性剂。这些表面活性剂，作为前者的商业上可得到的实例，包括“Emulgen A-60”(花王公司产品)，作为后者的商业上可得到的实例，包括“Emulgen B66”(花王公司产品)。这些表面活性剂既可以单用也可以合用。表面活性剂的用量因表面活性剂的种类而异，对此没有特别的限制。对于每种使用该试剂的分析仪，都能凭经验确定，以便设置分析仪的灵敏度，允许在所需测量时间内检测HDL胆固醇。一般来说，所用表面活性剂的浓度优选为0.01至5wt％。按照本专利技术的定量方法可以优选在一种物质的存在下进行，该物质(以下称为“反应抑制剂”)具有抑制血清脂蛋白胆固醇与胆固醇定量酶试剂之间的反应的作用。与没有反应抑制剂存在的情况相比，反应抑制剂的存在能够使仅依赖于HDL胆固醇浓度的反应保持更长时间。用在本专利技术中的反应抑制剂的例证是对脂蛋白表现出结合亲和性的物质，以及不溶解脂蛋白的表面活性剂。它们既可以单用也可以合用。对脂蛋白表现出结合亲和性的物质(以下称为“结合物质”)实例可以包括聚阴离子与能够生成二价金属盐的物质的组合。它们也可以是与HDL配合生成沉淀的物质。聚阴离子的具体实例可以包括硫酸葡聚糖、磷钨酸和肝素，能够生成二价金属盐的物质实例可以包括二价金属氯化物，例如MgCl2、CaCl2、MnCl2和NiCl2，和它们的水合物。这些结合物质既可以单用也可以合用。结合物质的用量因其类型而异，对此没有特别的限制。不过可取的用量范围分别是，以在反应中的最终浓度表示，聚阴离子量为0.002至10wt％，能够生成二价金属盐的物质量为0.01至5wt％。进一步地，不溶解脂蛋白的表面活性剂(以下称为“脂蛋白非溶解剂”)例如可以选自聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物、聚氧乙烯烷基醚硫酸盐和烷基苯磺酸盐。其中，聚氧乙烯烷基醚优选为聚氧乙烯鲸蜡基醚(商品为“Emulgen 220”(花王公司产品))；聚氧乙烯烷基苯基醚优选为聚氧乙烯壬基苯基醚(商品为“Emulgen 913”(花王公司产品))；聚氧乙烯-聚氧丙烯缩合物优选为“Pluronic F-88”(朝日电化工业株式会社产品(Asahi Denka Kogyo K.K.))；聚氧乙烯月桂基醚硫酸钠盐(商品为“EMAL 20C”(花王公司产品))；烷基苯磺酸盐优选为十二烷基苯磺酸钠。这些脂蛋白非溶解剂既可以单用也可以合用。对其用量没有特别的限制，不过可取的用量范围是，与样本混合后的浓度量为0.01至5wt％，尤其为0.05至1wt％。关于向血清样本中加入脂蛋白溶解剂和胆固醇定量酶试剂(以下称为“胆固醇试剂”)，既可以各自加入，也可以同时以混合物加入。另一方面，可以向脂蛋白溶解剂和胆固醇试剂之一或其混合物中加入反应抑制剂。当使用多种反应抑制剂时，它们可以一起混合，使用方式可以类似于反应抑制剂单用的情况。作为替代选择，可以分别向脂蛋白溶解剂和胆固醇试剂中本文档来自技高网...

【技术保护点】
高密度脂蛋白胆固醇的定量方法，该方法包括向血清中加入一种选自聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚的表面活性剂和一种胆固醇定量酶试剂；然后在所述高密度脂蛋白中的所述胆固醇优先与所述胆固醇定量酶试剂反应的时间内测量所述高密度脂蛋白中的所述胆固醇的反应量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：中西一夫，中村光浩，日野浩一，真锅满久，
申请(专利权)人：第一化学药品株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]